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一种快速简便的卡介苗基因组DNA提纯方法被引量：1: 1995年; 一种快速简便的卡介苗基因组ＤＮＡ提纯方法同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室，武汉４３００３０梁驹卿，周火明，张大军，李东，皇甫永穆关键词卡介苗；基因组ＤＮＡ；ＤＮＡ提纯中图法分类号Ｒ３９２－３３．Ｑ３４３．１卡介苗（ＢＣＧ）除广泛用于预...; 梁驹卿周火明张大军李东皇甫永穆; 关键词：卡介苗基因组DNA DNA 提纯

分枝杆菌穿梭表达质粒的构建及外源基因在分枝杆菌中的稳定表达被引量：1: 1995年; 卡介苗（ＢＣＧ）是全球应用最广泛的疫苗，也是一种能携带多种致病菌保护性抗原表达的疫苗载体。本研究以ｐＵＣ１９为骨架，分别克隆入ＢＣＧ分泌抗原８５－Ｂ的调节和信号肽序列、Ｎｅｏ基因序列（编码卡那霉素抗性）以及分枝杆菌质粒复制基因，构建成分枝杆菌－大肠杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ－８０００。该重组质粒在分枝杆菌（含ＢＣＧ）、大肠杆菌两个系统中均能稳定复制，并能稳定表达卡那霉素抗性。本研究为把ＢＣＧ和其它分枝杆菌发展成为多价疫苗载体打下了基础。; 张大军皇甫永穆钱明梁驹卿李东; 关键词：分枝杆菌穿梭质粒卡介苗基因表达

人白细胞介素2基因在大肠杆菌中表达水平的提高及产物初步纯化被引量：2: 1994年; 利用双Tac启动子和改造后的人白细胞介素2（IL－2）cDNA，提高了IL－2在大肠杆菌（E．Coli）中的表达水平，并经包涵体制备、分子重新折叠及分子筛层析等技术，对表达的IL－2进行了提取、活性恢复与纯化，纯度可达95％。本工作为用基因工程方法生产人IL－2积累了经验。; 冯博王光惠李萍张大军李东皇甫永穆; 关键词：基因表达大肠杆菌白细胞介素2

质粒转化大肠杆菌方法的改进及受体菌转化效率的观察被引量：1: 1995年; 质粒转化大肠杆菌方法的改进及受体菌转化效率的观察同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室，武汉４３００３０张慧，程继忠，李东，张桂梅，冯作化关键词质粒；转化，细菌；大肠杆菌中图法分类号Ｑ７５，Ｒ３７，Ｒ３７８．２＋１质粒转化大肠杆菌是分子生物...; 张慧程继忠李东张桂梅冯作化; 关键词：质粒细菌大肠杆菌

三结构域重组纤连蛋白多肽在大肠杆菌中表达及其产物的纯化与鉴定: 1999年; 在大肠杆菌中表达了一种抗肿瘤转移多肽——人纤连蛋白（ＦＮ）的ＣｅｌｌＩ－Ｈｅｐ Ⅱ－ＣｅｌｌⅡ三结构域重组多肽（ＣＨ８２），表达效率达２１％。在低温（２２ ℃）培养表达时，ＣＨ８２大部分为可溶性产物，经ＤＥＡＥ－５２层析及Ｈｅｐａｒｉｎ－ａｇａｒｏｓｅ亲和层析可得到纯品；在高温（３７ ℃）培养表达时，ＣＨ８２主要以包涵体形式出现，经尿素变性与复性处理后，可通过Ｈｅｐａｒｉｎ－ａｇａｒｏｓｅ亲和层析得到纯品。所得纯品均具有结合肝素和结合细胞的功能，且结合细胞的能力比双结构域ＦＮ更强，; 李明才冯作化李东张桂梅; 关键词：纤连蛋白蛋白纯化肿瘤转移

纤维连接蛋白双结构域重组多肽对B16黑色素瘤生长的抑制作用被引量：4: 1999年; 目的　研究纤维连接蛋白双结构域重组多肽(CH50) 抑制体内肿瘤细胞形成转移灶的作用。方法　采用皮下和腹腔接种黑色素瘤B16/F1 细胞,在治疗后测定肿瘤大小及转移灶数量。结果　对于皮下接种肿瘤,局部注射较远距离注射更为有效,对肿瘤生长抑制可达50 % ;对腹腔内形成的微小肿瘤转移灶的抑制达80 % ;对> 1 mm 的转移结节的抑制率也可达到50 % 以上;与化疗药物羟基喜树碱合用则具有更强的疗效。结论　CH50 对微小肿瘤灶的形成具有很强的抑制作用,同时也可以有效抑制较大肿瘤结节的增长,有望成为肿瘤综合治疗中的一种重要成分。; 张慧冯作化张桂梅李东; 关键词：纤维连接蛋白黑色素瘤

反复肺炎支原体肺部感染大鼠肺组织中碱性成纤维细胞生长因子mRNA的表达被引量：23: 1999年; 目的探讨反复肺炎支原体肺部感染大鼠肺组织中碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ表达的变化。方法将８只大鼠于２４周内反复９次经超声雾化吸入肺炎支原体以复制其慢性肺部感染模型，另以４只为对照，随后用ｂＦＧＦｃＤＮＡ核酸探针行核酸分子原位杂交及定量图像分析，观察肺组织ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达的变化。结果（１）感染组动物（４只）支气管肺泡灌洗液肺炎支原体聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测均为阳性，而对照组（４只）和感染加红霉素治疗组动物（４只）均为阴性（Ｐ＜０．０５）；三组动物的支气管和肺组织常规细菌培养结果均为阴性；感染组动物透射电镜检查见肺泡间隔增宽，其中有较多胶原纤维堆积，其余两组则未见明显异常。（２）感染组动物肺泡壁见明显的ｂＦＧＦｍＲＮＡ阳性表达颗粒，对照组基本未见ｂＦＧＦｍＲＮＡ阳性表达，感染加红霉素治疗组仅见散在分布的少许ｂＦＧＦｍＲＮＡ阳性表达；定量分析结果表明，感染组ｂＦＧＦｍＲＮＡ阳性表达的积分吸光度为４１３２±１０４４，与对照组（０３０±０１３）和感染加红霉素治疗组（６０３±２４１）比较，差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。结论反复肺炎支原体肺部感染可使肺组织ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达上调。提示ｂ?; 刘建彭东信朱朝霞车东媛杨木兰杨木兰; 关键词：肺间质纤维化 BFGF 肺部感染

大肠杆菌JM1O3温度敏感突变型的分离及其对质粒拷贝数的影响: 1994年; 通过紫外线诱变，得到32个在42℃不能生长的E.coliJM103温度敏感突变子。用PDTAIL-2△质粒转化16个突变菌株，分别得到16个不同的转化株。当从30℃转到42℃时，突变子和转化子均停止生长，而野生型则能继续生长。比较不同转化子在30℃和42℃培养条件下所携带质粒的拷贝数表明：16株中有6株质粒拷贝数提高5倍以上。本结果在DNA重组中有一定的应用价值。; 李萍冯博李东王光惠皇甫永穆; 关键词：大肠杆菌诱变性试验质粒

纤维结合素分子中Asp1961～Glu1978序列对三结构域多肽在大肠杆菌中表达的影响: 1998年; 构建了人纤维结合素（ＦＮ）的三功能结构域重组多肽的两个表达质粒，分别编码两个重组多肽：ＣＨ６２（ＦＮ的Ｐｒｏ１２３９～Ｓｅｒ１５１５经Ｍｅｔ和Ａｌａ１６９０～Ｖａ１２０４９相连）和ＣＨ６３（从ＣＨ６２中删除了Ｉｌｅ１８５０～Ｇｌｕ１９７８）．ＣＨ６２在大肠杆菌中的表达效率很低，而ＣＨ６３的表达效率则很高，结果提示ＦＮ分子中的Ａｓｐ１９６１～Ｇｌｕ１９７８序列是影响三结构域多肽在大肠杆菌中表达的关键结构．ＣＨ６３经过溶解和复性后，可通过肝素－琼脂糖亲和层析得到纯品，所得纯品具有结合肝素和结合细胞的功能，且结合细胞的能力比双结构域ＦＮ多肽更强，表明两个结合细胞的功能结构域均有活性．ＣＨ６３的制备为进一步研究具有更强的抑制肿瘤转移作用的基因工程制品奠定了基础．; 冯作化李东张桂梅张慧范曲; 关键词：纤维结合素多肽大肠杆菌

地高辛与光敏生物素标记探针在肝细胞癌原位杂交中应用的比较观察被引量：3: 1995年; 地高辛与光敏生物素标记探针在肝细胞癌原位杂交中应用的比较观察同济医科大学实验医学研究中心，武汉４３００３０杨木兰，郑杰，杨渝珍，李东关键词地高辛；光敏生物素；肿瘤中图法分类号Ｒ９７２＋１，Ｒ７３５．７原位分子杂交技术最早（１９６９）用于细胞内核蛋白体...; 杨木兰郑杰杨渝珍李东; 关键词：肝细胞癌地高辛光敏生物素探针

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