陈书琨
- 作品数：33 被引量：206H指数：8
- 供职机构：深圳出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：深圳出入境检验检疫局科研项目国家质检总局科技计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 美洲型猪蓝耳病病毒高致病性变异株RT-LAMP检测方法的建立被引量：12
- 2010年
- 设计两套反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)引物,建立了检测美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株的RT-LAMP方法。采用RT-LAMP方法与实时荧光RT-PCR方法检测58份病料,结果一致,但RT-LAMP方法的灵敏度大约高出10倍。RT-LAMP方法特异性良好,检测猪瘟、伪狂犬病和细小病毒等均未出现交叉反应。结果表明,建立的美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株RT-LAMP检测方法具有特异、灵敏、高效和简便的特点,在我国猪蓝耳病快速检测领域将有广阔的应用前景。
- 曾少灵孙洁秦智锋阮周曦林庆燕花群义曹琛福杨俊兴吕建强张彩虹陈兵陈书琨
- 关键词：RT-LAMP猪蓝耳病
- 猪蓝耳病病毒RT-LAMP和压电免疫蛋白传感器快速新型检测技术研究
- 秦智锋花群义卢体康詹爱军吕建强曾少灵孙洁林庆燕刘仲明李沛生阮周曦陈兵陈书琨张彩虹曹琛福
- 1987年，美国首次报道了猪蓝耳病,后该病呈世界性流行，给各国养猪业造成巨大损失。我国自1996 年首次分离到PRRSV病毒以来，该病先后在广东、上海、福建、内蒙古等省暴发和流行，目前该病在我国已普遍存在。但2006年～...
- 关键词：
- 关键词：猪蓝耳病病毒RT-LAMP
- 蛋白A法压电免疫传感器检测H9亚型禽流感病毒的研究被引量：5
- 2009年
- 为建立可以检测H9N2亚型流感病毒的蛋白A法免疫传感器,将石英晶片谐振的高灵敏度与免疫反应的特异性相结合,用蛋白A(SPA)在镀金膜的石英晶体电极偶联抗H9亚型流感病毒的单抗构建传感器探头形成免疫传感器。检测结果表明,该方法具有较好的特异性,不与H5亚型禽流感病毒和NDV反应;检测灵敏度达到20个EID50;组成的检测器对相应的流感病毒响应良好,该法与鸡胚病毒分离法检出流感病毒的符合率达到91%。本文结果为检测流感病毒免疫传感器的进一步深入研究奠定了基础。
- 詹爱军王新卫金鑫陈书琨卢体康花群义秦智锋秦爱建
- 关键词：H9亚型禽流感病毒
- 多重实时荧光PCR检测牛、山羊和绵羊源性成分被引量：45
- 2009年
- 根据牛、山羊和绵羊线粒体细胞色素b基因序列,设计特异性引物和以不同荧光素标记的Taqman探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立能同时鉴别牛、山羊和绵羊源性成分的多重实时荧光PCR方法。采用本文方法与国标GB/T20190-2006方法分别对17种不同源性动物DNA和200份不同来源样品DNA进行牛羊源性成分检测,数据显示两者检测结果符合率达100%,特异性相当。与国标方法相比,本试验方法不需电泳、酶切和测序,即可在一个PCR反应中同时鉴别检测牛、山羊和绵羊3种源性成分,检测效率提高近3倍;灵敏度更高,比国标方法灵敏10倍;适用性更广,除了饲料,还适用于肉品、奶品、生皮和动物油脂等动物产品的牛羊源性成分检测。
- 曾少灵秦智锋阮周曦花群义卢体康吕建强陈书琨曹琛福张彩虹孙洁陈兵吴绍精
- 关键词：细胞色素B基因
- 鹿流行性出血病病毒高通量液相芯片检测方法的建立被引量：2
- 2010年
- 为建立可检测鹿流行性出血病病毒(EHDV)的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中EHDV的VP7基因进行序列分析,设计EHDV特异性探针并用生物素标记,与荧光编码微球偶联后与病毒VP7基因的PCR产物杂交反应,用液相芯片检测仪(Liquichip200)检测荧光信号建立了EHDV快速高通量液相芯片检测方法。检测结果显示,该法具有较好的特异性,不与其他虫媒病病毒反应;检测灵敏度为100个TCID50。建立了快速检测EHDV的液相芯片技术,为进一步搭建EHDV快速高通量检测平台奠定了基础。
- 詹爱军王新卫陈书琨孙洁陈兵阮周曦花群义
- 关键词：液相芯片
- 禽流感抗体胶体金半定量检测方法的建立被引量：1
- 2009年
- 针对目前禽流感抗体主要采用的HI检测方法操作步骤繁琐,耗时较长且必须在实验室内进行判定的缺陷,为了提高检测效率和通关速度,借助胶体金半定量检测技术,以禽流感HI抗体滴度24为临界值,研制了禽流感抗体胶体金半定量检测卡。首先复苏了含A/Chicken/Hongkong/SZ-HI/1997(H5N1)病毒株HA基因重组质粒pETHA的阳性菌,IPTG诱导表达4h后,SDS-PAGE电泳对HA重组蛋白进行了确证。以纯化的HA重组蛋白和灭活的禽流感病毒为主要材料,采用夹心法原理研制了禽流感抗体胶体金半定量检测卡,确定了检测卡的最佳组合反应模式、最佳上样量、最佳反应时间、最适的胶体金颗粒、最佳硝酸纤维素膜和吸水垫。所建立的禽流感抗体胶体金半定量检测卡特异性强,与其他家禽抗原阳性标准血清交叉反应小。检测卡的检测结果与HI检测结果基本一致,检测HI抗体滴度为24鸡血清时结果符合率达94%。
- 陶虹秦智锋卢体康储成群曾少灵林庆燕花群义吕建强詹爱军陈书琨孙洁曹琛福阮周曦陈兵毕英佐
- 关键词：禽流感抗体检测
- 猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒A多重荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：15
- 2018年
- 为对引起腹泻症状的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒A(PRoVA) 3种病毒同时快速地鉴别检测,本研究对GenBank中登录的TGEV的S基因、PEDV的S基因、PRo VA的NSP基因进行序列分析,分别设计了针对3种病毒的特异性引物和用3种荧光基团标记的核酸探针,通过条件优化建立了针对这3种病毒的多重荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法能够特异性检测PEDV、TGEV和PRo VA,而与其它病原无交叉反应;对TGEV、PEDV和PRo VA的最低检测量分别为1.12拷贝/μL、39拷贝/μL和25拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于5%;该方法与商品化的试剂盒检测结果符合率达100%。该方法快速、敏感,检测结果准确可靠,为猪病毒性腹泻疾病的流行病学调查和分子生物学快速诊断奠定了基础。
- 李军蔡良语陈兵刘建利孙洁陈书琨林庆燕陶虹吴绍强卢体康陈金顶秦智锋
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒猪流行性腹泻病毒荧光定量RT-PCR检测
- 三种家禽病毒多重RT-LAMP检测方法的建立与应用被引量：9
- 2016年
- LAMP检测方法由于具有扩增速度快、现场检测的潜力而备受关注。但目前的研究多是聚焦于单重LAMP扩增,只能进行单个目标的检测。本研究首次将禽流感、新城疫和传染性法氏囊三种病毒性疾病作为一个检测整体,建立了对三种疫病同时进行筛选检测的多重RT-LAMP检测方法。本研究首先通过减少LAMP标准反应体系中的外引物来减少引物之间的相互干扰;其次以Calcein为核酸染料,建立了禽流感、新城疫和传染性法氏囊三种病毒实时荧光多重反转录环介导等温扩增(multiplex real-time reverse transcription-LAMP,mRT-LAMP)检测方法;三是对该法特异性、敏感性及准确性进行了评价。试验结果显示:所建立的mRT-LAMP检测方法可对AIV、NDV和IBDV同时进行筛选检测,灵敏度可达到10个基因拷贝,与单重LAMP检测的灵敏度相当;所建立的方法特异性强,与其他病原体无交叉反应;小规模田间试验显示该法可用于三种病毒的快速筛选检测,结果准确可靠。结果表明:本实验建立的mRT-LAMP检测法可满足三种家禽病毒的快速筛选检测需求,具有一定的应用价值。
- 陈兵孙洁陈书琨曾少灵林庆燕刘建利陶虹曹琛福阮周曦吕建强杨俊兴吴绍强卢体康秦智锋
- H5N1亚型禽流感疫苗对供港鸡免疫效果评价
- 2007年
- 针对供港活鸡饲养周期长（85日龄～105日龄），禽流感抗体滴度要求高（21／28检测样品抗体滴度需≥4log2）的特点，在原有H5N2疫苗对供港活禽免疫效果不理想的情况下，对哈尔滨兽医研究所研制的H5N1亚型禽流感疫苗进行了免疫效果评估。结果显示，H5N1疫苗免疫效果明显高于原有的H5N2疫苗，初步推荐该禽流感灭活疫苗对供港鸡场的免疫程序为：首免7日龄～10日龄，0．3mL／只，皮下注射；二免45日龄，0．5mL／只，肌肉注射。
- 秦智锋钟安清林庆燕罗焕全姚绵鹏范万红陈书琨许保柱阮周曦吕建强曾少灵毕英佐田国彬
- 关键词：免疫程序
- 基于VP73表达抗原和单抗的非洲猪瘟c-ELISA试剂盒研制
- 曾少灵卢体康花群义杨俊兴吕建强秦智锋廖立珊阮周曦张彩虹曹琛福唐金明孙洁林庆燕刘建利陶虹陈泽华陈书琨宗卉
- VP73蛋白是非洲猪瘟病毒的主要抗原性结构蛋白,基因结构稳定保守,即使是不同毒株其DNA序列或氨基酸序列的相似性都很高,可超过96%以上.VP73蛋白在自然感染中可诱导产生抗体,也是最早产生的抗体种类之一,且抗原性稳定,...
- 关键词：
- 关键词：猪瘟病毒免疫学检测试剂盒
