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总HIV-1 DNA定量检测技术的建立被引量：2: 2019年; 目的建立一种基于实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法的1型艾滋病病毒(HIV-1)总脱氧核糖核酸(DNA)定量检测技术。方法构建了同时包含HIV靶基因和内参基因的质粒标准品,设计了涵盖我国主要HIV流行亚型的特异性引物和Taqman水解探针,对引物亚型覆盖面、灵敏度、特异性等相关指标进行了分析,进行了批内和批间重复试验。结果该检测方法所设计的HIV特异性引物和探针序列高度保守,成功检测12种常见及稀有HIV亚型;扩增灵敏度可达4个拷贝/PCR反应管,特异度100%;加入了细胞定量体系,做到了在同一个PCR反应管中既定量了HIV DNA,又定量了细胞数;批内和批间差异性的变异系数均在20%以内。结论该检测方法可用于HIV储藏库检测,评估联合抗病毒治疗的效果,可以用于"窗口期"HIV感染的辅助诊断以及HIV阳性母亲的新生儿HIV感染的诊断。; 刘志英袁霖张欣陆小凡刘利锋计云霞夏炜粟斌吴昊张彤; 关键词：艾滋病病毒

HIV-1 B'/C亚型毒株的复制动力学特点: 2010年; 目的分析不同疾病进展阶段B'/C亚型毒株的复制动力学特点。方法从长期不进展者(long-term nonprogressors,LTNPs)和AIDS期患者体内分离病毒株,用相同量的病毒株去感染正常人的去CD8+T淋巴细胞的外周血单个核细胞,通过检测感染后第0、3、6、9、12、18、21天的上清液中核衣壳蛋白p24(p24)含量,作出折线图来分析该毒株的复制动力学特征。结果从AIDS期患者体内分离的B'/C重组亚型病毒株的复制速度快且p24峰值高,而从LTNPs体内分离的B'/C重组亚型病毒株的复制速度慢且p24峰值低。结论从AIDS期患者体内分离的B'/C重组亚型病毒株复制能力较强,而从LTNPs患者体内分离的B'/C重组亚型病毒株复制能力较弱。; 孙伟焦艳梅画伟刘志英石英张彤吴昊; 关键词：HIV-1 生物学病毒复制

1型HIV感染多重PCR检测方法的建立及临床应用被引量：3: 2010年; 目的建立检测人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的多重巢式PCR(nPCR)和多重反转录PCR(RT-PCR)方法。将其与已经上市的NASBA法试剂盒进行检测敏感性比较;探讨血浆RNA水平对PCR检测敏感性的影响;评价该方法用于我国HIV-1感染者诊断的价值。方法针对HIV-1的gag、pol和gp41区设计3套引物,建立检测HIV DNA的多重nPCR和检测HIVRNA的多重RT-PCR方法;分别以建立的PCR方法和NASBA法对119例HIV阳性患者进行检测,比较2者的检测敏感性;将患者分为不同的病毒载量组,比较PCR方法在各组患者中的检测敏感性差异;使用建立的PCR方法对10例可疑急性感染者进行检测;扩增HIV-1膜区C2-C3段,对nPCR检测阳性的43例DNA样本进行亚型鉴定。结果多重nPCR的检测敏感度为97.5%(116/119),多重RT-PCR的敏感度为78.2%(93/119),2者的特异度均为100%(50/50),多重nPCR和多重RT-PCR的阳性预测值分别为97.5%(116/119)和78.2%(93/119),阴性预测值均为100%(50/50),准确性分别为98.2%和84.6%。经比较,多重nPCR和多重RT-PCR的检测敏感度都高于NASBA法。在病毒载量<103copy/mL的患者,nPCR的检测敏感性高于RT-PCR,在病毒载量在(103～104)copy/mL的患者及病毒载量≥104copy/mL的患者,2者的敏感性比较相近,均接近100%;检测的10例可疑急性感染者中,有5例患者的nPCR和RT-PCR检测结果阳性,抗体在随访过程中阳转,证实为HIV急性感染者;检测的43例DNA样本分属于B’亚型(37例),AE亚型(5例)和BC亚型(1例)。结论本课题组建立的PCR检测方法可以对我国主要流行的B’、AE和BC亚型病毒株得到很好的扩增效果;nPCR的检测敏感性受血浆RNA水平的影响相对较小,RT-PCR的检测敏感性受血浆RNA水平的影响相对较大;PCR方法可以用于HIV急性感染者的早期诊断。; 代丽丽陈德喜石英魏飞力刘志英张洪海吴亚松梁连春吴昊张彤; 关键词：人类免疫缺陷病毒核酸检测聚合酶链式反应

巢式RT-PCR法检测HIV-1阳性者中庚型肝炎病毒感染的研究被引量：1: 2011年; 目的调查HIV流行地区庚型肝炎病毒(HGV)在HIV阳性人群中的感染率,并探讨其对HIV病程的影响。方法根据已知并公认的HGV序列,设计特异巢式引物,建立HGVRNA的巢式RT-PCR方法,对100例HIV-1阳性感染者进行检测,同时进行CD4+T细胞计数和HIV病毒载量的测定。结果 100例HIV-1阳性者中检测出HGVRNA阳性感染者22例(22%);合并感染HGV的HIV感染人群体内可见有较高CD4细胞数。结论 HIV阳性感染者有较高的HGV重叠感染率,可能与其具有共同的传播途径有关,合并感染HGV似乎能延缓HIV感染者的病程。; 徐萌绳波刘志英陈德喜吴昊; 关键词：庚型肝炎病毒聚合酶链式反应供血

北京市部分男男同性恋人群中HIV-1分子流行病学研究被引量：23: 2009年; 目的了解北京市部分男男同性恋(men who have sex with men,MSM)人群HIV-1的分子流行情况,监测该地区人群HIV毒株的最新流行情况。方法提取17例男男同性恋者HIV-1抗体阳性样本全血基因组DNA,直接进行巢式PCR扩增HIVenv基因C2-V5区及gag基因P17-P24区,对PCR产物进行核苷酸序列测定和分析,确定基因亚型。结果17例患者中,共存在CRF01-AE、B亚型和CRF07-BC3种亚型,其中CRF01-AE9例(52.94%),B亚型5例(29.41%),CRF07-BC3例(17.65%)。结论小样本量的流行病学调查显示,北京地区部分男男同性恋人群中主要存在CRF01-AE、B和CRF07-BC3种亚型;CRF01-AE已取代B亚型而成为北京市MSM人群中HIV主要流行亚型,CRF07-BC重组亚型在北京市MSM人群中增长迅速。; 刘志英李海英张彤黄晓婕魏飞力徐萌焦艳梅徐小宁陈德喜吴昊; 关键词：男男同性恋人类免疫缺陷病毒1型

北京市男男性行为人群庚型肝炎病毒感染率和流行亚型分析: 2013年; 庚型肝炎病毒（HGV，GBv-c）与丙型肝炎病毒同属黄病毒科，两者核苷酸有30％的同源性。GBV-C不引起感染人群肝病或其他疾病，感染数年后能自动清除。GBV-C与HIV具有相似的感染途径，大部分经血液、性接触或者母婴传播，所以在高危人群中存在很高的重叠感染。在HIV感染人群中GBV-C感染率明显高于正常人群，40％HIV感染者显示有活跃的GBV-C共同感染，; 徐萌绳波寇卜心宋凤丽袁霖吴昊陈德喜刘志英; 关键词：庚型肝炎病毒男男性行为者亚型分析

多引物小型集合HIV核酸检测技术的建立及在男男性接触者急性感染检测中应用被引量：1: 2010年; 目的建立结合多重反转录巢式PCR技术检测HIV RNA的小型集合NAT,用于MSM人群急性感染的筛查诊断.方法利用2008年10月至2009年3月期间从3名HIV窗口期感染者、30名HIV慢性感染者、97名健康人采集冻存的EDTA抗凝血浆建立小型集合NAT.将10份待测标本混合组成1个集合,离心富集病毒,提取RNA 针对HXB2的nt5783-nt6228和nt1235-nt2012区分别设计2对引物采用多重RT-PCR、巢式PCR扩增2个目标区的核酸片段,对结果阳性的集合中标本进一步分别检测.确定小型集合NAT的灵敏度,并进行验证.应用建立的方法对1 005份与上述标本同一时期收集的MSM人群的HIV抗体阴性血浆进行检测.结果（1）成功扩增出目标区的2条特异性片段,灵敏度为162拷贝/ml （2）对3份HIV窗口期感染者标本用小型集合NAT方法盲法验证的结果和预期一致（3）用多重RT-PCR和巢式PCR对30份HIV抗体阳性标本检测,阳性率100%（30/30）（4）发现1 005份血浆标本中有1份为HIV RNA阳性,追踪随访发现HIV-1抗体转阳.结论本研究中建立多引物小型集合RT-PCR、巢式PCR结合的小型集合NAT的敏感性好,可用于MSM人群HIVG感染窗口期筛查检测.; 吴亚松刘志英焦艳梅魏飞力徐萌张彤黄晓婕张福杰陈德喜徐小宁吴昊; 关键词：HIV感染 HIV-1 核酸扩增技术

20例HIV/AIDS患者耐药结果分析被引量：4: 2009年; 目的对高效抗逆转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy,HAART)失败的HIV/AIDS患者,进行回顾性基因型耐药检测,了解HAART过程中HIV-1耐药位点的产生,分析基因型耐药检测在HAART过程中的必要性及指导意义。方法采用Versant HIV-1RNA3.0检测病毒载量;采用TriTEST CD4FITC/CD8PE/CD3PerCP Reagent检测CD4+T淋巴细胞计数;采用Trugene HIV-1Genotyping Kit和OpenGene DNA系统进行基因型耐药检测;用Blast等分子生物学软件进行HIV-1亚型分析。结果20例患者中,17例保存有治疗前的血浆标本,其中1例在治疗前即存在非核苷类逆转录酶抑制剂(non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors,NNRTIs)耐药相关突变。20例患者均进行了治疗后耐药检测,其中3例未检出耐药相关突变。其他17例检出耐药相关突变,其中13例出现NNRTIs耐药相关突变;突变位点主要为K103N、Y188L、Y181C、V106M和G190A;11例显示有核苷类逆转录酶抑制剂(nucleoside/nucleotidereverse transcriptase inhibitors,NRTIs)耐药相关突变,突变位点主要为M184V、T/215Y/F、D67N、K70R以及K219E/Q;3例出现蛋白酶抑制剂(protease inhibitors,PIs)耐药相关突变,其中主突变为M46I/L、V82F/A,而次级突变中以M36I、L63P出现的频率最高。20例患者中B亚型9例(45%,9/20),CRF01_AE重组亚型5例(25%,5/20),CRF07_BC重组亚型5例(25%,5/20),CRF06_CPX1重组亚型1例(5%,1/20)。结论对治疗失败的患者进行基因型耐药检测可以帮助医生判断HAART失败的原因,并指导治疗方案的优化;亚型分析显示HIV-1病毒亚型的流行与感染途径之间存在明显的联系。; 魏飞力吴昊张彤李庆刘志英王蕊焦艳梅陈德喜; 关键词：HIV-1 基因型耐药

建立反向PCR检测HIV-1整合位点的方法被引量：3: 2009年; 焦艳梅画伟李娟刘志英陈德喜李在村张彤吴昊; 关键词：PCR检测整合位点 CD4^+T细胞病毒治疗病毒复制病毒基因

HIV病毒蛋白在HIV相关神经损伤中的作用: 2015年; HIV相关的神经认知损害（HIV-associated neurocognitive disorder,HAND）是由HIV-1病毒引起的神经系统病变,可出现注意力不集中,记忆障碍,手部运动缓慢,共济失调,大小便失禁,感情淡漠,以及步履艰难等症状,严重影响患者工作、生活和社会活动,30%以上的HIV感染者可罹患HAND。; 刘志英李威陈德喜吴昊; 关键词：病毒蛋白 HIV病毒 HIV相关神经损伤中枢神经元神经系统病变

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刘志英

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