孔建平
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：山东大学医学院医学免疫学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金海外青年学者合作研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肝癌组织靶向性正义与反义表达载体pEBAF/N-ras的构建
- 2001年
- 目的 :用分子克隆技术构建肝癌组织特异性N rascDNA正义与反义表达载体。方法 :用BamHI酶切携带目的基因的质粒 pZIP NeoSV (X) 1,获得 1 0 6kbN rascDNA ;同时以BamHI将载体 pE BAF线性化 ,并行去磷酸化修饰 ,用T4DNA连接酶将两者连接 ,转化感受态细菌DH5α。先以酶切和随机引物法标记的N rascDNA探针进行菌落原位杂交筛选阳性重组克隆 ,再以PvuⅡ酶切鉴定插入方向 ,同时进行DNA测序和同源性分析。结果 :成功构建肝癌组织特异性正义与反义表达载体 pEBAF/s N ras和 pE BAF/as N ras。结论 :成功构建的N rascDNA正 /反义表达载体 。
- 孔建平孙汶生曹英林宋静张利宁马春红
- 关键词：RAS核苷酸类
- Epstein-Barr病毒载体及其在基因治疗中的应用被引量：2
- 2001年
- EB病毒具有多种生物学特性 ,据此构建了宿主范围广泛的 EB病毒载体。因其较其它病毒载体具有明显优势 ,所以具有良好的应用前景。本文对 EB病毒生物学特性和载体的研制及在基因治疗中的应用作了较全面阐述。
- 孔建平孙汶生
- 关键词：基因治疗
- 肝癌靶向性N-ras反义表达载体的构建及对人肝癌细胞系BEL-7402作用的研究
- 目的;构建肝癌靶N-rascDNA正义与反义表达载体,并研究反义核酸pEBAF/as-N-ras转染人肝癌细胞系BEL-7402对细胞内靶基因表达的抑制、细胞凋亡的诱导及细胞周期的分布等生物活性的作用.结论:该研究成功构...
- 孔建平
- 关键词：靶向性反义核酸N-RAS
- 文献传递
- AFP增强型四元复合体介导N-ras反义RNA抑制HepG2.2.15细胞成瘤性的研究被引量：1
- 2004年
- 目的 观察AFP增强型四元复合体介导的N ras反义RNA转移系统对HBV转基因肝癌细胞系HepG2 .2 .15致瘤性的体内外抑制作用。方法 构建含有N ras反义RNA的AFP增强型四元复合体 ,体外瞬时转染HBV转基因HepG2 .2 .15细胞 ,流式细胞术检测转染前后N ras蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞周期的变化 ,同时建立稳定表达N ras反义RNA的肝癌细胞系HepG2 .2 .15 /as ras,绘制转染前后生长曲线。体内抑瘤试验分别以HepG2 .2 .15或HepG2 .2 .15 /as ras细胞制备荷瘤裸鼠模型 ,比较二者成瘤率。HepG2 .2 .15成瘤组局部瘤内注射N ras反义RNA四元复合体 ,研究其对肿瘤的抑制作用。结果 AFP增强型四元复合体介导N ras反义RNA体外瞬时转染HepG2 .2 .15细胞可显著降低胞内N ras蛋白的表达水平 (P <0 .0 5 ) ,使细胞生长停滞于G0 /G1期 ,且可诱导细胞凋亡。体内抑瘤实验显示 ,HepG2 .2 .15 /as ras细胞注射组成瘤率 ( 4 0 % )显著低于HepG2 .2 .15细胞注射组( 10 0 % )。瘤内注射N ras反义RNA四元复合体可使肿瘤体积明显缩小。结论 AFP增强型四元复合体介导的N ras反义RNA转移系统可降低HBV转基因肝癌细胞HepG2 .2 .15N ras蛋白的表达水平 ,逆转其恶性行为 。
- 梁晓红孙汶生马春红孔建平马亚斌曹英林刘素侠高立芬王晓燕郭春
- 关键词：N-RAS基因反义RNA肿瘤抑制
