张丽娜
- 作品数：10 被引量：6H指数：2
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- 自体NK细胞体外活化扩增培养的方法及其专用培养基
- 本发明公开了一种自体NK细胞体外活化扩增培养的方法及其专用培养基。该方法是利用如下成套培养基并同时添加饲养细胞体外活化扩增自体NK细胞：由培养基1、培养基2和培养基3组成的成套培养基；所述培养基1是在干细胞生长培养基中添...
- 赵卫东金夏马杰周虎周颖冯定庆张丽娜宣恒华丁玉兰桂云程敏李青王晓丽
- 文献传递
- 不同刺激因子组合诱导NK细胞体外扩增及其功能的研究被引量：3
- 2011年
- 目的探讨不同刺激因子组合对人自然杀伤细胞(NK细胞)体外扩增及其功能的影响。方法 VarioMACS分选健康成人外周血单个核细胞(PBMC)中的NK细胞,依据添加刺激因子的不同分为A组(IL-2)、B组(IL-2+IL-15)、C组(IL-2+IL-15+饲养细胞),饲养细胞为30 Gyγ射线照射后的同种异体外周血单个核细胞(allogeneic PB-MNCs,AlloMNCs),未添加任何刺激因子的细胞的作为对照组,在干细胞生长培养基(SCGM)中进行培养扩增14 d,第1天添加PHA及OKT3,第5天离心洗去;台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术检测分选及扩增前后CD56+CD3-NK细胞纯度;改良的MTT法检测NK细胞对K562、HO8910及PBMC的杀伤活性。结果经VarioMACS免疫磁珠阴性分选后NK细胞纯度由分选前的(9.2±2.9)%提高到(93.5±3.2)%,培养14 d后,除对照组NK细胞纯度降低外,其余组与扩增前无明显差异(P>0.05)。细胞扩增倍数分别为17.2±1.7、51.3±6.6和82.4±9.8倍,均显著高于对照组(5.7±1.2)(P<0.01)。实验组组间比较,C组明显高于A组和B组(P<0.01)。细胞杀伤实验表明,当效靶比为10∶1时,各组的杀伤活性显示为C组>B组>A组>对照组,C组扩增的NK细胞对K562及HO8910的杀伤率可分别达到(70.1±8.9)%和(64.6±6.2)%,显著高于对照组、A组(P<0.01)和B组(P<0.05),对PBMC的杀伤率仅为(4.2±1.2)%。结论经VarioMACS分选获得的NK细胞,在体外使用SCGM培养基培养,添加IL-2、IL-15和照射后AlloMNCs作为刺激因子,可获得高效扩增和有效活化的NK细胞,为NK细胞的肿瘤过继免疫治疗提供了一种简单有效的扩增高纯度NK细胞的方法。
- 马杰赵卫东张丽娜周虎丁玉兰宣恒华桂云金夏
- 关键词：自然杀伤细胞扩增饲养细胞免疫治疗
- 辐照后的AlloMNCs诱导NK细胞体外扩增
- 2011年
- 目的探讨照射后的同种异体外周血单个核细胞(allogeneic PB-MNCs,AlloMNCs)对人自然杀伤细胞(NK)体外扩增的影响,为NK细胞的过继免疫治疗奠定基础。方法 Ficoll密度梯度离心法分离健康成人外周血单个核细胞(PBMCs),30、50和70 Gyγ射线照射后的AlloMNCs作为饲养细胞,分别加入上述PBMCs,在添加细胞因子的X-VIVO15TM无血清培养基中进行培养扩增,同时选择未添加饲养细胞的作为对照组;台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术检测CD56+CD3-NK细胞纯度;MTT法检测细胞杀伤活性。结果加入饲养细胞的PBMCs在添加了细胞因子的X-VIVO15TM无血清培养基中可培养21 d,30 Gy照射后的AlloMNCs作为饲养细胞时细胞扩增最明显,在第21天时扩增了270.3±10.4倍,CD56+CD3-NK细胞纯度由培养前的(9.7±2.4)%提高到扩增后的(56.5±7.8)%,与无饲养细胞的对照组相比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞杀伤实验表明,当效靶比为10∶1时,添加30Gy照射后的AlloMNCs刺激扩增的NK细胞对K562和HO8910的杀伤率平均达到59.7%、63.2%,分别与对照组的28.3%、32.2%相比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 30 Gy照射后的AlloMNCs可作为饲养细胞在体外促进NK细胞的增殖,为NK细胞的肿瘤过继免疫治疗提供了一种简单有效的扩增NK细胞的方法。
- 马杰赵卫东周虎张丽娜丁玉兰宣恒华桂云金夏
- 关键词：自然杀伤细胞扩增饲养细胞免疫治疗
- IL-15基因修饰的NK细胞对原代卵巢癌细胞的杀伤作用被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨γ射线照射后的IL-15基因修饰的NK细胞(简称NK-ustc细胞)对原代卵巢癌细胞的体内外杀伤活性。方法:分离卵巢癌患者腹水原代卵巢癌细胞。不同剂量γ射线(0、1、2、4、8、16 Gy)照射NK-ustc细胞,3H-TdR掺入法检测照射后NK-ustc细胞的增殖情况,51Cr释放法检测NK-ustc细胞对K562和原代卵巢癌细胞的杀伤活性。建立人裸鼠荷卵巢癌模型,随机分为NK-ustc治疗组(模型鼠腹腔注射辐照后的NK-ustc细胞)和培养基对照组,同时设空白对照组(正常裸鼠腹腔注射辐照后的NK-ustc细胞),观察各组裸鼠体重、腹围及生存期。结果:1、2、4、8、16 Gy辐照后NK-ustc细胞的增殖率分别为(62.1±9.8)%、(41.3±8.7)%、(14.6±4.1)%、(0.1±0.03)%和(0.2±0.04)%。当效靶比为10∶1时,0、8 Gy辐照后NK-ustc细胞对K562的杀伤率分别为(45.4±8.9)%和(43.1±6.4)%,对原代卵巢癌细胞的杀伤率分别为(54.6±6.4)%和(48.3±5.8)%,说明辐照不影响NK-ustc细胞的杀伤活性(P>0.05)。辐照后NK-ustc细胞治疗组荷瘤小鼠的中位生存期为75 d,对照组为39 d(P<0.05),空白对照组小鼠全部存活。结论:γ射线照射可有效抑制NK-ustc细胞增殖,但保留该细胞对原代卵巢癌细胞的杀伤活性。
- 马杰赵卫东马娟金夏张丽娜丁玉兰周虎宣恒华桂云
- 关键词：自然杀伤细胞卵巢癌免疫治疗
- 丙戊酸钠联合顺氯氨铂对子宫颈癌的作用机制研究
- 2011年
- 目的探讨丙戊酸钠(VPA)联合化疗药物顺铂(DDP)对子宫颈癌作用机制。方法采用3 mmol/L VPA及不同浓度(0.5、1、2.5μg/ml)DDP单独或联合作用于子宫颈癌HeLa细胞,对照组仅加溶媒;VPA 300 mg/(kg.d)-1,DDP 2 mg/kg,每周2次,作用于HeLa细胞接种后成瘤的裸鼠;二甲基四氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖抑制;RT-PCR检测细胞及移植瘤中p53,p53上调凋亡调控因子(PUMA)及Bax、Bcl-XL的mRNA表达;Western blot检测细胞及移植瘤中组蛋白H3乙酰化(acetylases histone 3,AC-H3)水平及p53蛋白表达。结果 VPA对宫颈癌HeLa细胞株有明显的生长抑制作用,联合DDP后优于VPA及DDP单药组;荷瘤鼠给药28 d后各组肿瘤体积(mm3):对照组3 155.3±238.7,VPA组1 936.7±207.7,DDP组1 349.9±267.5,VPA+DDP组357.3±212.2,用药组和对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR显示VPA可在mRNA水平上增强p53、PUMA及Bax的表达,减弱Bcl-XL的表达,且联合DDP组效果更明显,与对照组及单药组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot显示VPA单独及联合DDP均明显提高细胞及移植瘤中AC-H3及p53和激活型半胱氨酸蛋白酶3(active-caspase-3)的蛋白表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 VPA联合DDP在体外可杀伤子宫颈癌HeLa细胞,体内可抑制荷瘤裸鼠肿瘤体积增长,而AC-H3及p53和active-caspase-3的表达升高可能为其作用机制。
- 曹振平冯定庆李彩荣张丽娜刘然凌斌
- 关键词：丙戊酸肿瘤抑制蛋白质P53半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3宫颈肿瘤
- 自体NK细胞体外活化扩增培养的方法及其专用培养基
- 本发明公开了一种自体NK细胞体外活化扩增培养的方法及其专用培养基。该方法是利用如下成套培养基并同时添加饲养细胞体外活化扩增自体NK细胞：由培养基1、培养基2和培养基3组成的成套培养基；所述培养基1是在干细胞生长培养基中添...
- 赵卫东金夏马杰周虎周颖冯定庆张丽娜宣恒华丁玉兰桂云程敏李青王晓丽
- 丙戊酸钠协同顺铂对HO8910细胞杀伤作用机制研究
- 2011年
- 目的:探讨丙戊酸钠(VPA)协同顺铂(DDP)对人卵巢癌HO8910细胞的杀伤作用及机制。方法:以1μg/m l DDP联合3mmol/L VPA处理细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;光镜下观察药物作用下各组细胞形态学的改变;流式细胞术检测细胞周期阻滞情况;RT-PCR法检测p53、p21 mRNA水平表达的改变;W estern blot法检测Ac-H3、p53、p21、Cyclin D1蛋白水平表达的改变。结果:(1)VPA能明显抑制HO8910细胞生长,且呈剂量和时间依赖性,VPA+DDP处理组抑制率高于DDP处理组,组间差异有统计学意义(P<0.05);(2)光镜下观察细胞形态,可见VPA处理组细胞体积缩小呈长梭型,胞膜皱缩,贴壁不良,VPA+DDP组改变更明显;(3)VPA阻滞卵巢癌HO8910细胞周期于G0/G1期,VPA+DDP组S期细胞明显减少;(4)VPA及VPA联合DDP均能够明显提高卵巢癌HO8910细胞组蛋白H3的乙酰化水平,上调p53、p21 mRNA及蛋白表达水平,降低CyclinD1蛋白的表达水平,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VPA能够协同DDP杀伤卵巢癌细胞HO8910;其作用机制可能与VPA提高组蛋白乙酰化水平,上调p53、p21基因表达和下调Cyclin D1表达,引发细胞周期阻滞有关。
- 张丽娜马杰曹振平李彩荣冯定庆赵卫东
- 关键词：卵巢肿瘤丙戊酸钠顺铂细胞周期
- 肿瘤干细胞与卵巢癌研究进展
- 2010年
- 近年肿瘤干细胞理论及其相关研究引起关注。该理论认为,肿瘤干细胞是恶性肿瘤发生、耐药、复发及转移的根源,并最终导致恶性肿瘤靶向治疗失败,难以根治。卵巢癌治疗的最大障碍是肿瘤细胞耐药性的产生,肿瘤干细胞的研究对解决卵巢癌等恶性肿瘤的高耐药、复发难题有重要意义。目前,卵巢癌干细胞已经成功分离鉴定,但此方面的研究尚处于开始阶段。从肿瘤干细胞角度对卵巢癌干细胞的性质及分离鉴定方法综述。
- 张丽娜赵卫东
- 关键词：肿瘤干细胞卵巢癌SP细胞流式细胞仪
- 组蛋白去乙酰化酶抑制剂治疗卵巢癌的研究进展被引量：2
- 2011年
- 卵巢癌是致死率最高的妇科恶性肿瘤,其发病机制的探讨是肿瘤研究领域的难点,近年研究发现卵巢癌的发生与表观遗传学改变密切相关,针对影响表观遗传的重要分子靶标组蛋白去乙酰化酶的研究成为新热点。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDAC Is)可以明显地抑制卵巢癌细胞生长,诱导细胞周期阻滞、分化和凋亡,抑制卵巢癌相关致癌基因的表达,具有抗肿瘤活性且无明显不良反应,提示HDACIs为卵巢癌的治疗提供了一种新策略。
- 张丽娜赵卫东
- 关键词：卵巢癌组蛋白去乙酰化酶细胞凋亡
- 丙戊酸钠联合顺铂对HO-8910细胞增殖的影响及机制
- 2011年
- 目的:探讨丙戊酸钠(VPA)联合顺铂(DDP)对体外培养的人卵巢癌细胞HO-8910细胞增殖抑制和凋亡作用及机制。方法:3 mM浓度的VPA、1μg/m l的DDP及VPA联合DDP分别处理人卵巢癌细胞株HO-8910不同时间(24、48、72 h)后,采用MTT法检测细胞的增殖活性;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡形态学改变;RT-PCR检测p53基因mRNA水平表达变化;W estern b lot法检测p53及Stat3蛋白表达变化。结果:VPA对卵巢癌HO-8910细胞株有生长抑制作用,且VPA联合DDP优于单独用药(P<0.05);Hochest 33258荧光染色结果显示,用药后细胞呈现明显的核碎裂、核固缩等典型凋亡改变,VPA联合DDP组细胞凋亡改变较单独用药组明显(P<0.05);RT-PCR检测显示VPA单独用药及联合DDP用药均能提高p53基因的mRNA表达水平;W estern b lot结果显示VPA联合DDP显著增强卵巢癌HO-8910细胞中p53蛋白表达,降低Stat3蛋白的表达,联合用药组效果更明显。结论:VPA单独用药在体外可有效杀伤卵巢癌HO-8910细胞株,与DDP联合应用具有明显的协同作用,推测其可能的作用机制是诱导p53表达水平上调及Stat3表达水平下调。
- 赵卫东张丽娜马杰王晓丽冯定庆
- 关键词：卵巢肿瘤丙戊酸钠顺铂
