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EB病毒潜伏膜蛋白2A（LMP2A）重组腺病毒转染树突状细胞治疗小鼠移植瘤模型的研究: 目的构建表达EB病毒LMP2A的小鼠移植肿瘤模型,用EB病毒LMP2A重组腺病毒转染小鼠树突状细胞治疗该小鼠肿瘤模型并评价其疗效,为研究以DC为基础的EBV相关肿瘤的免疫治疗提供有益资料.方法将EB病毒LMP2A基因克隆...; 孙华; 文献传递

2002~2003年南京地区流感病毒的分离与分子生物学鉴定被引量：3: 2005年; 目的:从南京流感样患者中分离流感病毒并通过分子生物学方法鉴定,为研究南京地区流感病毒基因变异特点提供基础。方法:将流感样患者咽拭子接种狗肾传带细胞,筛选血凝阳性细胞培养上清,以甲、乙型流感病毒型及甲1、甲3亚型特异性引物通过RT-PCR方法鉴定并分型和亚型,用血凝抑制试验证实。结果:13份标本中血凝阳性为8份,甲型流感病毒型特异性引物RT-PCR扩增结果4株为阳性,且均为甲3型;乙型流感病毒型特异性引物RT-PCR结果2株为阳性。血凝抑制试验支持此结果。结论:从南京地区流感样患者中成功地分离并鉴定了6株流感病毒。; 周锋孙华姚堃朱建中; 关键词：流行性感冒病毒病毒分离逆转录聚合酶链式反应

EB病毒潜伏膜蛋白2A诱导细胞毒性T细胞抗鼻咽癌的体内外实验被引量：4: 2006年; 目的观察EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)-潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein2A,LMP2A)转染人树突状细胞(dendritic cell,DC)诱导特异性细胞毒性T细胞(cytotoxicity Tlymphocyte,CTL)的体外生物学特性;建立表达EBV-LMP2A的裸鼠鼻咽癌动物模型,探讨LMP2A特异性CTL在荷瘤鼠体内的抗肿瘤效应。方法分离人外周血单核细胞(pripheral blood mononuclearcell,PBMC),以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-monocyte colony stimulating factor,GM-CSF)、白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导培养获得DC,荧光激活细胞分选仪(fluorescence activated cell sorter,FACS)检测成熟DC的表面分子表达。用LMP2A重组腺病毒转染成熟DC,将转染DC与自体PBMC混合培养,在白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)作用下诱导针对LMP2A的特异性CTL,FACS检测CTL群体中阳性细胞的组成。将鼻咽癌CNE细胞接种BALB/c裸鼠,建立鼻咽癌动物模型;在裸鼠肿瘤局部注射LMP2A特异性CTL,观察治疗后移植瘤生长情况及病理变化。结果人外周血PBMC体外在GM-CSF、IL-4、TNF-α诱导下获得典型形态及表型特征的成熟DC。FACS检测表明,以LMP2A重组腺病毒转染DC诱导的CTL细胞群体以CD4、CD8阳性细胞组成为主。在接种CNE细胞3周后建立表达EBV-LMP2A的裸鼠鼻咽癌动物模型;动物体内实验表明注射CTL的裸鼠肿瘤生长缓慢,体积明显小于对照组(P<0.01);病理检查显示肿瘤局部发生液化性坏死并有淋巴细胞浸润。结论人外周血单核细胞体外经细胞因子诱导,可生成具典型特征的成熟DC。利用LMP2A重组腺病毒将LMP2A基因转入DC,可在同一个体体外诱导出针对LMP2A的特异性CTL。CNE细胞接种裸鼠,可成功构建鼻咽癌动物模型;LMP2A特异性CTL在动物体内可明显抑制鼻咽癌肿瘤的生长,发挥有效的抗肿瘤作用。; 徐洁洁姚堃俞晨杰陈曦陆美萍丁传林孙华李百周; 关键词：鼻咽肿瘤膜蛋白树突细胞

有移位的股骨颈骨折内固定术后股骨头缺血坏死13例原因分析: 1996年; 股骨头缺血坏死是股骨颈骨折后主要并发症之一。我科从1988年4月至1993年4月用闭合复位内固定术治疗有移位的股骨颈骨折共40例,经2至5年随访,其中13例发生股骨头缺血性坏死,初步分析如下。 1 临床资料 1.1 本组13例,男7例,女6例;年龄17至71岁,平均56岁。新鲜骨折10例,陈旧骨折3例。Pauwel氏角45°—80°,平均65°。头下型骨折5例,头颈型骨折6例,经颈型骨折2例。GardenⅢ型3例,; 杜习光吴仲华刘芝华孙华; 关键词：股骨颈骨折内固定股骨头缺血坏死

南京市小肠结肠炎耶尔森氏菌主要毒力基因分析: 目的了解南京地区从不同来源分离的小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力基因的分布情况。方法聚合酶链反应(PCR)技术进行不同血清生物型菌株的毒力基因检测。结果分离到的9株血清型O:3菌株有7株的基因型分布为ail+,ystA+,yst...; 许文炯丁洁吴咏梅孙华王炜; 关键词：小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力基因; 文献传递

含EB病毒LMP2A毕氏酵母表达载体的构建与表达LMP2A蛋白的检测被引量：2: 2004年; 目的:构建EB病毒潜伏膜蛋白2A的表达载体,并在真核生物毕氏酵母细胞中表达。方法:用EcoR I和Not I将含LMP2A全长编码基因的质粒PCIcc双酶切后,克隆到毕氏酵母载体PICZαA中,构建重组表达质粒pPICZαA-LMP2A。pICZαA-LMP2A经Sac I酶切线性化,采用氯化锂的方法转化毕氏酵母GS115,经YPD平板Zeocine抗性筛选获得LMP2A阳性克隆的菌株,用PCR鉴定阳性酵母转化子,并分别将阳性的酵母转化子在BMGY和BMMY培养基中进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE电泳和western-blotting分析。结果:重组质粒pPICZαA-LMP2A经PCR和酶切鉴定为阳性。SDS-PAGE电泳和western-blotting结果显示表达蛋白的相对分子量为54 Kda,与预计值相同。结论:构建了LMP2A毕氏酵母表达载体,并在酵母细胞中成功表达。; 陈云姚堃孙华彭光勇丁传林谢芳艺周峰; 关键词：EB病毒毕氏酵母肿瘤免疫疗法

应用多重反转录PCR技术检测病毒性呼吸道感染被引量：8: 2004年; 目的为了寻求呼吸道感染病毒的快速诊断并指导治疗,建立一种多重反转录PCR体系。方法分别设计针对肠病毒、腺病毒、乙型流感病毒和甲型流感病毒标准株的特异性引物,采用多重反转录PCR检测4种病毒。结果应用此多重反转录PCR系统可以特异的同时检测到同一模板中的肠病毒、腺病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒。通过用多重反转录PCR和单一PCR对36份临床标本的检测相比较,结果表明多重反转录PCR的检测与单一PCR的检测结果是一致的。结论通过与单一的PCR对比,证明该多重反转录PCR系统可替代单一的PCR用于肠病毒、腺病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒引起的呼吸道感染的快速诊断。; 冯东举周锋周世新孙华马春玲姚堃; 关键词：肠病毒腺病毒甲型流感病毒乙型流感病毒

EB病毒潜伏膜蛋白2A转染树突状细胞诱导特异性CTL杀伤鼻咽癌的体外、体内研究: 目的:本课题选用EB病毒LMP2A作为鼻咽癌免疫治疗的靶抗原,在体外培养体系中诱导扩增树突状细胞的基础上,以LMP2A重组腺病毒转染DC,诱导出针对LMP2A的特异性CTL,观察其对表达LMP2A的鼻咽癌细胞株(CNE)...; 徐洁洁姚堃俞晨杰陈曦陆美萍丁传林孙华李百周; 关键词：EB病毒树突状细胞细胞毒性T细胞鼻咽癌; 文献传递

Modulation of Lianbizi Injection (Andrographolide ) on Some Immune Functions被引量：24: 2004年; Objective: To study the effects of andrographolide on immune functions and the immune mechanism in clinical therapy.Methods: The amounts of IFN-α,IFN-γ, TNF-α, IL-8 in the peripheral blood mononuclear cells (PBMC) culture supernatants dealt with by different concentrations of LianBiZhi (LBZ) injection, the effective component of which is andrographolide, were detected by biological activity test or ELISA in vitro. The effects of LBZ injection on macrophage phagocytotic function and natural killer cells cytotoxicity were examined by means of macrophage to phagocytize cock erythrocyte and measurement of lactate dehydrogenase (LDH) activity released from the damaged cells, respectively.Results: The LBZ injection could not only enhance the phagocytosis activity of peritoneal macrophage from guinea pig to phagocytosis cock erythrocytes, but also augment the cytotoxicity mediated by natural killer cells from PBMCs.Conclusion: Andrographolide is an immunostimulant agent which can modulate both antigen specific and nonspecific immune function by means of its natural killer cells, macrophage and cytokines.; 周锋秦健朱建中彭光勇孙华丁如宁李焕娣姚堃; 关键词：ANDROGRAPHOLIDE MACROPHAGE CYTOKINES

重组EB病毒潜伏膜蛋白2A在鼻咽癌检测中的应用: 本发明涉及鼻咽癌的检测，具体是重组EB病毒潜伏膜蛋白2A在鼻咽癌检测中的应用。重组EB病毒潜伏膜蛋白2A在鼻咽癌检测中的应用，具体地，是用重组LMP2A作为抗原，用ELISA法对血清样本进行抗LMP2A抗体检测，结果大于...; 姚堃陈云彭光勇孙华谢芳艺丁传林周峰吴文翰; 文献传递

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孙华

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