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效应因子PsCRN77基因在本氏烟中的表达降低其对寄生疫霉的抗性被引量：2: 2015年; CRN(Crinkler)是一类疫霉菌胞内效应因子,绝大多数CRN的功能和作用机制尚不明确。本研究利用农杆菌介导的瞬时表达技术,发现大豆疫霉效应因子PsC RN77可以在本氏烟中抑制激发子诱导的细胞死亡。接种分析表明在本氏烟中表达该效应因子基因可以促进寄生疫霉的侵染。定量RT-PCR结果显示在本氏烟中表达PsCRN77可以负调控水杨酸信号途径标记基因PRb-1b的表达,正调控茉莉酸信号途径标记基因LOX的表达。进一步通过DAB染色表明,与表达GFP对照相比,表达PsCRN77可以降低疫霉菌侵染后本氏烟中的活性氧积累。以上结果表明PsCRN77是一个毒性效应因子,可以通过影响激素抗性信号途径和活性氧积累干扰植物的防卫反应,促进病原菌的侵染。该研究为认识疫霉菌的致病机制提供了线索。; 张美祥刘廷利茹艳艳张琪梦窦道龙; 关键词：CRN 细胞死亡毒性免疫反应

小麦CEN/TFL1-like cDNA克隆及其编码序列分析被引量：1: 2007年; 以水稻、金鱼草、拟南芥CEN/TFL1蛋白质序列为参考,以小麦中CEN/TFL1基因同源EST片段为依据设计特异引物,利用RT-PCR从普通小麦‘中国春’幼穗总RNA中扩增出549 bp的特异片段。测序结果表明,该片段包含了完整的ORF,编码产物为典型的CEN/TFL1-like蛋白家族成员。序列比对表明,该基因编码产物与黑麦草LpTFL1、水稻FDR2和FDR1以及玉米ZmTFL1亲缘关系最近,分别具有96.5%、96.0%、93.6%和95.4%的相似性;与哺乳动物Rattus norveqicus磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)具有38.9%相似性。空间结构预测表明,该蛋白具有PEBP家族成员的典型三维结构。; 齐亚飞瞿小青闫晓华张美祥范三红; 关键词：小麦 RT-PCR 磷脂酰乙醇胺结合蛋白表达序列标签

小麦ramosa2基因的克隆与序列分析被引量：6: 2007年; 为了研究ramosa2基因在小麦中的功能,以普通小麦（Triticum aestivumL）中国春基因组为模板,玉米、高粱、水稻和大麦中ramosa2基因保守序列为参考设计引物,扩增到1条全长为771 bp的目的片段。序列分析表明,该核酸序列与高粱、玉米、水稻和大麦中ramosa2基因的同源性高达82.9%-95.2%;其预测编码的氨基酸序列与高粱、玉米、水稻和大麦ramosa2基因的氨基酸序列同源性达79.2%-95%。; 闫晓华韩撵法张美祥金伟波郭蔼光范三红; 关键词：小麦同源克隆

卵菌胞内效应子研究进展被引量：2: 2018年; 卵菌可引起毁灭性的植物病害,在侵染过程中分泌大量的胞内效应子进入植物细胞干扰寄主免疫反应。目前主要针对CRN(crinkling and necrosis protein)和RXLR(R:精氨酸;X:任意氨基酸;L:亮氨酸)两类胞内效应子进行了大量研究。近年来对这两类卵菌胞内效应子的研究进展迅速,极大地推动了我们对卵菌致病机制的认识。本文将从卵菌胞内效应子的进化、转运、功能和作用机制等方面对近年来的进展进行综述,并对今后的研究方向进行展望。; 张美祥; 关键词：卵菌植物免疫毒性机制

辣椒疫霉菌PiAvr3a-like基因的鉴定及功能分析被引量：2: 2016年; 疫霉菌分泌的RxLR效应子能干扰寄主植物细胞的正常生理代谢和功能。我们通过同源序列搜索在辣椒疫霉菌中鉴定到9个PiAvr3a的同源基因(PiAvr3a-like),同时发现PiAvr3a-like在大豆疫霉菌中也有分布,表明该类基因可能在疫霉菌致病过程中发挥重要作用。从辣椒疫霉菌中成功克隆了5个PiAvr3a-like基因,表达模式分析发现PcAvh128/132/134这3个基因在疫霉菌侵染早期诱导表达,暗示它们可能在侵染前期发挥功能。接种实验表明在本氏烟中瞬时表达其中的PcAvh128可以显著促进辣椒疫霉菌的侵染,而PcAvh132活性相反,其他3个基因没有明显活性。这5个基因均不能抑制INF1和效应因子诱导的细胞死亡,也不能诱导可见的过敏反应。上述结果表明PiAvr3a-like基因不同成员之间功能存在分化,这为疫霉菌和寄主的分子互作研究提供了材料和参考。; 许静张美祥叶廷跃沈丹宇窦道龙; 关键词：辣椒疫霉菌毒性细胞死亡

NbRbohB基因在本氏烟与疫霉菌互作中的功能分析: 2014年; 活性氧(active oxygen species,AOS)在植物抗病中发挥着重要作用,主要由NADPH氧化酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase)系统产生。为明确NADPH氧化酶NbRboh B基因在本氏烟与疫霉菌亲和与非亲和性互作中的功能,采用荧光定量PCR技术以及病毒诱导的基因沉默方法探究了NbRboh B基因在本氏烟中对2种疫霉菌抗性中的作用,并利用NADPH氧化酶抑制剂对辣椒疫霉的抗性进行了检测。结果发现:2种疫霉菌均能诱导本氏烟发生氧迸发,且NbRboh B基因可能参与了疫霉菌诱导本氏烟发生的氧迸发过程。该基因沉默后降低了本氏烟对亲和互作辣椒疫霉菌的抗性,但对非亲和互作疫霉菌的抗性没有肉眼可见的影响;NADPH氧化酶抑制剂处理本氏烟后也能降低其对辣椒疫霉的抗性。表明该基因通过介导AOS产生,参与植物对亲和性与非亲和性互作疫霉的抗病反应,在亲和互作中尤为重要。; 卢晓雪卢珊马丽娜张美祥窦道龙; 关键词：活性氧 NADPH氧化酶植物抗病性

拟南芥脂肪酸α-双加氧酶DOX1和DOX2的原核表达、纯化及DOX1可变剪切研究: 抗病相关基因是植物分子生物学研究的热点领域之一。脂肪酸alpha双加氧酶/(fatty acid alpha-Dioxygenase/)是近年来植物中发现的一类重要的抗病相关基因,已在多个物种中相继发现并得以克隆。脂肪酸...; 张美祥; 关键词：纯化; 文献传递

寄生疫霉菌结构独特的质膜氢离子通道蛋白基因PnPMA1功能的初步研究: 疫霉菌在分类学上隶属于卵菌,是一类形态和侵染特征与真菌类似的真核微生物。疫霉菌能够侵染许多重要的农作物和花卉植物,可引起毁灭性的植物病害,每年在世界范围内造成巨大的经济损失。系统发育研究表明,卵菌在进化上与真菌相距较远,...; 张美祥; 关键词：卵菌游动孢子; 文献传递

拟南芥Alpha-dioxygenase1的原核表达、纯化及活性的检测被引量：3: 2008年; 从经水杨酸处理的拟南芥开花期植株中获得cDNA,扩增得到Alpha-dioxygenase 1(DOX1)基因,进行原核表达、纯化和生物活性检测。利用原核表达载体pMAL-c4x在T7 Express CompetentE.coli和BL21(DE3)-RIPL codon+菌株中表达DOX1,经Amylose Resin亲和层析柱纯化。SDS-PAGE结果表明,重组融合蛋白在BL21(DE3)-RIPL codon+中的表达通过灰度值比较分析以可溶性为主,表达率约3.7%,纯化的DOX1纯度可达45%。愈创木酚法表明,可溶性重组蛋白不具有过氧化物酶活性;2,4-DNP法测试表明可溶性重组蛋白具有脂肪酸双加氧酶活性。; 张小梅韩念法张美祥李广录范三红郭蔼光; 关键词：活性

在本氏烟中瞬时表达效应因子PsCRN127基因提高其对寄生疫霉的抗性被引量：3: 2015年; [目的]本研究对一个具有植物细胞死亡抑制活性的大豆疫霉效应因子Ps CRN127进行功能分析,为认识疫霉菌的致病机制和利用效应因子来提高植物抗病性提供参考。[方法]利用农杆菌介导的瞬时表达技术,分析Ps CRN127的细胞死亡调控活性;利用寄生疫霉游动孢子接种本氏烟离体叶片评估Ps CRN127对植物防卫反应的影响;利用实时定量RT-PCR检测本氏烟中激素抗病信号途径标记基因的表达;利用DAB染色检测本氏烟接种叶片中过氧化氢的积累;利用与GFP融合的方法观察Ps CRN127的亚细胞定位。[结果]在本氏烟中表达Ps CRN127可以抑制由INF1、Psoj NIP、Ps CRN63、Bax和Avh241诱导的植物细胞死亡,并且可以提高其对寄生疫霉的抗性;Ps CRN127可能通过提高激素抗性信号途径相关基因的表达和过氧化氢的积累来提高植物抗病性;Ps CRN127定位于植物的细胞质和细胞核中。[结论]大豆疫霉可能通过分泌具有广泛细胞死亡抑制活性的CRN效应因子Ps CRN27来调控植物的细胞死亡和防卫反应;可以直接应用这些疫霉菌效应因子提高植物的抗病性。; 张美祥安玉艳刘廷利茹艳艳李文号窦道龙; 关键词：防卫反应抗病性

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