朱瑞
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 用噬菌体随机多肽展示技术筛选阿尔茨海默病相关β-分泌酶的抑制剂
- 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease;AD)是常见的中枢神经系统退行性疾病之一,其主要病理特征是在大脑易受损区域的细胞内形成神经纤维缠结(NTF)和细胞外形成的淀粉样斑块(amyloid plaqt]es...
- 朱瑞
- 关键词：阿尔茨海默病淀粉样前体蛋白Β-分泌酶抑制剂噬菌体展示技术
- 文献传递
- 一种实用的β-分泌酶表达、纯化和活性鉴定方法
- 2015年
- 目的 探讨一种在常用真核细胞系中表达、纯化和鉴定阿尔茨海默病（AD）相关蛋白-β-分泌酶（BACE1）的方法. 方法 在从人脑基因库中获取BA CE1序列并成功扩增的基础上,将其插入带有增强绿色荧光蛋白（EGFP）的表达载体pEGFP-c3中.将BACE1/pEGFP-c3重组质粒用脂质体转染至HEK293细胞中表达,再通过TALON亲和色谱法分离纯化及酶切得到BACE1蛋白.用Western blotting及荧光共振能量共振转移（FRET）法鉴定BACE1的表达和体外活性.同时将BACE1/pEGFP-c3质粒与表达淀粉样前体蛋白（APP）的重组质粒（APP/pDsRed-Monomer-N1）共转染HEK293细胞,再以Western blotting法检测BACE1切割底物APP的效果. 结果 （1）实验获得的BA CE1基因与GenBank中的序列一致.（2）活性测定表明,空白对照组、标准BACE1阳性对照组、纯化的BACE1实验组的荧光强度分别为55.013 ±3.597、2639.548±207.190和1836.629±154.195,差异有统计学意义（F=78.681,P=0.000）,其中后2组差异无统计学意义（P＞0.05）.（3）Western blotting结果显示转染的BACE1在细胞内可切割底物APP并产生CTF-APP条带. 结论 本实验方法可成功获取BA CE1基因片段并在HEK293细胞中高效表达,同时具备生物学活性,可为AD临床药物的开发提供物质基础.
- 朱瑞伍巧燕张兴梅高小芳卫佩如张馨宇王方
- 关键词：阿尔茨海默病Β-分泌酶真核细胞
- 高可溶性Aβ融合蛋白的表达、纯化和鉴定
- 2010年
- 目的在大肠杆菌中表达阿尔茨海默病(AD)相关肽段Aβ与具有强助溶作用的麦芽糖结合蛋白(MBP)的融合蛋白,从而经济有效地获得具有天然免疫原性的Aβ肽段,为深入研究AD的发病机理和治疗药物提供重要的物质基础。方法用PCR法扩增Aβ的基因片段,并将其插入到含有麦芽糖结合蛋白的融合表达载体pMAL-c2中,经测序后再将重组质粒转化入大肠杆菌TB1中进行诱导表达。经多聚麦芽糖亲和色谱的纯化获得MBP-Aβ融合蛋白。再用SDS-PAGE及Western blotting鉴定Aβ及其融合蛋白的表达和免疫原性。结果测序结果证实插入的DNA片段与Aβ序列一致。SDS-PAGE电泳显示Aβ融合蛋白被高效表达。Western blotting结果表明Aβ及其融合蛋白可被其特异性抗体识别。结论在大肠杆菌中高效表达了可溶性的Aβ融合蛋白并经纯化和酶解后获得了Aβ纯肽段,为AD病机理的研究及其病理模型的建立提供了物质基础。
- 朱瑞郑传东王方
- 关键词：阿尔茨海默病APPAΒ原核表达融合蛋白
