林殿海
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：浙江大学药学院更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 产L-异亮氨酸新菌株选育及其发酵产物提纯和鉴定被引量：5
- 1990年
- 以谷氨酸产生菌Corynebactelium SP·Hu7251为出发菌株,经NTG多次诱变,获得一株多标记突变株Am142—302(AHV^r,AHC^r、2-TA^r、Mef^-),可产9.6mg/mlL异亮氨酸。复将Am142-302经紫外线诱变和单菌落分离筛选,选得突变株Am1423—56。该菌在比较合适的摇瓶发酵条件下,可积累L-异亮氨酸达15.1mg/ml。发酵产物经提纯鉴定,确证是L-异亮氨酸。
- 林殿海黄和蓉
- 关键词：产生菌异亮氨酸选育
- 分泌型重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的纯化被引量：1
- 1997年
- GM－CSF工程菌W3100经发酵培养后，将菌体低渗裂解，经流水柱─分子筛─阴离子交换树脂的一系列层析，最后得到纯化的GM－CSF，其纯度为98％以上，比活性大于20×107。
- 林殿海杨桂云赵立欣刘淑玲迟春萍刘东梅李建平张秀霞金铎张春力
- 关键词：GM-CSF纯化粒细胞巨噬细胞集落刺激因子
- 人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-免疫球蛋白G1 Fc融合蛋白在糖基工程化毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2012年
- 目的在糖基工程化毕赤酵母中表达人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-免疫球蛋白G1 Fc融合蛋白(tumor necrosis factor receptor-immunoglobulin G1 Fc fusion,TNFR-Fc),考察糖基工程化过程对其活性的影响。方法将编码TNFR-Fc的cDNA序列插入毕赤酵母表达载体pPIC6αA中,构建重组表达质粒pPIC6-TF。用表达质粒转染N-糖基化工程改造的毕赤酵母菌株GSB,在含有杀稻瘟菌素的YPD平板上进行筛选。然后再使用HRP标记的羊抗人IgG在醋酸-硝酸纤维素双层膜上进行斑点印迹(dot-blot)筛选。选择表达量较高的工程菌株TNFR-Fc/GSB57进行高密度培养,通过Protein A亲和层析从发酵上清中纯化融合蛋白,利用鼠L929细胞对融合蛋白的抗TNFα活性进行分析。结果通过筛选获得了表达人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的表达菌株,纯化后的TNFR-Fc融合蛋白拮抗TNFα的EC50高于野生型毕赤酵母表达产物,而低于哺乳动物细胞的表达产物。结论糖基化改造改善了人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的抗TNFα活性,但必须进行进一步的改造才可能获得与哺乳动物细胞表达产物相似的活性。
- 高新宋海峰林殿海杨小盼万德友陈枢青
- 关键词：肿瘤坏死因子受体毕赤酵母纯化生物活性
- 分泌性重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子药效研究
- 1997年
- 应用本所研制的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM—CSF），按0．012和0．024mg／kg剂量静脉注射家犬可明显抗由环磷酰桉所致的白细胞减少和血小板减少；按0．075、0．15和0．3mg／kg剂量皮下注射经60Co照射致白细胞减少症的小且有明显恢复作用：增加脾细胞集落、外周血白细胞、骨髓有核细胞及巨噬细胞数。其药效强度与进口升白能近似。
- 杨桂云林殿海刘淑玲迟春萍李建平刘冬梅李龙云田建明
- 关键词：GM-CSF粒细胞巨噬细胞集落刺激因子
- 分泌型重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子中试发酵工艺的研究被引量：3
- 1997年
- 通过对GM－CSF工程菌W3100发酵条件的研究，优化了培养及表达条件，使工程菌W3100在30L发酵罐可表达分泌型GM－CSF1.5g／L左右，占菌体总蛋白的25％以上，纯化后的比活大于2．0×107。
- 林殿海杨桂云迟春萍李健平赵丽欣张秀霞
- 关键词：GM-CSF粒细胞巨噬细胞集落刺激因子
