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朱峥嵘
朱峥嵘
作品数:
3
被引量:5
H指数:1
供职机构:
中山大学附属第一医院
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
生物学
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合作作者
王深明
中山大学附属第一医院
殷恒讳
中山大学附属第一医院
肖颖
中山大学附属第一医院
王文见
中山大学附属第一医院
张远起
中山大学附属第一医院
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朱峥嵘
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王深明
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张远起
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王文见
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Desmuslin基因过表达对曲张静脉源性平滑肌细胞增殖及迁移功能的影响
2014年
目的 通过Desmuslin (DMN)重组逆转录病毒表达载体感染曲张大隐静脉源性平滑肌细胞(SMCs),观察上调DMN的表达后对SMCs功能的影响,探讨DMN与下肢静脉曲张发生发展的关系.方法 贴块法行曲张静脉源性SMCs原代培养,免疫荧光细胞化学法鉴定SMCs的纯度;分别运用已制备好平均滴度为(2.80±1.46)×10^6 cfu/ml的pRetroQ-AcGFP1-C1-DMN重组逆转录病毒与pRetroQ-AcGFP1-C1空载逆转录病毒感染SMCs;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot检测转染效率;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测比较SMCs的增殖活性;Transwell技术检测SMCs的迁移活性.结果 免疫荧光细胞化学法显示特异性的平滑肌α-肌动蛋白(α-actin)染色阳性的细胞数占总细胞数的99%以上;DMN过表达组的DMN mRNA水平为空载组的(8.3±1.1)×10^4倍(P<0.01),DMN蛋白表达为空载组的(4.5±1.2)倍(P<0.01);DMN过表达组SMCs增殖活性为空载组的(48.2±4.5)%(P<0.01);DMN过表达组细胞的迁移活性为空载组的(44.3±4.7)%(P<0.01).结论 在曲张静脉源性SMCs中上调DMN的表达后显著抑制SMCs的增殖及迁移活性,DMN蛋白可能在下肢静脉曲张的发生发展中起着重要作用.
张远起
王文见
殷恒讳
肖颖
朱峥嵘
黄水传
王深明
关键词:
逆转录病毒载体
血管平滑肌细胞
静脉曲张
下肢动脉硬化闭塞症的microRNA表达特点分析
被引量:4
2014年
目的探讨人下肢动脉硬化闭塞症(ASO)组织中microRNA的表达特征。方法采用microRNA芯片和real-time PCR芯片技术对正常人下肢动脉(3例)和ASO动脉(10例)中的microRNA的表达谱进行分析。结果正常动脉和ASO动脉的microRNA表达谱之间存在显著差异。MiR-21等microRNA表达上调明显(P<0.05),miR-1298(P<0.01)、miR-125b(P<0.001)、miR-140-3p(P<0.001)表达水平下降明显。进一步通过原位杂交染色发现,表达失调的microRNA主要定位于动脉壁中层平滑肌。结论与正常动脉相比,ASO组织中的microRNA表达谱显著不同,其在ASO发病中的作用有待于进一步研究。
何琼
王冕
常光其
姚陈
殷恒讳
朱峥嵘
胡伟
王深明
关键词:
下肢动脉硬化闭塞症
MICRORNA
动脉平滑肌细胞
Desmuslin基因逆转录病毒表达载体的构建及包装细胞株的建立
被引量:1
2012年
目的构建Desmuslin(DMN)基因的逆转录病毒表达载体,并建立其包装细胞株。方法聚合酶链式反应(PCR)扩增DMN基因的全长编码框(约3700bp),PCR产物(PCR—DMN)亚克隆至逆转录病毒载体pRetroQ—AcGFP1-C1,构建DMN基因的逆转录病毒表达载体pRetroQ—AcGFP1-C1-DMN,酶切及测序鉴定后,把重组质粒通过转染导人包装细胞株PT67,嘌呤霉素筛选后获得抗性克隆,293细胞进行病毒颗粒滴度测定。结果pRetroQ—AcGFP1-C1-DMN克隆的酶切鉴定和测序鉴定结果表明DMN基因的全长编码框被准确克隆至载体pRetroQ—AcGFP1-C1,其序列与理论序列完全-致;获取了稳定产生DMN逆转录病毒的PT67细胞克隆株,其产生的病毒原液平均病毒滴度为(2.80±1.46)×10^6cfu/ml。结论成功构建了Desmuslin基因逆转录病毒表达载体并建立了其包装细胞株。
张远起
王文见
殷恒讳
肖颖
姜雨刚
朱峥嵘
王深明
关键词:
逆转录病毒载体
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