魏玉华
- 作品数：27 被引量：208H指数：8
- 供职机构：北京大学人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金卫生部临床学科重点项目北京大学人类疾病基因研究中心科研基金更多>>
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- 结缔组织生长因子对Kupffer细胞诱导的肝星状细胞激活的影响
- 2009年
- 目的探讨肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）表达对Kupffer细胞（KC）诱导的HSC激活的影响。方法构建含CTGF的RNA干扰载体。将肝星状细胞系rHSC-99分为3组：对照组、空载体组和RNA干扰组。采用RT—PCR方法检测HSC的CTGF表达。分离培养KC，建立各组HSC与KC的共培养体系，MTF检测HSC的增殖情况；RT—PCR检测HSC的TGF—β1、Ⅰ型前胶原的表达；Western Blot检测HSC的TGF—β1表达，ELISA检测共培养上清中Ⅰ型胶原的表达；免疫荧光化学检测HSC的α—SMA的表达。结果构建CTGF的RNA干扰载体Psilencer 3．1 H1-Neo—CTGF。RNA干扰后CTGF表达降低22％。KC得率为5×10^7，活率〉98％。在HSC和KC共培养体系中，RNA干扰HSC的CTGF表达后，与KC共培养的HSC活化和增殖明显被抑制，与对照组相比，HSC的增殖降低29％（t=20．17，P〈0．01）。Ⅰ型前胶原和α-SMA的表达下降38％，细胞培养上清中Ⅰ型胶原的分泌量下降48％（t=12．18，t=7．81，t=15．96，均P〈0．05）。TGF—β表达则没有明显的变化。结论阻断HSC的CTGF表达能抑制由KC诱导的HSC激活。
- 李涛宋盛晗冷希圣朱继业彭吉润魏玉华
- 关键词：肝星状细胞结缔组织生长因子库普弗细胞
- 腺病毒介导反义Smad4基因大鼠体内转移对实验性肝纤维化的治疗作用被引量：3
- 2004年
- 徐新保何振平梁志清林凯魏玉华于鑫冷希圣
- 关键词：实验性肝纤维化ECM分泌金属蛋白酶信号传导通路
- 白细胞介素10对大鼠肝损伤时肝星状细胞转化生长因子β_1和血小板源生长因子基因表达的影响被引量：5
- 2005年
- 目的探讨白细胞介素10(IL10)在大鼠肝损伤过程中对肝星状细胞(HSC)表达转化生长因子β1(TGFβ1)和血小板源生长因子(PDGF)的影响。方法治疗组用含有IL10基因的腺病毒载体通过尾静脉转染大鼠(n=11),同时设立空载体组(n=12)和空白对照组(n=12),另给以皮下注射四氯化碳,每周2次,8周后处死大鼠,离体肝脏用胶原酶灌注以及密度梯度离心方法分离HSC。应用酶联免疫吸附法测大鼠血清中IL10水平,逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹检测HSC的TGFβ1和PDGF表达。结果治疗组的IL10水平明显高于空载体组和空白对照组(P<005);治疗组HSC的TGFβ1和PDGF的mRNA、蛋白表达水平均低于空载体组和空白对照组(P<001)。结论IL10可以通过下调HSC的TGFβ1和PDGF的表达来减轻肝损伤时HSC的激活程度。
- 熊亮发冷希圣魏玉华李涛郭晏同秦致中彭吉润
- 关键词：TGFΒ1HSC肝损伤鼠肝密度梯度离心
- 应用广谱抗体CK3-6H5检测细胞角蛋白在人类上皮组织来源的肿瘤细胞系中的表达被引量：5
- 2007年
- 目的应用广谱抗细胞角蛋白(Cytokeratin,CK)抗体CK3-6H5检测上皮组织来源的肿瘤细胞系中CK的表达,并研究应用此抗体检测血液循环中此类肿瘤细胞的敏感性。方法应用CK3-6H5标记QGY-7703等26种人类上皮组织来源的肿瘤细胞系、人Burkitt淋巴瘤细胞系Raji、人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat以及健康志愿者外周血单个核细胞,通过免疫荧光显色和免疫细胞化学技术检测其中CK的表达情况;以表达CK的人肝癌细胞系QGY-7703作为靶细胞,以不同的比例分别掺入到健康志愿者PBMC中,以免疫磁珠去除CD45+的白细胞,对肿瘤细胞进行富集,流式细胞仪检测其中CK+CD45-肿瘤细胞数目,分析用CK3-6H5检测外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)的敏感性。结果所有上皮组织来源肿瘤细胞系均表达CK,而健康志愿者和淋巴瘤细胞系Raji、T淋巴细胞白血病细胞株中未检测到CK表达。当向2×108个PBMC中掺入20个QGY-7703细胞时,经免疫磁珠富集后,行FACS分析,仍能检测到12个肿瘤细胞。结论CK3-6H5抗体复合物可以识别常见的上皮来源的肿瘤,应用CK3-6H5抗体标记肿瘤细胞,采用免疫磁珠富集技术以及流式细胞技术,可以用于有效检测外周血中上皮来源的肿瘤细胞。
- 于鑫魏玉华彭吉润郭立民赵丽君公磊王卉李澍冷希圣
- 关键词：细胞角蛋白流式细胞技术
- 融合快速培养的树突细胞体外诱导特异性抗肝癌免疫反应
- 2005年
- 目的用培养健康志愿者外周血CD14+单核细胞获得的成熟树突细胞与肝癌细胞系HCCLM3细胞构建融合细胞,在体外观察和评价这类融合细胞的功能。方法从HLA-A2阳性的健康人外周血中分离出CD14+细胞,在树突细胞完全培养基中经过48h培养及促成熟获得成熟的树突细胞(称之为FastDC)。以50%聚乙二醇和10%二甲基亚砜为融合剂融合树突细胞与肝癌细胞系HCCLM3细胞,细胞融合成功后进行融合细胞刺激自体T细胞增殖及CD8+T细胞特异性杀伤实验,并与树突细胞组、HCCLM3组及树突细胞和HCCLM3混合组进行比较。结果用48h培养获得的树突细胞与肝癌细胞系HCCLM3细胞所构建的融合细胞能有效刺激自体T细胞的增殖反应,所活化的CD8+T细胞分泌IFN-γ的水平(3d为400pg/ml±60pg/ml,5d为1030pg/ml±160pg/ml,7d为1260pg/L±180pg/L)高于其他组,而且能以MHC-Ⅰ类分子途径特异性杀伤HCCLM3细胞。结论从外周血CD14+细胞48h培养所获树突细胞与肝癌细胞系HCCLM3细胞构建的融合细胞体外能有效诱导特异性杀伤HCCLM3细胞的免疫反应。
- 关心冷希圣彭吉润魏玉华王卉袁兰
- 关键词：单核细胞树突细胞
- 黑色素瘤抗原基因在肝细胞癌细胞株中的表达被引量：3
- 2001年
- 吕建锋冷希圣彭吉润张佑彬翁山耕牟东成魏玉华杜如昱
- 关键词：肝细胞癌黑色素瘤抗原基因基因表达
- 反义Smad_4基因对贮脂细胞系CFSC生物学特性的影响被引量：11
- 2004年
- 目的 探讨通过反义Smad4基因转移阻断转化生长因子 β1(TGF β1)的信号传导后对贮脂细胞部分生物学特性的影响。方法 分别构建、重组了含有反义Smad4基因序列的复制缺陷型腺病毒表达载体AdvATSmad4和空病毒表达载体Adv0。将两种复制缺陷型腺病毒扩增纯化 ,再分别转入贮脂细胞系CFSC内 ,测定它们生长曲线、3 H掺入率 (3 H TdR)、脯氨酸掺入等部分生物学特性的变化 ,并用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、Western印迹和免疫组织化学等方法检测转基因细胞Smad4和细胞外基质的表达。结果 与正常对照组CFSC和转染Adv0的CFSC细胞相比较 ,转染AdvATSmad4的CFSC细胞内有反义Smad4表达 ,其生长曲线、3 H TdR、脯氨酸掺入等均有不同程度的降低 ,且其合成分泌Smad4和细胞外基质减少。结论 反义Smad4基因可以抑制贮脂细胞内源性Smad4的表达 ,抑制贮脂细胞的生长、繁殖和细胞外基质的产生 ,可作为抗肝纤维化基因治疗的选择之一。
- 徐新保冷希圣何振平梁志清林凯于鑫魏玉华
- 关键词：生物学特性转化生长因子Β1信号传导
- 胶原酶及灌流时间对大鼠肝细胞分离效果的影响被引量：10
- 2000年
- 目的 研究肝细胞分离方法 ,提高肝细胞分离质量。方法 用两种质量分数均为0 .0 5 %胶原酶溶液 (Ⅰ和Ⅳ型 )经门静脉灌注肝脏 ,分离大鼠肝细胞。分别于 5、10、15min灌流肝脏 ,观察对肝细胞活率及产量的影响。将肝细胞溶液用质量分数为 0 .0 2 %胶原酶溶液孵育 10min ,观察孵育对肝细胞活率的影响。结果 Ⅳ型胶原酶消化效果明显优于Ⅰ、Ⅳ型和Ⅰ型 ,灌流 10min细胞存活率分别为 (89.5± 3 .5 ) %和 (5 8.0± 14.0 ) % ,而产量分别为 (2 .5± 0 .2 )× 10 11个 /L和 (0 .9± 0 .5 )× 10 11个 /L ,差异有非常显著性 (P <0 .0 0 1) ,细胞培养及细胞组织化学证实分离细胞的结构和功能正常。低浓度的胶原酶孵育能明显提高肝细胞的活率。结论 Ⅳ型胶原酶可获得良好的肝细胞分离效果。胶原酶孵育能提高细胞活率。
- 于聪慧冷希圣魏玉华刘继超杜如昱
- 关键词：胶原酶
- 大鼠肝星状细胞中生长抑素受体表达的研究被引量：8
- 2005年
- 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测肝星状细胞(HSC)中5个生长抑素受体(SSTR)亚型的表达情况,从侧面探索生长抑素影响肝纤维化的作用机制.
- 宋盛晗冷希圣李涛彭吉润秦致中赵力魏玉华于鑫
- 关键词：生长抑素受体肝星状细胞鼠肝HSC活细胞共聚焦显微镜
- 改良法大鼠肝星状细胞的分离培养及鉴定被引量：50
- 2001年
- 目的 :改良大鼠肝星状细胞 (hepaticstellatecells,HSC)的分离培养及鉴定方法 ,使之简便易行 ,高效可靠。方法 :采用肝离体胶原酶灌注消化 ,低速离心去除肝细胞 ,密度梯度离心法分离HSC ,采用台盼蓝染色排斥法鉴定细胞活率 ,desmin加GFAP免疫细胞化学双染色法鉴定HSC纯度。结果 :采用改良法 ,每只大鼠的HSC得率为( 2 .5 4± 0 .13)× 10 7个 ,细胞活率为 ( 98.8± 0 .7) % ,高于旧方法的HSC得率 [( 2 .18± 0 .18)× 10 7个 ,P <0 .0 1]和活率 ( 94.3± 0 .6 ) % ,P <0 .0 1]。用desmin加GFAP免疫细胞化学双染色法鉴定 ,HSC纯度为 ( 96 .8± 1.0 ) % ,高于单用desmin鉴定的纯度 ( 91.8± 2 .2 ) % (P <0 .0 1)。结论 :改良的大鼠HSC分离培养方法简便易行又经济 ,在保证纯度的同时 ,提高了得率和活率。采用desmin加GFAP免疫细胞化学双染色法鉴定细胞纯度 。
- 翁山耕冷希圣魏玉华彭吉润郑恩涛程继华张佑彬吕建锋杜如昱
- 关键词：肝星状细胞肝硬化病因学
