单杰
- 作品数：21 被引量：60H指数：5
- 供职机构：郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学系更多>>
- 发文基金：河南省医学科技攻关计划项目河南省杰出人才创新基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 人源细胞色素P450 2E1与细胞色素P450氧化还原酶的共表达被引量：2
- 2014年
- 目的利用大肠埃希菌(E.coli)表达系统异源表达细胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1,CYP2E1),并与细胞色素P450氧化还原酶(cytochrome P450 oxidoreductase,POR)实现共表达,使其具有代谢活性,为药物代谢的研究提供单一性的酶源。方法以人肝组织RNA为模板,RT-PCR扩增CYP2E1基因,插入pCW空载体,构建重组表达质粒pCW-2E1,转化E.coli DH5α,IPTG诱导表达,表达产物经Western blot鉴定;利用双启动子原理构建CYP2E1与POR共表达的重组质粒pCW-2E1-POR,采用对氨基苯酚法检测CYP2E1重组酶的代谢活性,并对不同培养时间(18、28、38 h)的代谢活性进行比较。结果质粒pCW-2E1经PCR鉴定,证明构建正确;表达的重组人CYP2E1蛋白相对分子质量约56 000,主要以可溶性形式表达。质粒pCW-2E1-POR经PCR及酶切鉴定,证明构建正确;导入质粒pCW-2E1-POR的重组菌提取的蛋白样品具有明显的代谢活性,培养18、28、38 h后,代谢活性均值分别为(0.195±0.004)、(0.189±0.003)和(0.192±0.004)nmol/(min·mg),差异无统计学意义(P>0.05),但与导入质粒pCW-2E1的重组菌提取的蛋白样品的代谢活性相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了具有代谢活性的CYP2E1重组酶,且3个培养时间段之间的代谢活性无明显差异。
- 徐彬彬张海风刘秀赵勤王俊平单杰
- 关键词：细胞色素P450原核细胞基因表达
- Bach1克隆构建及其对肝癌细胞药物敏感性的影响
- 2014年
- 目的构建真核表达载体p BI-EGFP-Bach1,并检测其表达及对血红素氧化物(HO-1)表达的影响。方法将Bach1基因与质粒p BIEGFP连接构成重组质粒,RT-PCR法检测重组载体及HO-1在SMMC7721细胞中的表达情况,MTT检测细胞活性。结果 NheⅠ和MluⅠ双酶切以及PCR表明重组质粒p BI-EGFP-Bach1构建成功;RT-PCR显示转染重组Bach1 mRNA表达显著升高,同时HO-1的表达降低;MTT检测未转染组的IC50为0.15μg/ml,转染组的IC50为0.21μg/ml。结论构建了真核表达载体p BI-EGFP-Bach1,转染后Bach1能够在SMMC-7721细胞中表达并抑制了HO-1;MTT验证重组质粒能提高癌细胞对长春新碱(VCR)敏感性。
- 时英英杨靖时学秀单杰
- 关键词：血红素氧化酶-1肝癌细胞SMMC-7721长春新碱
- 阿魏酸钠对硝普钠诱导的原代培养海马神经元凋亡的保护作用被引量：1
- 2008年
- 目的：探讨阿魏酸钠（sodium ferulate，SF）对NO供体硝普钠（SNP）引起的大鼠海马神经元凋亡保护作用的可能机制。方法：原代培养的大鼠海马神经元，经终浓度为10～160μmol·L^-1的SF预处理6h后，用50μmol-L^-1的SNP处理24h，采用MTT法检测细胞存活率，Hochest 33258荧光染色及DNA琼脂糖凝胶电泳分析等方法检测凋亡，Western blot及RT-PCR检测bcl-2基因表达。结果：不同浓度SF（10～160μmol·L^-1）预处理6h可显著提高神经元的存活率，减少SNP引起的核固缩、凝聚和碎裂现象；DNA凝胶电泳图谱未见典型的“梯子状”改变；增加bcl-2 mRNA及蛋白的表达。结论：SF对NO供体SNP诱导的海马神经元凋亡具有明显的保护作用，其机制可能与增加抗凋亡基因bcl-2表达有关。
- 张海风臧明玺安玉会李道明单杰
- 关键词：阿魏酸钠硝普钠海马神经元凋亡BCL-2
- 盐酸多西环素对重组质粒pBI-EGFP-hHO-1表达的调控
- 2011年
- 目的构建Tet-off调控的血色素氧化酶-1(HO-1)真核表达载体pBI-EGFP-hHO-1,并确定盐酸多西环素对其表达的调控剂量。方法利用分子生物学技术,将hHO-1基因与质粒pBI-EGFP连接构成重组质粒。NheI和MluI双酶切鉴定后采用RT-PCR技术及免疫细胞化学的方法检测其在人肝癌细胞SMMC-7721中的表达情况。利用RT-PCR技术检测Tet-off和pBI-EGFP-hHO-1双转染后不同浓度盐酸多西环素对hHO-1基因mRNA表达量的影响,确定该四环素调控系统的盐酸多西环素诱导量。结果用NheI和MluI双酶切证明hHO-1成功克隆入应答质粒pBI-EGFP;RT-PCR、免疫细胞化学检测结果表明重组质粒在SMMC-7721细胞中表达;经RT-PCR检测显示当盐酸多西环素浓度≥2 000 ng/ml时,HO-1基因mRNA表达降低,与未转染组接近。结论成功构建了由Tet-off调控的真核表达载体pBI-EGFP-hHO-1,并确定盐酸多西环素对其调控剂量为2 000 ng/ml。
- 杨婧张海风王媛赵勤张新胜单杰
- 关键词：盐酸多西环素
- 医学机能学实验教学体系的改革初探被引量：10
- 2008年
- 医学机能学实验教学在医学院校培养高级人材方面具有非常重要的作用。文章介绍自2002以来年在医学机能学实验教学方面的一些改革,其中包括实验室体制与管理模式的改革及课程体系与教学内容方法的改革,形成了跨学科综合性实验课程体系,获到了单科教学难以达到的效果。自行设计实验的开设极大地挖掘学生的学习潜力,提高学生学习欲望,激发学生的科研能力和创新意识,全方位多层次地锻炼学生的综合能力。
- 冯国清薛长贵单杰胡香杰黄幼田陈宗德
- 关键词：医学机能学实验教学教学改革
- 微小RNA-27a靶向调控过氧化物酶体增殖子活化受体-γ和骨形态发生蛋白-2对激素诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化的影响被引量：1
- 2015年
- 目的检测微小RNA（miRNA，miR）-27a调控过氧化物酶体增殖子活化受体-γ（PPAR-γ）和骨形态发生蛋白-2（BMP-2）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化的影响。方法将培养的40只大鼠BMSCs，随机分4组，正常对照组：细胞不作特殊处理；模型组：细胞给予1×10-7mol／L地塞米松；无关序列组：将无关序列基因电转入细胞，给予1×10 -7mol／L地塞米松；实验组：将具有双向靶向作用的miR-27a电转入细胞，给予1×10-7mol／L地塞米松。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT—qPCR）技术测定PPAR-γ和BMP-2mRNA的相对表达量。结果处理细胞7d时，实验组细胞中PPAR-γmRNA的相对表达量（1．203±0．111）较模型组（1．877±0．225）、无关序列组（1．913±0．195）明显降低（P〈0．05），近似于正常组（1．000）且与其差异无统计学意义（P〉0．05）。实验组细胞中BMP-2mRNA的相对表达量（0．832±0．105）较模型组（0．455±0．051）、无关序列组（0．422±0．038）明显升高（P〈0．05），近似于正常组（1．000）且与其差异无统计学意义（P〉0．05）。结论miR-27a能够有效抑制PPAR-γ表达，维持BMP-2表达。
- 王光辉李月白李明谷晨熙宋石单杰赵国强王义生
- 掌控大脑兴奋性传递和学习记忆功能的核心分子体系的研究进展被引量：3
- 2005年
- 安玉会郭茂峰张善锋单杰
- 关键词：学习记忆功能动物大脑兴奋性子体
- 不稳定心绞痛患者介入治疗的临床研究被引量：5
- 2013年
- 目的对不稳定心绞痛患者介入治疗的临床效果进行分析及研究。方法选取2010年1月—2012年1月在该院就诊的64例不稳定性心绞痛的患者为研究对象,随机对患者进行分组,分别为观察组及对照组,两组患者各32例,其中观察组患者行介入性治疗,对照组患者非血管介入治疗,观察两组患者的心肌梗死、心绞痛、猝死及症状缓解时间、症状缓解率等情况。结果观察组患者临床显效率与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),观察组患者术后平均康复时间为(18.5±3.8)d,对照组患者临床平均康复时间为(30.5±8.5)d,两组患者在临床康复时间上经比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用介入性治疗不稳定性心绞痛具有创伤小、临床治愈效果理想及临床康复时间快等特点,值得在临床上应用推广。
- 刘乃瑞单杰
- 关键词：心绞痛介入治疗
- 硝普钠对体外培养的海马神经元NF-κB和caspase-3基因表达的影响被引量：1
- 2008年
- 目的探讨NO供体硝普钠(SNP)诱导体外培养的海马神经元凋亡与核因子-kappaB(NF)-κB p65和caspase-3表达变化的关系。方法终浓度分别为0、25、50、100、200、400μmol/L的SNP处理海马神经元24 h,用MTT比色法分析细胞存活率;Hoechst33258荧光染色观察凋亡的形态学改变;DNA琼脂糖凝胶分析凋亡的生化特征;用RT-PCR检测NF-κB p65、caspase-3 mRNA表达变化;Western印迹检测NF-κB p65、caspase-3蛋白表达的变化。结果SNP可剂量依赖性的降低神经元的存活率;荧光显微镜可见染为高亮蓝色的典型凋亡小体,其细胞核明显固缩、凝聚和断裂;电泳图谱显示清晰的DNA梯度。随着SNP剂量的增加,NF-κB p65 mRNA、NF-κB p65蛋白表达逐渐增加;caspase-3 mRNA表达无改变,但caspase-3酶原被裂解活化;从50μmol/LSNP起,caspase-3相对酶活性显著增加,为对照组的3.02倍,100μmol/L达最大值。结论SNP可诱导培养的海马神经元凋亡,其凋亡机制可能与增加NF-κB p65表达及激活caspase-3酶原有关。
- 张海风臧明玺单杰安玉会李道明
- 关键词：体外培养海马神经元NF-ΚBP65CASPASE-3
- 阿魏酸钠对SNP诱导的凋亡海马神经元NF-κB、par-4基因表达的影响被引量：2
- 2008年
- 目的探讨阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)对一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)引起的大鼠海马神经元凋亡及NF-κBP65、par-4基因表达的影响。方法采用SD大鼠海马神经元原代培养,经终浓度分别为10、20、40、80、120、160μmol/L的SF预处理后,用50μmol/L的SNP处理24h,采用MTT法检测细胞存活率,Hochest33258荧光染色检测凋亡,Westernblot及RT-PCR检测NF-κBP65、par-4基因表达。结果不同剂量SF(10～160μmol/L)预处理6h可显著提高神经元的存活率,减少SNP引起的核固缩、凝聚和碎裂现象;降低NF-κBP65、par-4mRNA及蛋白的表达。结论SF抑制NO供体SNP诱导的海马神经元凋亡,其机制可能与降低促凋亡基因NF-κBP65、par-4表达有关。
- 张海风李月百安玉会邢路伟王俊萍单杰
- 关键词：阿魏酸钠海马神经元凋亡NF-KBP65PAR-4
