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黄粉虫丝氨酸胰蛋白酶样酶基因克隆与原核表达研究: 随着社会发展以及人们生活水平的提高，由血栓引起的血栓性疾病是一种常见心脑血管病。每年在我国需要进行血栓溶解治疗的人就超过300万，而死于心脑血管疾病的人每年大约为200万，占总因病死亡人数的40.7％，与癌症相比，位于各...; 叶韵; 关键词：黄粉虫原核表达基因克隆抗栓药物; 文献传递

地鳖纤溶蛋白对人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞VEGF和bFGF表达的影响被引量：8: 2011年; 目的研究地鳖纤溶蛋白(EFP)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人肺癌(A549)、乳腺癌(MCF-7)细胞分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响。方法采用含药血清体外培养人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞,通过MTT法和双抗夹心酶联免疫吸附分析法(ELISA)观察地鳖纤溶蛋白对细胞的体外增殖和分泌VEGF和bFGF的影响。结果 EFP含药血清对人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞有显著抑制作用,ELISA法检测结果表明EFP含药血清对人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞的VEGF和bFGF表达均有抑制作用。结论 EFP可抑制肿瘤细胞VEGF和bFGF表达。; 曹付春韩雅莉陈冰黄明星丁鸿余磊叶韵; 关键词：A549细胞 MCF-7细胞 VEGF BFGF

一种改良的纤维平板法被引量：3: 2012年; 介绍一种改良的用以快速地定性和半定量检测纤溶活性蛋白的纤维平板法.对该方法中的几个关键因素作了详细的研究和探讨.纤维平板中纤维蛋白原和纤溶酶原的浓度对裂解面积不产生任何影响,但是纤维蛋白原的浓度会对裂解圈的观察产生影响,纤维蛋白原浓度低于0.2 mg/mL时会使背景色过淡而不能清晰地观察到裂解圈.尿激酶浓度在2～250 mU/μL范围时,尿激酶浓度的对数和裂解圈相互垂直的两条直径乘积的对数之间存在明显的线性关系.在本实验设计方案下,尿激酶的最佳使用浓度为10～20 mU/μL.同时,本文还探讨了纤维平板中纤溶酶原的去活条件,当琼脂纤维平板凝固后很难完全去活纤溶酶原,但是,在琼脂纤维蛋白原混合物凝固前于95℃持续温浴40 min,则能彻底去活纤维蛋白原中残留的纤溶酶原.; 黄明星叶韵谭竹钧韩雅莉; 关键词：纤维蛋白原纤溶酶原尿激酶

地鳖纤溶活性蛋白对荷瘤小鼠肿瘤微血管密度及血管内皮细胞生长因子表达的影响被引量：8: 2011年; 目的:研究地鳖纤溶活性蛋白(EFP)对H22和S180荷瘤小鼠肿瘤组织微血管密度(MVD)及血液中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响,以判定EFP是否具有抗肿瘤新生血管生成作用。方法:建立H22荷瘤小鼠动物模型,采用免疫组化方法标记CD34,检测了EFP对小鼠H22和S180肿瘤组织MVD的作用情况,采用双抗体夹心ELISA法检测H22和S180荷瘤小鼠血清中VEGF含量。结果:与对照组相比,EFP可显著降低MVD及VEGF的表达。结论:EFP有抑制肿瘤新生血管形成的作用。; 曹付春韩雅莉陈冰刘浩丁鸿黄明星叶韵; 关键词：H22细胞 S180细胞微血管密度血管内皮细胞生长因子

一种黄粉虫胰蛋白酶样酶基因核苷酸序列及克隆方法: 本发明涉及一种黄粉虫胰蛋白酶样酶基因核苷酸序列及克隆方法，属于基因工程技术领域；胰蛋白酶样酶基因核苷酸序列的cDNA序列由869个核苷酸组成，基因编码氨基酸序列为第13-786位核苷酸，终止密码子序列是TAA，位于第78...; 韩雅莉谭竹钧叶韵于晓谦; 文献传递

黄粉虫胰蛋白酶样酶基因TMTLSP全长cDNA的克隆和序列分析被引量：3: 2012年; 以黄粉虫(Tenebrio molitor)幼虫全RNA逆转录得到的cDNA为模板,参照地鳖(Eupolyphagasinensis)纤溶酶(fibrinolytic enzyme)简并引物,进行温度梯度PCR.以得到的扩增产物为基础,采用RACE得到基因全长cDNA,命名为黄粉虫胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶(Tenebrio molitor trypsin-likeserine protease,TMTLSP).TMTLSP全长869 bp(GenBank No.JN662461),开放阅读框为777 bp,编码258个氨基酸,并具有蛋白酶样特有的起始位点、活性中心预计底物结合位点.经过比对分析,该基因编码的氨基酸序列与赤拟谷盗、谷蠹、光亮扁角水虻、美洲大蠊等多种昆虫的胰蛋白酶或丝氨酸蛋白酶有较高的相似性.本研究将为胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶的提取及研究提供更为广泛的材料及研究依据.; 叶韵韩雅莉黄明星孙建平代春迎林非凡; 关键词：黄粉虫 RACE 克隆

地鳖纤溶蛋白含药血清对人肝癌和乳腺癌抑制作用被引量：2: 2011年; 目的研究地鳖纤溶蛋白(EFP)及含药血清对人肝癌HepG-2和人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用。方法制备EFP,并制备不同浓度EFP小鼠含药血清;采用MTT法分别将EFP和EFP含药血清加入HepG-2和MCF-7细胞悬液中,分别检测增殖抑制效果。结果 EFP直接用药各组均对HepG-2无抑制作用,而EFP含药血清各组对HepG-2细胞均有明显抑制细胞增殖作用;EFP组和EFP含药血清组均能不同程度的抑制MCF-7细胞增殖。结论 EFP有较强的体外抗肿瘤活性;血清药理学方法更能真实的反映药物作用。; 陈冰韩雅莉曹付春黄明星叶韵; 关键词：含药血清 HEPG-2细胞 MCF-7细胞 MTT法

纤溶活性蛋白检测方法研究进展被引量：2: 2011年; 迄今为止,对纤溶活性蛋白(fibrinolytic protein)的检测主要有4种方法:纤维平板法(fibrinplate method)、显色底物法(colorimetric assay using chromogenic substrates)、反相纤维蛋白自显影法(reverse fibrin autography)和纤维蛋白酶谱法(fibrin zymography)。纤维平板法可以用来快速判断样品是否具有纤溶活性,同时,纤维平板法和显色底物法也可以用来对纤溶活性蛋白进行半定量分析。反相自显影法和纤维蛋白酶谱法则是两种较新的技术,主要用来对纤溶活性蛋白进行定性分析。详细阐述了这几种技术的发展过程、原理、优缺点和应用范围。; 黄明星叶韵韩雅莉

地鳖纤溶活性蛋白对S180和H22荷瘤小鼠肿瘤的抑制及诱导细胞凋亡作用被引量：5: 2011年; 目的研究地鳖虫纤溶活性蛋白(fibrinolytic proteinsof Eupolyphaga sinensis,EFP)对肿瘤细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法采用纤溶平板法检测了EFP纤溶活性;采用流式细胞术检测了EFP高、中、低浓度对小鼠S180和H22实体瘤组织细胞凋亡的诱导作用;采用免疫组织化学法检测了Caspase-3的表达;采用TRAP-PCR银染法检测了腹水瘤组织端粒酶活性。结果 EFP对S180和H22实体瘤有一定的抑瘤作用,对H22和S180腹水瘤细胞端粒酶活性有一定降低作用,可提高Caspase-3表达水平,诱导细胞凋亡。结论 EFP具有诱导S180和H22肿瘤细胞凋亡作用。; 韩雅莉曹付春余磊叶韵张卫丽黄明星刘浩黎子蔚; 关键词：S180 H22

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叶韵