DNA shuffling技术可以定向进化干扰素,获得比rhIFN-α2b标准品更高比活的干扰素。rhIFN-α2b基因与Infergen基因用DNaseI酶切成30～50 bp小片段,回收之后进行无引物PCR重聚和有引物PCR扩增基因。将重组基因连接到载体pUC19中,转化至DH5α并挑选阳性克隆测序。将测序正确的突变基因连接到载体pET30a中并转化至BL21(DE3)中,然后诱导蛋白表达、SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot分析。经过表达细胞诱导、细胞裂解、包涵体变性、复性和单克隆抗体亲和层析之后,获得高纯度的重组干扰素。经测定纯化后的重组干扰素比活达到5.8×108IU/mg,比rhIFN-α2b标准品高出5倍左右。实验结果证明此实验方法对提高干扰素的比活是有效的,可以获得比标准品更高比活的干扰素。
