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冉雪琴: 作品数：223 被引量：594H指数：11; 供职机构：贵州大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划贵州省农业攻关项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>

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三个猪品种Myf5基因的克隆及序列分析: 2014年; 为明确猪Myf5基因的蛋白结构及功能位点，从香猪、大自猪和大白×长白杂交猪背最长肌提取总RNA，采用RT-PCR技术克隆Myf5基因，其cDNA长893bp，包括完整的开放阅读框768bp，编码255个氨基酸。将所测序列与GenBank上已知猪种序列进行相似性比较，结果表明：香猪Myf5基因中有3个碱基变异，其中2个突变不改变编码的氨基酸为无义突变，1个突变使其编码的氨基酸由甲硫氨酸（M）变为亮氨酸（L）。大白猪没有碱基变化；大白×长白杂交猪Myf5基因中的1个突变，使其编码氨基酸由甘氨酸（E）变为谷氨酸（G）。将香猪与其他物种进行核苷酸和氨基酸编码区序列的相似性分析及生物信息学分析。相似性分析表明，香猪Myf5基因氨基酸编码区序列与绵羊、牛、马、兔、黑猩猩、非洲象和小鼠的相似性较高，均在88％以上，推测Myf5基因在哺乳动物具有一定的保守性；Myf5蛋白二级结构以无规则卷曲为主，其次为a螺旋，偶有B转角。预测Myf5蛋白不含信号肽序列，有29个磷酸化位点。; 袁恬冉雪琴王芳; 关键词：基因克隆 RT-PCR技术 GENBANK 蛋白二级结构

应用促卵泡激素基因SINE标记测定大约克猪纯合度被引量：1: 2010年; 为了使猪种引进有便捷、准确的检测手段,采用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法,检测了120头大约克种猪的纯合度。结果表明:受检母猪FSHβ基因的BB纯合基因型频率为82.5%,AB杂合基因型频率为17.5%,未检测到AA纯合基因型,经计算B等位基因的频率明显高于A等位基因频率。表明,该批次大约克猪存在一定比例的内二元或内三元杂交猪,应加强管理,严格控制再引种的纯度。该检测方法适用于区分国内地方猪品种和欧洲猪品种的纯合度,为引种种猪的纯合度检测提供准确的鉴定手段,有良好的应用前景。; 李升赵星艳张兆强王三铭王嘉福冉雪琴; 关键词：大约克猪 FSHΒ基因分子标记 SINE

敌敌畏与马拉硫磷对猪肾细胞PK15增殖抑制分析被引量：1: 2020年; [目的]为了研究有机磷化合物在体外对猪肾细胞损伤作用。[方法]选择敌敌畏和马拉硫磷作用猪肾细胞系PK15。MTT比色法测量2种有机磷化合物对细胞抑制作用,荧光染色和DNA ladder法检测它们对PK15的致凋亡作用。同时检测氧化相关因子超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和PON1基因m RNA水平。[结果]敌敌畏和马拉硫磷抑制PK15细胞的生长呈时间-剂量效应,并能诱导PK15产生较明显的凋亡现象,同时能使细胞中的超氧化物歧化酶活性下降、丙二醛水平上升。[结论]2种有机磷农药可使细胞的抗氧化能力下降,致使细胞中的氧自由基水平上升,可能是有机磷化合物致细胞凋亡、损伤的因素之一。; 龙天文李升徐霖冉雪琴王嘉福; 关键词：敌敌畏马拉硫磷细胞凋亡 PK15细胞

非洲猪瘟病毒P72蛋白合成肽疫苗的构建及其免疫效力评估被引量：1: 2022年; 【目的】构建非洲猪瘟病毒CAS19-01/2019株(GenBank登录号:MN172368.1)结构蛋白P72的合成肽疫苗,通过免疫小鼠评估合成肽疫苗的免疫效力。【方法】利用ProtParam、SOPMA等软件分析P72蛋白的理化性质与结构信息,通过ABCpred、SVMtrip、IEDB预测P72蛋白的T细胞与B细胞抗原表位,筛选出显著的表位多肽区域,合成多肽辅以弗氏佐剂腹腔注射免疫小鼠,检测免疫组小鼠产生的特异性抗体、T淋巴细胞亚群、脾脏淋巴细胞增殖、细胞因子白介素4(IL-4)、IL-2、γ干扰素(IFN-γ)、免疫球蛋白(IgG),从体液免疫与细胞免疫角度评估合成肽的免疫效力。【结果】综合分析得出P72蛋白是稳定性亲水蛋白,二级结构中α-螺旋、β-转角、延伸链、无规则卷曲分别占19.35%、5.42%、25.08%和50.15%。筛选出了P72蛋白的8个优势抗原表位,626-634、520-528、298-306、203-211位氨基酸处为T细胞抗原表位,587-606、232-251、110-129、39-58位氨基酸处为B细胞抗原表位。整合优势表位合成2个多肽P72-1与P72-2,首次免疫小鼠14 d时可检测到P72-1与P72-2的特异性抗体,首免后28 d达到最高值,其最高抗体效价分别为1∶25600与1∶12800;免疫后小鼠T淋巴细胞亚群CD4^(+)/CD8^(+)显著上升(P<0.05);脾脏淋巴细胞增殖试验结果显示,免疫组淋巴细胞数量均极显著升高(P<0.01);细胞因子IL-4、IL-2、IFN-γ含量均极显著增加(P<0.01)。【结论】本研究成功研制2种合成肽疫苗,在免疫效力上P72-2高于P72-1,二者都能产生高水平的特异性抗体,刺激脾脏淋巴细胞增殖,诱导产生细胞因子IL-4、IL-2、IFN-γ,本研究为非洲猪瘟合成肽疫苗研制奠定技术基础。; 徐娅玲张霁辉牛熙李升黄世会冉雪琴王嘉福; 关键词：抗原表位合成肽疫苗

榕江香猪生长激素基因的鉴定及功能分析(英文)被引量：13: 2006年; 生长激素是调节动物生长的主要激素。本研究应用聚合酶链式反应技术从榕江香猪的基因组文库中分离出1．903kb生长激素基因。克隆的生长激素基因由五个外显子和四个内含子组成。榕江香猪生长激素基因的碱基序列与已知四个国外猪种和9个中国地方猪种之间的同源性为97%～99%,其间的差异主要集中在内含子2和4。通过限制性内切酶(Dde I,Nar I,Bsm NI)分析,鉴定出榕江香猪生长激素基因的五个多态性位点,分别位于5’-侧翼区274(T/C)位点,外显子2的622(G/A)和631 (G/A)位点,内含子2中的841(T/C)以及外显子4中的1358(A/G)位点。同时,1358(A/G)位的碱基必变导致榕江香猪生长激素成熟肽第108位异亮氨酸替换,三维结构分析表明,异亮氨酸的存在可能导致生长激素与受体间亲合力降低。; 李景冉雪琴王嘉福; 关键词：生长激素基因

大肠杆菌生物素LT基因探针的制备及应用被引量：1: 1994年; 碱变性和羟基磷灰石柱层析分离纯化大肠杆菌重组质粒ＰＷＪ１４０ＤＮＡ，经ＰＳＴＩ完全酶解，琼脂糖凝胶电泳分离，电洗脱回收５．９ｋｂ片段，经化学修饰转氨基作用后制成ＬＴ基因的生物素探针，斑点印迹杂交试验表明，生物素ＬＴ基因探针灵敏性高，可检测到ｐｇ水平，与标准的ＥＴＥＣ（ＬＴ＋）杂交阳性，与非ＥＴＥＣ的大肠杆菌、沙门氏菌等无杂交反应。２０份不同来源的样品试验结果表明，ＬＴ探针可用于检测猪、牛、人、鸡及食品来源的毒素源性大肠杆菌。; 叶在荣王嘉福冉雪琴; 关键词：LT 基因生物素探针大肠杆菌

一种增强育肥猪免疫系统的中草药免疫调节饲料添加剂及应用: 本发明公开一种中草药免疫调节饲料添加剂，其特征在于：包括以下重量百分比的原料：青黛粉30％～36％，大青叶粉30％～36％，黄芪粉14％～20％和板蓝根粉14％～20％。本发明通过多种中草药形成组方，调节机体新陈代谢，促...; 冉雪琴犹龙江牛熙王嘉福; 文献传递

紫花苜蓿对猪骨骼肌细胞肝X受体基因和蛋白表达的影响被引量：4: 2013年; 为了探讨紫花苜蓿对猪骨骼肌细胞中肝X受体(liver X receptors,LXRs)表达的影响及其与胴体肉质的关系,采用免疫组织化学方法检测LXRs蛋白的分布,通过酶联免疫方法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)研究LXRs蛋白总量的改变,以荧光定量PCR方法分析猪骨骼肌细胞中LXRs基因mRNA的表达变化。结果表明,LXRs定位于骨骼肌细胞的细胞质、细胞膜和细胞核内;与对照组相比,日粮中添加4%紫花苜蓿能使LXRs基因和蛋白表达量明显上升(P<0.05),并使猪的瘦肉率降低(P>0.05),肌内脂肪含量显著增高(P<0.05),同时大理石纹评分较好(P<0.05),滴水损失下降(P<0.05),细胞间隙变小(P<0.05);添加6%紫花苜蓿使LXRs基因和蛋白表达量上升(P<0.05),但低于4%紫花苜蓿组(P>0.05),同时大理石纹评分及失水率增高(P<0.05),板油重下降(P<0.05)。结果提示,紫花苜蓿添加量的不同对猪肉品质的作用效果不同,为紫花苜蓿在养猪业的科学应用奠定了理论基础。; 陈颖王嘉福王芳袁恬张兆强冉雪琴; 关键词：紫花苜蓿肝X受体酶联免疫吸附试验荧光定量PCR

高产从江香猪资源调查及其FSH基因型分析被引量：10: 2014年; 对贵州省从江县养殖的从江香猪资源进行了全面的调查,发现当地存在特殊的高产从江香猪群体。对同龄的高、低产香猪的体尺进行对比,同时采用PCR分析2个群体的促卵泡激素β亚基(follicle stimulating hormone,FSHβ)的基因型,结果表明,高产从江香猪群体的产仔数明显高于低产群体,同时,从江香猪高产群体的体长、体重、胸围、腰围4项指标明显较高(P<0.05),纯合的AA基因型频率也较高。结果表明:高产从江香猪不仅产仔数多,同时生长速度较快,基因更为纯合。从江香猪高产群体的深入研究将为香猪资源的多方位开发利用奠定基础。; 杨廷模刘畅赵恒鑫袁菲田兵冉雪琴王嘉福; 关键词：从江香猪高产

香猪MAP3K4基因结构变异多态性和基因表达研究: 2023年; 基于前期比较基因组学分析,在香猪的丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶4(mitogen-activated protein kinase kinase kinase 4,MAP 3K4)基因第15内含子中发现一个189 bp的结构变异(MAP3K4-I15-sv189)。为探究该结构变异(structural variation,SV)在香猪群体中的多态性分布及其对基因表达的影响,本研究设计一对特异性引物,建立MAP 3K4基因SV的PCR检测技术,分析香猪群体中该结构变异的基因类型;采用RT-qPCR研究结构变异不同基因型之间基因的差异表达。结果显示,香猪群体中MAP3K4-I15-sv189位点存在两种基因型,DD型和ID型(D为缺失基因,I与参考基因一致),其中D等位基因的频率为97.35%;大白猪群体中检测到3种基因型,DD型、ID型和II型,D等位基因频率为80%。相比之下,香猪的D等位基因频率显著高于大白猪的相应值(P<0.05)。采用生物信息学方法分析结构变异区域得到多种剪接元件和重复元件,可能影响MAP 3K4基因的表达。比较香猪各组织中MAP 3K4基因的表达量,发现该基因在肺组织的表达量最高。进一步检测肺组织中3种结构变异类型的相对表达量,显示:DD型>ID型>II型,表明SV的缺失可能促进MAP 3K4基因的表达。本研究表明,香猪MAP 3K4的结构变异MAP3K4-I15-sv189以缺失型为主,缺失型可促进肺组织MAP 3K4基因的表达。研究结果有助于解析香猪易感肺部疾病的分子机制。; 徐婷婷齐芬芳黄世会牛熙李升冉雪琴王嘉福谢健; 关键词：香猪多态性

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