杨海泉
- 作品数：32 被引量：95H指数：4
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学农业科学更多>>
- 黑曲霉β-葡聚糖酶基因eglA6在乳酸克鲁维酵母中的表达及重组酶性质被引量：2
- 2021年
- 以黑曲霉(Aspergillus niger)高耐热葡聚糖酶编码基因eglA6在乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)中的表达及重组酶性质为研究目的。利用乳酸克鲁维酵母表达系统,构建表达eglA6基因的重组菌K.Lactis GG799/pKLAC1-eglA6 SL105,重组菌摇瓶发酵酶活达到23.0 U/mL。重组酶AnEglA6K表观相对分子质量为5.6×10^(4),明显高于同一基因在巴斯德毕赤酵母中的表达产物。重组酶最适pH为5.0,最适温度为75℃,在80℃时酶活半衰期为65.0 min。以微晶纤维素为底物时重组酶比酶活约为0.5 U/mg。基因eglA6在乳酸克鲁维酵母中的表达产物与其在巴斯德毕赤酵母中的表达产物有明显差异,前者相对分子质量明显高于后者,热稳定性和结晶纤维素降解活性也高于后者。以乳酸克鲁维酵母为宿主表达eglA6基因获得的重组葡聚糖酶具有很高的耐热性,适合在饲料工业中应用。
- 王施岚徐楚涵姚雁杨梦莲德青美朵沈微杨海泉杨海泉陈献忠
- 关键词：黑曲霉乳酸克鲁维酵母糖基化
- 枯草芽孢杆菌普鲁兰酶基因的分泌表达及其在粉丝制作中的应用被引量：1
- 2022年
- 作者旨在研究枯草芽孢杆菌普鲁兰酶的分泌表达及表达产物的应用性能。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168菌株的普鲁兰酶编码基因BsP分别在大肠杆菌(Escherichia coli)和枯草芽孢杆菌中进行表达,重组酶在两种宿主中均能利用自身结构分泌到细胞外。重组酶分泌到枯草芽孢杆菌细胞外的产物的酶学性质与积累在大肠杆菌胞质内的产物有明显的差异,分泌到枯草芽孢杆菌细胞外的重组酶BsBsP的比酶活为153.7 U/mg,是大肠杆菌胞质内产物的5.5倍。重组酶BsBsP最适pH为6.0,最适温度为45℃。重组酶BsBsP对直链淀粉无降解作用,为I型普鲁兰酶。在以土豆淀粉为原料的粉丝制作工艺中,以重组酶BsBsP水解芡糊淀粉可以有效降低粉丝断条率。枯草芽孢杆菌普鲁兰酶可利用自身结构实现高效分泌表达,重组酶适用于以淀粉为原料的粉丝制作。
- 祝冬君张锦雯姚雁单逸蓝杨梦莲沈微杨海泉杨海泉陈磊陈献忠
- 关键词：枯草芽孢杆菌普鲁兰酶分泌表达
- Significantly improving extracellular enzymes production in Escherichia coli by overexpressing D-alanyl-D-alanine carboxypeptidase
- Escherichia coli is the most widely used species of bacteria for recombinant protein production,but most of re...
- 卢潇刘龙杨海泉许菲
- 文献传递
- 代谢工程改造热带假丝酵母生产鼠尾草酸被引量：1
- 2024年
- 鼠尾草酸(carnosic acid,CA)是一种酚类二萜化合物,广泛存在于鼠尾草等唇科类植物中。CA具有抗肿瘤等多种生理以及药理活性,在日化、食品、医疗领域应用价值巨大。热带假丝酵母具有鲁棒性强、耐高温、产油脂等特性,因而在萜类化合物高效生产方面极具潜力。该研究根据热带假丝酵母密码子偏好性对来源于鼠尾草的铁锈醇合酶基因CYP76AH24和鼠尾草酸合酶基因CYP76AK6、来源于拟南芥的细胞色素还原酶基因ATR1进行全序列密码子优化以及基因合成。以生产鼠尾草酸前体次丹参酮二烯热带假丝酵母1C2PM04作为出发菌株,将上述基因整合到其基因组中成功合成鼠尾草酸。利用模块化工程与酵母不同亚细胞区室的空间组合,将上述3条基因以模块化的方式导入胞质和过氧化物酶体中进行表达,鼠尾草酸产量分别为10.25 mg/L和4.64 mg/L。通过下调角鲨烯合酶基因ERG9,降低法尼基焦磷酸池的消耗进而改变代谢通量进一步提高鼠尾草酸产量,效价达到26.3 mg/L。将细胞色素P450酶和细胞色素还原酶进行融合表达,测试以刚性linker(E3AK,E3AK×2,E3AK×3)和柔性linker(G4S,G4S×2,G4S×3)为连接肽,融合表达CYP76AH24和ATR1,鼠尾草酸产量提高1.54倍。该文通过增加CPR拷贝数,增加电子供体,进一步提高鼠尾草酸表达水平,产量达到78.24 mg/L。
- 霍达陈献忠杨海泉曹钰
- 关键词：热带假丝酵母细胞色素P450融合蛋白代谢工程
- 白酒酒糟资源化利用研究进展被引量：43
- 2016年
- 白酒酒糟是酒醅发酵完后再经蒸馏出酒后残留的混合固形物,是白酒行业最大的副产物。目前我国白酒酒糟年产量已超过1亿t,酒糟后加工对实现白酒行业资源最大化利用和产业升级具有重大意义。综述了近年来我国白酒酒糟资源化利用的主要进展,包括生产饲料、培养食用菌、提取高附加值产物、酿醋、生产能源和有机酸等,讨论了酒糟资源化过程中存在的问题并展望了后期发展的方向。
- 左上春杨海泉邹伟
- 关键词：白酒酒糟蛋白饲料食用菌有机酸
- 代谢工程改造酿酒酵母合成柠檬烯及其衍生物被引量：1
- 2023年
- 柠檬烯及其衍生物紫苏酸作为重要的生物活性天然产物,广泛应用于食品、化妆品、保健品和医药等行业。然而,低效率的植物提取与高能耗的化工合成限制了柠檬烯和紫苏酸的工业合成。本研究在酿酒酵母中通过过氧化物酶体区室化表达绿薄荷来源的柠檬烯合酶,构建获得重组菌株,柠檬烯产量为0.038 mg/L。采用模块化工程分步表达参与柠檬烯合成的基因ERG10、ERG13、tHMGR、ERG12、ERG8、IDI1、MVD1、ERG20ww以及tLS,以研究其对柠檬烯产量的影响。通过增加前体模块,柠檬烯产量增加至1.14 mg/L。采用高拷贝数的质粒表达上述关键基因,柠檬烯的产量显著提高,达到86.74 mg/L,提高至初始菌株产量的4337倍。以构建的柠檬烯生产菌株为出发菌株,通过表达丹参来源的细胞色素P450酶基因,实现了紫苏酸的生成,其产量达4.42 mg/L,为利用酿酒酵母构建高产单萜类天然产物的细胞工厂奠定了基础。
- 黄瑶杨海泉沈微夏媛媛曹钰陈献忠
- 关键词：合成生物学酿酒酵母柠檬烯
- 代谢工程改造热带假丝酵母高效合成中链ω-羟基脂肪酸被引量：2
- 2022年
- 【目的】ω-羟基脂肪酸(ω-hydroxyfatty acid,ω-HFAs)是一种绿色安全无毒,具有良好生物相容性的理想生物降解材料,广泛应用于化工、食品、药学等方面,微生物发酵法生产ω-羟基脂肪酸具有重要的研究意义和应用前景。【方法】为了得到高产ω-羟基脂肪酸的代谢工程菌株,通过同源重组技术,连续敲除二倍体热带假丝酵母β-氧化途径中酰基辅酶A氧化酶基因(ACO)的同工酶POX基因,考察基因缺失对细胞生长以及合成ω-羟基脂肪酸能力的影响。【结果】基于脂肪醇氧化酶(FAO)基因缺陷菌株,成功构建了重组菌株F4PT(ΔPOX4,ΔPOX5),在碳源为葡萄糖的培养基中,重组菌株出现生长减缓,但在碳源为脂肪酸甲酯(C12–C14)的培养基中生长明显减缓,说明删除POX4、POX5基因使脂肪酸甲酯的代谢能力降低,其次通过摇瓶发酵实验,12-羟基十二酸和14-羟基十四酸的产量分别为3.01 g/L和8.69 g/L,转化率分别为11.44%和33.14%,达到积累ω-羟基脂肪酸的目的,并且代谢十四酸甲酯的能力是明显强于代谢十二酸甲酯。【结论】FAO、POX基因双缺失的热带假丝酵母可以明显积累ω-羟基脂肪酸,不同碳链的积累效率有差异,其中14-羟基十四酸的产量及转化率更高,重组菌株有定向转化十四酸甲酯为14-羟基十四酸的潜能。
- 王世杰张海冰沈微杨海泉夏媛媛曹钰陈献忠
- 关键词：热带假丝酵母精细化工品
- 分阶段调控关键因素提高白僵菌固态发酵产孢量被引量：3
- 2013年
- 采用分阶段调控关键因素策略,对白僵菌固态发酵过程进行优化。优化后最佳发酵模式为:初始含水量为65%,发酵至48 h将含水量调为68%;发酵至20 h和40 h分别适当翻料;0～48h(适应期)发酵温度为25℃,48～108 h(快速生长期)发酵温度为24℃,108～168 h(稳定期)发酵温度为28℃;同时,48～108 h按通气比1:2通气,0～48 h和108～168 h不通气。采用上述关键因素调控策略后,白僵菌固态发酵产孢量达18亿孢子/g(干培养基),与优化前相比产孢量提高约360%,效果显著。
- 李华祥杨海泉李江华刘龙华兆哲堵国成陈坚
- 关键词：白僵菌固态发酵产孢量
- 热带假丝酵母β-紫罗兰酮工程菌的构建及其发酵优化
- 2024年
- β-紫罗兰酮是一种来源于植物的不规则单萜化合物,具有良好的驱虫、抗菌、抗癌和抗氧化等生物活性,广泛应用于农业、食品、医药和香精香料等行业。热带假丝酵母是潜在的萜类高效合成底盘细胞。为了提高β-紫罗兰酮产量,该研究在课题组前期构建的β-紫罗兰酮工程菌的基础上,通过酶的亚细胞区室组合,构建了一株β-紫罗兰酮合成关键基因PhCCD1,同时在其胞质、过氧化物酶体和脂滴表达的β-紫罗兰酮工程菌PCL-01;然后,对其摇瓶发酵培养基装液量、培养基碳氮比、发酵温度和辅因子Fe^(2+)浓度等条件进行优化;最后进行5 L发酵罐小试。工程菌PCL-01的β-紫罗兰酮摇瓶产量为152.4 mg/L,较出发菌株增加50%;经过摇瓶发酵优化,β-紫罗兰酮产量为185.8 mg/L,提升22%;最后,在5 L发酵罐上可达403.9 mg/L。该研究对于其他萜类物质合成的菌株代谢改造具有借鉴意义,亦可为其他菌种发酵性能的研究提供参考价值。
- 徐洁夏媛媛沈微杨海泉陈献忠
- 关键词：热带假丝酵母Β-紫罗兰酮过氧化物酶体发酵优化补料分批发酵
- 微生物酶高效异源表达策略的最新研究进展被引量：3
- 2013年
- 酶是一种高专一性的生物催化剂,在化工、农业、医药、食品、纺织、饲料等领域具有广泛应用。常见的酶表达宿主包括大肠杆菌、芽孢杆菌、丝状真菌、酵母、乳酸菌等。不同类型的表达宿主具有不同的特点,如细菌宿主可用来快速地过量表达原核来源的酶,但真核来源的大分子蛋白由于翻译后修饰的原因往往不能在细菌表达系统中正确表达,仅可以在真核表达宿主中正确表达。近年来利用不同表达宿主实现工业酶的高效异源表达取得了很大进展。本文系统总结了在不同表达宿主中实现工业酶高效异源表达策略的最新研究进展,并对工业酶高效异源表达技术的发展趋势进行了展望。
- 杨海泉刘龙李江华堵国成陈坚
- 关键词：异源表达芽孢杆菌丝状真菌乳酸菌
