潘秀珍
- 作品数：188 被引量：477H指数：12
- 供职机构：南京师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金南京军区医学科技创新课题更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学理学更多>>
- 应用NPCR发现我国Kawasaki型恙虫病立克次体被引量：40
- 1995年
- 本文报告用恙虫病立克次体表面蛋白５６ＫＤａ型特异抗原（ｔｓａ５６ＫＤａ）基因编码区的引物，采用嵌合式聚合酶链反应（ＮＰＣＲ）鉴定江苏地区的２株恙虫病立克次体。结果该２株恙虫病立克次体与Ｇｉｌｌｉａｍ，Ｋａｒｐ，Ｋａｔｏ和Ｋｕｒｏｋｉ型特异引物无任何ＤＮＡ扩增带，而与日本ｋａｗａｓａｋｉ株型特异引物扩增后有５２３ｂｐ的ＤＮＡ扩增带，表明我国存在Ｋａｗａｓａｋｉ型恙虫病立克次体。
- 郭恒彬吴光华唐家琪李先富于明明张云潘秀珍李越希
- 关键词：恙虫病立克次体特异抗原聚合酶链反应
- 2型猪链球菌MocR家族转录调控因子SSU0562基因敲除突变体的构建及毒力分析被引量：2
- 2015年
- 目的:构建2型猪链球菌强毒株05ZYH33中MocR家族转录调控因子SSU0562基因敲除的突变株,探索SSU0562基因缺失对细菌基本生物学特性和毒力的影响。方法:构建左右两侧为SSU0562基因上下游的同源序列,中间部分为壮观霉素抗性基因(Spcr)的基因敲除质粒,通过同源重组的方法筛选SSU0562基因敲除突变株Δ0562。对突变株与野生株的基本生物学特性进行系统的比较分析,并且将小鼠作为动物感染的模型来研究突变株的毒力。结果:组合PCR的分析及基因测序结果均表明Spcr完全取代了S.suis2中SSU0562基因位点,表明基因敲除突变体Δ0562构建成功,反转录PCR(RT-PCR)证实了突变株Δ0562中SSU0562基因在转录水平的缺失;在溶血活性、生长速率及对小鼠的致病力方面,突变株Δ0562与野生株05ZYH33相比均无显著差别,然而革兰染色实验显示突变株Δ0562的成链能力明显减弱。结论:猪链球菌强毒株05ZYH33的毒力并未因SSU0562基因的缺失而发生显著性改变,表明SSU0562基因并非猪链球菌的毒力决定因子,但很有可能参与猪链球菌成链能力的调控。
- 李娟刘丽娜胡丹朱旭辉龚秀芳赵琳钟璟皓潘秀珍王长军
- 关键词：2型猪链球菌
- 猪链球菌2型荚膜唾液酸对细菌毒力和宿主炎症反应的影响被引量：4
- 2012年
- 【目的】阐明猪链球菌2型荚膜唾液酸是否影响细菌毒力以及宿主对其炎症反应应答,为研究猪链球菌2型的致病机制奠定基础。【方法】比较实验菌株对BLAB/c小鼠模型的致病性;通过涂板计数的方法检测实验菌株在小鼠体内的分布;观察小鼠脑组织病理改变,分析实验菌株感染小鼠后中枢神经系统的病变差异;从小鼠体外全血细胞水平,运用ELISA法检测实验菌株感染后细胞炎性因子的分泌水平。【结果】荚膜唾液酸合成基因neuB缺失突变株ΔneuB相比野生株05ZYH33株,对小鼠毒力显著降低,回复突变株cΔneuB毒力回复至野生株水平;野生株和突变株在血液及脑组织中分布具有显著差异,均可致BLAB/c小鼠脑组织不同程度的损伤;与野生株组相比较,细菌/细胞相互作用不同时间点后,突变株组体外刺激小鼠全血细胞分泌MCP-1、IL-6的水平显著提高;【结论】荚膜唾液酸影响细菌的毒力及宿主细胞对其的炎症反应应答,它是猪链球菌2型穿透血脑屏障导致脑膜炎的重要毒力因子。
- 石洁胡丹朱静张先云侯田青郭静静潘秀珍李先富王长军
- 关键词：猪链球菌2型荚膜唾液酸毒力
- 信号肽与猪链球菌GDH融合的DNA疫苗构建及体液免疫研究被引量：4
- 2008年
- 目的设计、构建猪链球菌GDH真核表达载体并研究DNA疫苗免疫小鼠的体液免疫。方法在猪链球菌保护性抗原GDH基因5′末端引入人IL-2信号肽序列,通过PCR进行拼接,得到的融合DNA片段经过酶切克隆入质粒pcDNA3.0,构建核酸疫苗重组质粒pcDNA3.0-gdh。通过肌肉注射途径将重组质粒pcDNA3.0-gdh免疫小鼠,经ELASA实验和Western blot进行检验。结果构建的表达载体在小鼠体内表达出正确的目的蛋白,能诱导体液免疫。结论构建的DNA疫苗能够引起体液免疫,为研究猪链球菌核酸疫苗提供分子工具。
- 潘秀珍赵华梅葛俊超王长军郑峰李先富唐家琪
- 关键词：猪链球菌DNA疫苗信号肽
- 猪链球菌2型组氨酸三聚体蛋白原核表达被引量：4
- 2009年
- 目的鉴定猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype2,S.suis2)组氨酸三聚体蛋白(Histidine Triad Pro-tein,HTP),并研究该蛋白的免疫原性,为研究S.suis2保护性疫苗奠定实验基础。方法通过与相关家族蛋白进行同源性比较,在猪链球菌Z型05ZYH33全基因组序列中发现了编码HTP的基因。设计合成引物,进行PCR扩增,并将目的片段克隆到表达载体pET28a,表达并纯化出目的蛋白,通过蛋白印迹(Western blot)检测其免疫原性。结果PCR扩增出约2.7kb的片段,并成功表达分子量在110KD左右的目的蛋白。通过His-Tag亲和层析,获得纯度较高的融合蛋白。Western blot检测结果表明,该表达产物具有免疫原性。结论S.suis2中国强毒株中存在HTP,并具有良好免疫原性,可作为S.suis2免疫保护性疫苗候选分子。
- 邵珠卿韩明月葛俊超王长军潘秀珍唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型克隆
- S.suis 2溶血素SLY的分子克隆及溶血活性和免疫学特性研究被引量：1
- 2014年
- 目的克隆并表达猪链球菌2型(S.suis 2)溶血素重组蛋白SLY,对其溶血活性及免疫学特性进行研究,为探讨SLY在S.suis 2感染中的致病机理及筛选有效的疫苗预防和控制猪链球菌病奠定基础。方法对S.suis2 05ZYH33全基因序列进行生物信息学分析,构建pET32a-sly原核表达质粒并诱导表达出S.suis 2重组溶血素SLY蛋白;采用高浓度尿素裂解包涵体和His-Tag亲和层析对重组SLY蛋白进行纯化并复性;免疫保护实验检验SLY的免疫保护作用。结果 SDS-PAGE显示70kD的SLY蛋白条带;重组SLY蛋白具有溶血活性并受多种因素的影响;SLY对感染S.suis 2的Balb/c小鼠有一定的免疫保护作用。结论优化原核表达体系可以有效提高SLY蛋白的表达量,经提纯并复性的重组SLY具有较高的溶血价,为进一步纯化及分析SLY蛋白的特性提供了必要的前提。
- 孙雯潘秀珍
- 关键词：包涵体溶血活性
- 血清HBcAg不同检测方法的比较
- 1993年
- 先后建立了检测血清HBcAg的简易法、BA-ELISA和ABC-ELISA三种方法。三法均具有良好的特异性和重复性。敏感性测定表明,三法分别可检出约4ng/ml、4ng/m1和2ng/ml的纯化HBcAg。选用3mol/L KSCN作裂解剂不仅省去多次离心洗涤等繁琐操作,而且检出阳性率分别提高121.1％、121.1％和140.8％。
- 吴鸿银潘秀珍乔仁良
- 关键词：血清乙型肝炎表面抗原ELISA
- 用PCR检测现场单个小盾纤恙螨体内恙虫病立克次体的研究被引量：16
- 1996年
- 恙虫病立克次体（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｔｓｕｔｓｕｇａｍｕｓｈｉ，Ｒ．ｔ）表面蛋白５６ＫＤａ（ｔｓａ５６ＫＤａ）基因编码区构建的群特异引物，采用嵌合式聚合酶链反应（ＮｅｓｔｅｄＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＮＰＣＲ）检测现场捕获的单个小盾纤恙螨幼虫体内Ｒ．ｔ的ＤＮＡ。共检测江苏省恙虫病疫区小盾纤恙螨幼虫６１只，结果２只幼虫提取的ＤＮＡ经扩增后见４８１～５０７ｂｐ的ＤＮＡ扩增带，表明这２只幼虫携带有Ｒ．ｔ，其该种螨Ｒ．ｔ携带率为３．２７％。证明该法可用于单个恙螨幼虫体内Ｒ．ｔ的检测，对恙虫病疫区媒介恙螨的流行病学调查具有实用价值。
- 郭恒彬吴光华潘秀珍李先富唐家琪张云李越希
- 关键词：恙虫病立克次体小盾纤恙螨聚合酶链反应
- 2型猪链球菌SSU05_0736基因敲除株的构建及其特性分析被引量：2
- 2016年
- 目的 2型猪链球菌是重要的人畜共患病病原菌,鉴定现有的和发掘新的毒力因子依然是该领域的研究热点。探讨SSU05_0736编码的c AMP受体蛋白在2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)中国强毒株05ZYH33中的作用机制,初步分析SSU05_0736基因敲除株的生物学特性,为进一步研究猪链球菌可能的毒力因子及其致病机制提供研究基础。方法利用同源重组原理构建并筛选由壮观霉素抗性基因(Spcr)替换S.suis 2中SSU05_0736的基因敲除株Δ0736,系统比较分析野毒株与敲除株的生物学特性,同时将BALB/c小鼠作为动物感染模型来探究敲除株的毒力。结果通过组合PCR、反转录PCR(RT-PCR)等方法鉴定并成功构建基因敲除株Δ0736,其在菌落形态、溶血活性及对小鼠致病力等方面与野毒株无显著差异;两者生长速率相比,敲除株的生长较野毒株迟缓但其在对数期增长速率较大。结论 SSU05_0736基因的缺失并未使猪链球菌2型强毒株05ZYH33的毒力发生显著改变,推测SSU05_0736基因并非毒力决定因子,但与野毒株相比敲除株在生长速率尤其对数期增长速率较大这一方面的改变,提示可对其代谢调控能力作进一步分析。
- 钟璟皓胡丹唐慧娴王依钱思彤龚秀芳潘秀珍王长军姚文兵
- 关键词：猪链球菌2型基因敲除突变株
- 鼠源抗HFRSV衣壳蛋白McAb F3株单链抗体基因克隆构建及表达
- 2000年
- 为了获得鼠源抗HFRSV衣壳蛋白McAbF3 株轻链和重链可变区基因 ,由连接肽体外连接获得单链抗体基因 ,在大肠杆菌中表达。从鼠源抗HFRSV衣壳蛋白McAbF3株细胞中分离总RNA ,以oligo(dT) 18为引物逆转录成cDNA ,通过PCR扩增出抗体的轻链 (VL)和重链可变区 (VH)基因 ,由连接肽体外连接获得单链抗体 (ScFv)基因。将此单链抗体 (ScFv)基因插入原核表达载体PET2 8a ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导后表达。结果构建的鼠源抗HFRSV衣壳蛋白McAbF3株单链抗体 (ScFv)基因 ,全长 741bp ,在大肠杆菌中获得了表达。结论为表达产物经SDS—PAGE及Western印迹分析 ,此单链抗体分子相对分子量为 2 9,0 0 0 ,与兔抗 鼠IgG产生特异反应。
- 李光富唐家琪操敏李先富潘秀珍
- 关键词：肾综合征出血热单链抗体
