方泽民
- 作品数：96 被引量：72H指数：5
- 供职机构：安徽大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程农业科学医药卫生更多>>
- 一种高比活生淀粉水解酶突变体、其编码基因、表达菌株及其应用
- 本发明公开了一种高比活生淀粉水解酶突变体、其编码基因、表达菌株及其应用，本发明以稳定性欠佳的α‑淀粉酶Amy为出发酶，经过定点突变，获得了热稳定性提高的突变体Amy:ΔTG/W345A。以玉米生淀粉为底物时，突变体的比酶...
- 肖亚中何玉房伟张学成方泽民
- β-葡萄糖苷酶与透明颤菌血红蛋白在大肠杆菌中的共表达被引量：3
- 2018年
- 为解决大肠杆菌高密度发酵生产β-葡萄糖苷酶过程中溶氧不足的问题,分别采用双顺反子和T7启动子系统在Escherichia coli中引入透明颤菌血红蛋白(VHb)以改善溶氧的利用、提高菌体的生物量,进而增加β-葡萄糖苷酶的产量。以双顺反子形式诱导表达VHb时,在摇瓶低溶解氧条件下的最高生物量达到4.24±0.29(OD_(600)),与无VHb表达的对照组相比提高了35.03%,同时β-葡萄糖苷酶发酵酶活达到了(9.78±0.55)U/m L,比对照组提高了25.38%。在3 L发酵罐中使用双顺反子形式共表达VHb时,β-葡萄糖苷酶发酵总酶活达到141.23 U/m L,与无VHb表达的对照相比提高了35.57%。以T7启动子对VHb进行表达后,在摇瓶和发酵罐中β-葡萄糖苷酶的发酵酶活均低于对照组。这些结果表明,在大肠杆菌中以双顺反子形式共表达β-葡萄糖苷酶和VHb能够提升菌体对低溶氧的耐受能力,提高菌体生物量和β-葡萄糖苷酶的产量。
- 邓发军潘宇常飞房伟方泽民肖亚中
- 关键词：Β-葡萄糖苷酶大肠杆菌双顺反子
- 一种真菌漆酶突变体PIE5及其表达菌株和应用
- 本发明公开了一种真菌漆酶突变体PIE5及其表达菌株和应用，其中真菌漆酶突变体PIE5，是以定向进化手段对灰盖鬼伞漆酶Lcc9进行改造，构建突变文库，结合三轮筛选方法，获得的漆酶突变体，以提高漆酶的应用能力。本发明真菌漆酶...
- 肖亚中尹强方泽民张学成房伟
- 文献传递
- 生淀粉水解α-淀粉酶Amy486的重组表达和性质分析
- 2024年
- 为明晰生淀粉水解α-淀粉酶Amy486独特的催化特征,将克隆自Exiguobacterium sp.J84菌株的amy486进行重组表达,并研究重组酶的酶学性质、嗜盐特性和钙离子依赖性。Amy486最适催化pH为7.5,在pH 6.5~8.5范围内酶活力保持40%以上,最适温度为35℃,30℃半衰期为100 h。1.5 mol/L Na_(2)SO_(4)处理可将Amy486的比酶活由1.53 U/mg提升至2209 U/mg。添加1.0 mol/L Na_(2)SO_(4),Amy486在35℃放置500 h,酶活力可保持60%以上。2.5 mmol/L CaCl_(2)可提升酶活力至110%,添加超过5 mmol/L CaCl_(2),Amy486的相对酶活力降至100%以下,EDTA孵育对Amy486蛋白的酶活力和稳定性影响较小。Amy486与钙离子结合的关键位点为K_(3)0_(2),K_(3)0_(2)E与钙离子的结合能力增强,从而降低该酶对外源钙离子的依赖性。α-淀粉酶Amy486及其突变体酶K_(3)0_(2)E是具有较高比酶活的生淀粉水解酶,对外源钙离子的依赖性较低,其活力的发挥依赖于适合的盐浓度,可应用于某些高盐环境下的淀粉水解。
- 陈新高欢欢汪斌张学成方泽民肖亚中房伟
- 关键词：Α-淀粉酶生淀粉
- 一种蔗糖酶基因及其表达与应用
- 本发明公开了一种蔗糖酶基因及其表达与应用，该蔗糖酶基因序列如SEQ ID No:1所示，该蔗糖酶是具有SEQ ID No:2所示的氨基酸序列的多肽；本发明还公开了含有该蔗糖酶的表达质粒和菌株。本发明所述蔗糖酶来自土壤微生...
- 方泽民肖亚中孙秋影房伟
- 文献传递
- 一种真菌漆酶诱导活性化合物及其发酵制备方法与应用
- 本发明属化合物分离纯化技术领域，涉及一种微生物来源的新型真菌漆酶高效诱导化合物的发酵制备、分离纯化工艺，及其在诱导真菌漆酶生产方面的应用。其特征在于包括下述步骤：通过真菌发酵制备含有活性化合物的发酵液，经过萃取获得的活性...
- 肖亚中方泽民刘娟娟洪宇植房伟
- 文献传递
- 黏细菌漆酶序列筛选及其重组酶酶学性质被引量：2
- 2017年
- 漆酶是一种应用广泛的绿色环保的多酚氧化酶。漆酶过去被认为广泛存在于植物、昆虫和真菌中,而近年来,越来越多的细菌中也发现了漆酶的存在。黏细菌是一类重要的资源菌,但与一般细菌相比,较难分离和纯化。文中利用生物信息学的方法,综合应用Blast和隐马尔可夫模型方法对黏细菌蛋白质组数据库进行搜索,并根据多铜氧化酶的保守铜离子结合位点进行进一步筛选,获得30个候选黏细菌漆酶序列。挑选其中9个,在大肠杆菌中进行重组表达。利用2,6-甲氧基苯酚(DMP)等常用漆酶底物检测重组酶的催化氧化活性,其中7个重组蛋白具有漆酶催化活性。选择1个对2,6-甲氧基苯酚(DMP)具有较高氧化活性的重组酶(命名为rSC-2),通过Ni-NTA亲和层析柱纯化rSC-2,测试其酶学性质。纯化的rSC-2蛋白分子量约57 kDa,在最适反应条件下,rSC-2催化DMP反应的比酶活为0.27 U/mg。催化DMP反应的最适温度为60℃,最适pH为7.0。rSC-2在pH 7.0-8.0有较高酶活,在60℃孵育1 h保留50%以上剩余酶活。低浓度的Ca^(2+)对酶活有一定的促进作用,而较高浓度的Fe^(3+)、Co^(2+)、Ba^(2+)对酶活的抑制作用较明显。这是首次对黏细菌漆酶序列进行系统性的生物信息学分析,并实现纤维堆囊菌Sorangium cellulosum序列来源的漆酶活性蛋白在大肠杆菌细胞中重组表达。
- 赵秀艳常飞方泽民张寅良肖亚中
- 关键词：生物信息学分离纯化酶学性质
- 一种漆酶突变体Lcc5-SN及其在AFB1降解中的应用
- 本发明公开了一种漆酶突变体Lcc5‑SN及其在AFB1降解中的应用，其中漆酶突变体Lcc5‑SN的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明漆酶突变体Lcc5‑SN的酶活力为野生型Lcc5的2.67倍；氧化还原电势是...
- 方泽民朱雪玲刘娟娟
- 一种通过沉默灰盖鬼伞胞外蛋白酶高效表达漆酶Lcc5的方法
- 本发明公开了一种通过沉默灰盖鬼伞胞外蛋白酶高效表达漆酶Lcc5的方法，属于分子生物学和生物工程领域。本发明通过基因干扰技术，实现在丝状真菌灰盖鬼伞中干扰胞外金属蛋白酶的表达，继而提高灰盖鬼伞对漆酶Lcc5的表达。获得的金...
- 姚动邦冉杰方泽民刘娟娟张学成肖亚中
- 一种具有高比酶活力的生淀粉水解酶、其编码基因及其应用
- 本发明公开了一种具有高比酶活力的生淀粉水解酶、其编码基因及其应用，其中生淀粉水解酶名称为AmyZ1，其氨基酸序列为如下序列中的一种：(1)序列表中的SEQ ID No：2；(2)序列表中的SEQ ID No：2经取代、缺...
- 肖亚中房伟薛赛赛方泽民刘娟娟
- 文献传递
