毛丽红
- 作品数：7 被引量：5H指数：2
- 供职机构：郑州大学生命科学学院更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 杜氏盐藻S腺苷高半胱氨酸水解酶酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活和毒性检测被引量：2
- 2012年
- 目的:构建杜氏盐藻S腺苷高半胱氨酸水解酶(SAHH)的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-SAHH,并检测其对酵母细胞的毒性和自激活作用。方法:应用RT-PCR扩增杜氏盐藻的SAHHcDNA,测序分析后与酵母双杂交诱饵载体pGBKT7连接,构建诱饵载体pGBKT7-SAHH。用PEG/LiAc法将诱饵载体转入AH109和Y187酵母中,通过表型筛选检测诱饵蛋白对酵母有无毒性和自激活作用。结果:成功构建了诱饵载体pGBKT7-SAHH并成功转化到酵母细胞AH109和Y187中,表达的融合蛋白对宿主酵母细胞无毒性。在AH109和Y187酵母细胞中诱饵载体均未激活报告基因HIS3和ADE2,但是激活了报告基因MEL1。结论:诱饵载体pGBKT7-SAHH可用酵母双杂交方法筛选与SAHH相互作用的蛋白。
- 柴丹丹李庆华阎赟梦毛丽红李靓朱立强薛乐勋
- 关键词：酵母双杂交诱饵载体自激活杜氏盐藻
- 杜氏盐藻FLA8基因全长的克隆及鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:获得FLA8基因cDNA序列。方法:根据衣藻、小球藻等驱动蛋白-2亚基的氨基酸高度保守序列GYNGTIF、NEDPKDA设计一对简并引物,采用RT-PCR及3’RACE和5’RACE的方法扩增杜氏盐藻FLA8基因的全长。结果:克隆得到的杜氏盐藻FLA8基因cDNA全长序列为2612bp,序列分析显示其包括90bp的5’UTR、167bp的3’UTR以及2355bp的开放阅读框,其编码784个氨基酸残基,蛋白质的理论等电点为6.65,相对分子质量为85097。氨基酸序列同源性分析显示其与其他物种有较高的同源性:团藻(98%)、衣藻(99%)、小球藻(92%)。结论:得到杜氏盐藻驱动蛋白-2亚基FLA8的基因全长。
- 李俊平刘岷毛丽红石科李靓许尧薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻
- 杜氏盐藻糖原合成酶激酶3cDNA片段的克隆及其在鞭毛再生中的功能
- 2013年
- 目的:克隆杜氏盐藻糖原合成酶激酶3(GSK3)基因序列并探讨它在鞭毛再生中的作用。方法:根据杜氏盐藻转录组测序得到的GSK3的2个片段设计上下游引物,提取盐藻总RNA进行RT-PCR,以此为模板扩增2个片段之间的序列。采用3'RACE方法扩增杜氏盐藻GSK3基因3'端序列,通过杜氏盐藻消减杂交模板扩增得到5'端序列。采用pH休克法去除杜氏盐藻鞭毛,通过实时荧光定量PCR观察鞭毛再生过程中GSK3基因在转录水平上的变化。结果:获得一段长为2116bp的GSK3 cDNA片段,其中包含737bp的3'UTR和1158bp的开放阅读框。实时荧光定量PCR结果表明,GSK3的mRNA转录水平在鞭毛再生过程中明显升高。结论:杜氏盐藻GSK3基因与鞭毛再生密切相关。
- 毛丽红李庆华韩康王瑞莉龚方华薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻糖原合成酶激酶3
- 杜氏盐藻鞭毛内运输蛋白88在鞭毛组装过程中的功能分析及其原核表达
- 2013年
- 目的:克隆杜氏盐藻鞭毛内运输蛋白(IFT)88的cDNA全长并分析其部分功能。方法:根据盐藻转录组测序片段,分别设计其3'端内、外侧引物及5'端内、外侧引物,PCR扩增其全长。提取盐藻再生过程中不同时间段的总RNA,逆转录后进行实时荧光定量PCR,检测IFT88 mRNA的表达情况。随后利用ORF finder预测并扩增其开放阅读框,连接到pET28a载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),并在1mmol/LIPTG、37℃的条件下诱导4h,提取总蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测IFT88蛋白表达情况。结果:克隆拼接后共得到开放阅读框2400bp,编码799个氨基酸。BLAST显示该氨基酸序列与多个物种的IFT88有较高同源性。SDS-PAGE结果显示,与未诱导组相比,诱导组在90000左右有一条明显的条带。在鞭毛再生过程中,杜氏盐藻IFT88 mRNA的表达量在去鞭毛后30min左右时最高,随后快速下降。结论:扩增得到杜氏盐藻IFT88 cDNA序列且IFT88可能参与盐藻鞭毛组装。
- 韩康石科毛丽红李庆华龚方华蒋海丽薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻
- DZNep对Eca109细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨DZNep处理食管鳞状细胞癌Eca109细胞后对其增殖、凋亡及迁移能力的影响。方法:DZNep处理Eca109细胞48 h,以DMSO处理48 h的Eca109细胞作为对照。采用EdU荧光显微镜法检测细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell小室检测细胞迁移数。结果:DZNep处理后的Eca109细胞增殖率为(34.60±4.45)%,低于对照组的(42.37±4.64)%(t=3.625,P=0.002);其细胞凋亡率为(16.27±3.70)%,高于对照组的(7.38±0.77)%(t=7.061,P<0.001);迁移到下室的细胞数为(179±38)个,较对照组的(494±99)个少(t=8.912,P<0.001)。结论:DZNep能够抑制Eca109细胞的增殖和迁移,促进其凋亡。
- 王瑞莉李庆华张彦婷毛丽红蒋海丽龚方华王静薛乐勋关方霞
- 关键词：ECA109细胞增殖凋亡迁移
- 与杜氏盐藻驱动蛋白Ⅱ动力亚基C端相互作用的新蛋白的酵母双杂交筛选
- 2013年
- 目的:用酵母双杂交的方法筛选与杜氏盐藻驱动蛋白Ⅱ动力亚基(FLA8)C端相互作用的蛋白。方法:设计特异性引物(上下游分别引入EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点),扩增FLA8C端(433个氨基酸)cDNA,与穿梭载体pGBKT7连接以构建诱饵表达载体,然后转化酵母菌株Y187和AH109,Westernblot法检测诱饵蛋白在转化酵母菌株内的表达。通过自激活实验和毒性实验检测诱饵表达载体是否适合利用酵母双杂交的方法筛选相互作用蛋白。转化诱饵质粒的酵母菌株Y187与AH109(文库菌)杂交,待三叶形合子形成后用营养缺陷型培养基和α-半乳糖苷酶活性实验筛选阳性克隆,并对阳性克隆进行测序。结果:成功构建了pGBKT7-FLA8-C双杂交诱饵载体;经检测该载体的表达产物对Y187和AH109均无自激活和毒性作用,可用于酵母双杂交实验;杂交后筛选得到2个阳性克隆,测序结果显示为鞭毛结合蛋白107(FAP107)和含蛋白结合结构域的预测蛋白。结论:成功筛选得到了与杜氏盐藻驱动蛋白Ⅱ动力亚基C端相互作用的蛋白,分别为FAP107和预测蛋白。
- 李靓崔柳青王瑞莉毛丽红韩康柴丹丹薛乐勋
- 关键词：酵母双杂交杜氏盐藻
- 杜氏盐藻FLA8在鞭毛中的定位及其对食管鳞癌细胞的作用
- 鞭毛/纤毛是细胞表面突起的亚细胞结构，主要由微管组成，它们在物种的进化过程中非常保守，从原生生物到脊椎动物细胞几乎都存在。由于纤毛与鞭毛在结构和组装机制上基本一致，所以认为它们是存在于不同类型细胞中的同一种细胞器。鞭毛/...
- 毛丽红
- 关键词：杜氏盐藻食管鳞癌细胞蛋白表达分子机制
- 文献传递
