侯瑞
- 作品数：14 被引量：47H指数：5
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：重庆市科技攻关计划国家自然科学基金四川省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自然科学总论文化科学更多>>
- 毕赤酵母表达肽抗生素hPAB-β的纯化被引量：6
- 2008年
- 目的在成功构建肽抗生素hPAB-β重组毕赤酵母的基础上,深入探讨酵母表达hPAB-β的规模化纯化方法。方法采用高密度发酵法在3.7L发酵罐中对pPIC9K-hPAB-β/GS115优5重组菌株进行发酵,收集发酵液,依次采用W-UF-Ⅱ过滤系统超滤、反相层析、阳离子交换、分子筛层析等纯化技术对目标表达产物逐级进行纯化,目的蛋白用15%的Tricine-SDS-PAGE电泳进行跟踪分析。最终纯化产物的生物学活性用平板琼脂扩散法进行测定。结果在培养至工程菌菌体湿重约200～250g/L时,以甲醇诱导培养基诱导目的蛋白表达,48h后菌体湿重达280g/L,目标产物表达量约75mg/L。发酵液经Mr10000膜超滤,达到去除大部分酵母色素和浓缩样品的目的(体积浓缩约2/3)。再经反相层析、离子交换、分子筛层析纯化,最终目的产物的纯度达98%以上,得率达32.5%。且纯化的目的蛋白具有良好的杀灭金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的活性。结论酵母表达肽抗生素hPAB-β经膜超滤、反相层析、离子交换和分子筛层析四步纯化,实现了去除非目的蛋白、酵母色素及脱盐的目的,为规模化制备hPAB-β创造了前提。
- 陈志瑾丛延广周莹冰侯瑞胡福泉饶贤才
- 关键词：毕赤酵母肽抗生素发酵纯化
- 碘液在芽孢染色中的应用研究被引量：1
- 2016年
- 目的探寻一种满意的芽孢染色方法 ,同时该方法能克服染料加温后挥发给实验操作人员带来的身体伤害。方法以碘液为媒染剂,用冷染方法替代传统芽孢加温染色,然后进行细菌涂片、干燥、固定、染色。初染液为石炭酸复红5 min,碘液媒染1 min,95%乙醇脱色5 s,碱性美兰复染1 min。比较石炭酸复红染色后加碘液、石炭酸复红染色不加碘液、石炭酸复红加温染色不加碘液的染色效果。结果石炭酸复红染色后加碘液与石炭酸复红加温染色不加碘液的染色效果相同,石炭酸复红染色不加碘液也能看出芽孢,但不明显。结论用碘液助染可获得满意的芽孢染色结果,且用该法可减少石炭酸挥发给实验操作人员带来的危害。
- 金晓琳金浩龙侯瑞熊坤陈志瑾
- 关键词：碘苯酚
- 细胞培养与PCR法检测生殖器疱疹病毒的对比研究被引量：5
- 2008年
- 目的：比较不同方法检测生殖器疱疹病毒感染的效率。方法：采用病毒培养和PCR法检测疑为生殖器疱疹病毒感染者标本60例，并用PCR作病毒分型。结果：根据病史及临床表现确诊的生殖器疱疹患者标本60例中，病毒培养法阳性36例，阳性牢60％（36／60）；PCR检测单纯疱疹病毒（HSV）阳性45例，阳性率75％（45／60），和病毒培养相比，差异非常显著（χ^2=26．76，P〈0．01）；PCR分型结果显示阳性标本均为单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）。水疱和脓疱标本的病毒培养和PCR检测阳性率均较高（80．0％～93．3％），糜烂、结痂、斑丘疹标本检测中PCR阳性率（20．0％～66．7％）高于病毒培养（0～33．3％）。结论：对疑为生殖器疱疹患者作病原学诊断，采集水疱、脓疱标本进行病毒分离或PCR检测较佳。
- 陈志瑾黎庶杨杰侯瑞胡福泉饶贤才
- 关键词：生殖器疱疹单纯疱疹病毒多聚酶链反应
- 肽抗生素hPAB-β在毕赤酵母中的表达与活性鉴定被引量：10
- 2007年
- 目的构建表达人源肽抗生素hPAB-β的重组毕赤酵母,为大量制备hPAB-β奠定基础。方法用PCR及引物延伸法得到天然及优化的hPAB-β序列,克隆入pPIC9K质粒,转化DH5α大肠埃希菌,用酶切和核苷酸测序鉴定。重组质粒经SalⅠ酶线性化,整合入毕赤酵母GS115中,在DNA,mRNA及蛋白水平鉴定阳性重组子。结果构建的含天然及优化序列的重组质粒酶切均可得到相应大小的插入片段,与预期相符,测序结果表明序列和阅读框均正确。线性化的重组质粒转入GS115后,得到7个不同的高拷贝阳性转化子,均能表达重组肽并具有良好的抑菌活性。结论本研究成功构建含天然及优化hPAB-β序列的重组毕赤酵母工程菌,能够用于肽抗生素hPAB-β的制备。
- 侯瑞饶贤才陈志瑾杨杰胡晓梅丛延广谭银玲胡福泉
- 关键词：毕赤酵母
- 肽抗生素hPAB-β在毕赤酵母中的表达、纯化与活性鉴定
- 研究背景:
肽抗生素/(peptide antibiotics/)是生物体基因编码的、具有抗微生物活性的小肽。它通常由12～60个氨基酸所组成,分子量小于10kD,是生物体天然免疫的重要组成部分,是宿主...
- 侯瑞
- 关键词：肽抗生素毕赤酵母高密度发酵蛋白质纯化抗菌活性
- 文献传递
- 培养赏析科学论文的能力
- 本文阐述了社会转型期科学技术的地位和作用，阐明了科学论文有了创新性,才会有生命力，强调了发现文稿的科学性、创新性的能力对科技编辑是多么的重要，科技编辑只有不断地学习才会不断地提高。
- 金晓琳侯瑞李海鸥
- 关键词：科技期刊科学论文
- 文献传递
- 重组毕赤酵母高密度发酵表达肽抗生素hPAB-β及其抑菌活性初步鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的探讨hPAB-β工程菌的高密度发酵方法,鉴定发酵产物中目的肽的活性。方法采用补料分批培养方法,在3.7 L发酵罐中对重组酵母菌进行高密度发酵,温度控制在30℃,pH值范围为4.95～5.05,在菌体湿重达到200～250 g/L后开始诱导,经过约50 h甲醇诱导后结束发酵。对发酵上清进行反相层析、分子筛层析以及反相高效液相色谱纯化,通过抑菌实验对纯化产物进行活性鉴定。结果3次高密度发酵在菌体湿重分别达到235.0 g/L、210 g/L和264.8g/L时进行诱导表达,发酵上清中目标肽的表达量分别达73.7 mg/L、76.6 mg/L和74.3 mg/L。发酵上清通过反相层析、分子筛层析以及反相高效液相色谱纯化,获得重组肽抗生素hPAB-β,该重组蛋白经抑菌实验显示了较好的抑菌活性。结论成功实现了酵母工程菌的高密度发酵,为下一步规模化制备hPAB-β奠定了基础。
- 侯瑞饶贤才丛延广陈志瑾谭银玲杨杰胡福泉
- 关键词：毕赤酵母高密度发酵
- 嗜酸乳杆菌3-磷酸甘油醛脱氢酶的分离纯化被引量：8
- 2009年
- 目的分离纯化嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)ATCC 4356的3-磷酸甘油醛脱氢酶。方法利用硫酸铵分级沉淀法、亲和层析、阴离子交换和分子筛层析对嗜酸乳杆菌GAPDH进行了分离纯化。通过N端测序鉴定了纯化产物;并用分子筛测定了嗜酸乳杆菌GAPDH的相对分子质量(Mr)。结果纯化产物在SDS-PAGE胶上呈现Mr为3.7×104的单一条带,产量为0.9 mg/L(嗜酸乳杆菌培养物)。N端测序结果证明纯化产物为嗜酸乳杆菌GAPDH。分子筛测定的GAPDH的Mr为7.08×104,表明嗜酸乳杆菌GAPDH是二聚体。结论通过该纯化方案,可大量获得电泳纯的嗜酸乳杆菌GAPDH,为进一步研究其免疫功能以及开发为免疫促进剂打下了基础。
- 潘渠丛延广侯瑞陈志谨胡福泉邱岳王广科
- 关键词：3-磷酸甘油醛脱氢酶嗜酸乳杆菌纯化二聚体
- 羊毛硫抗生素研究进展
- 肽抗生素是由生物体基因编码的具有抗菌活性的多肽物质。人、两栖动物、昆虫、植物乃至细菌都可以成为肽类抗生素的生产者。不同种类肽抗生素的结构有很大差异,如细菌产生的细菌素中很多氨基酸都可经过高度修饰,亦可含有特殊的化学结构。...
- 侯瑞饶贤才
- 文献传递
- 金葡菌TG-TPase嵌合基因在甲醇营养型酵母中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的设计耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)耐药相关TG-TPase嵌合基因,构建其真核表达质粒,为嵌合基因的高效、分泌型表达奠定基础。方法在序列结构分析的基础上,设计引物从MRSA菌株中扩增其耐药性相关转糖基酶(TGase)和转肽酶(TPase)活性片段,进一步用酶切连接等分子生物学操作构建TG-TPase嵌合基因,亚克隆至酵母表达质粒pPIC9K中,转化DH5α大肠埃希菌。经酶切、PCR和核苷酸测序鉴定正确的重组质粒用SalⅠ线性化,整合入甲醇营养型毕赤酵母GS115中,在DNA和基因转录水平鉴定出阳性重组酵母。结果采用PCR从MRSA基因组中扩增得到了873bp的TGase片段和1044bp的TPase片段。以酶切连接构建的TG-TPase嵌合基因经酶切、PCR鉴定,能获得约1900bp的融合片段,与预期结果相符,测序表明序列和阅读框均正确。线性化的重组质粒转化GS115后,得到5个高拷贝阳性转化子,经诱导表达和PCR鉴定,这些转化子能转录出目的基因的mRNA。结论成功构建了含TG-TPase嵌合基因的重组毕赤酵母工程菌,为进一步高效制备嵌合蛋白、进而利用其酶学活性进行抗耐药性金葡菌抑制剂的筛选创造前提。
- 杨杰饶贤才侯瑞胡晓梅陈志瑾丛延广谭银铃朱军民周莹冰胡福泉
- 关键词：MRSATGASE毕赤酵母
