王玉敏
- 作品数：10 被引量：15H指数：3
- 供职机构：滨州医学院口腔医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金山东省高等学校科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Smad3调控成釉细胞Amelotin启动子转录活性的研究被引量：1
- 2015年
- 目的:研究Smad3对Amelotin启动子转录活性的影响。方法:用基因克隆技术获得含有不同长度Amelotin启动子片段的荧光素酶报告基因载体,然后将其与Smad3瞬时转染小鼠成釉细胞,并用双荧光素酶报告基因检测其活性;生物学信息软件对人和小鼠的Amelotin基因启动子序列的同源性进行BLAST分析;凝胶迁移实验(EMSA)观察Smad3和Amelotin启动子特异性结合位点之间的相互作用;基因定点突变构建Smad3结合位点突变型Amelotin启动子,并用双荧光素酶报告基因检测系统分析Smad3对野生型和突变型Amelotin启动子转录活性的影响。结果:Smad3转染后,Amelotin启动子(-160^+196)转录活性明显增强(P<0.05);将人与小鼠的Amelotin启动子序列(-160^+196)进行Blast序列比对,发现两序列在(-160^-1)具有很大的同源性;EMSA结果显示,Smad3与Amelotin启动子(-160^+196)的GTCTG有相互作用;将Amelotin启动子上Smad3结合位点特征性序列"GTCTG"突变为"CCCTG"后,Smad3对突变型Amelotin基因启动子的转录活性无显著影响(P>0.05)。结论:转录因子Smad3可通过与Amelotin启动子特定序列结合而调控Amelotin的基因表达,从而在釉质发育过程中发挥重要作用。
- 许针针张莉王玉敏李东亮高艳高玉光
- 关键词：SMAD3EMSA
- 整合素β1调控成釉细胞外基质蛋白表达的研究
- 2013年
- 目的:观察整合素β1(Integrinβ1)在小鼠牙胚成釉细胞中的表达及其对成釉细胞细胞外基质蛋白——釉原蛋白(Amelogenin,AMELX)、成釉蛋白(Ameloblastin,AMBN)、釉成熟蛋白(Amelotin,AMTN)mRNA表达的影响。方法:采用免疫组化方法检测整合素β1在小鼠牙胚成釉细胞中的表达。构建真核重组表达载体pcDNA3.1/myc-hisA-Integrinβ1,并将其转染至小鼠成釉细胞,利用实时定量Real-time PCR法检测AMELX、AMBN、AMTN mRNA表达水平。结果:整合素β1在小鼠牙胚发育各期成釉细胞中均有表达。RT-PCR检测显示,与转染空白质粒的对照组相比,转染pcDNA3.1/myc-hisA-Integrinβ1的成釉细胞中AMELXmRNA的表达水平明显上调(P<0.05),但对AMBN和AMTN mRNA表达无显著促进作用(P>0.05)。结论:整合素β1在小鼠牙胚成釉细胞中表达,并促进Amelogenin在成釉细胞中的表达,提示整合素β1通过调节釉原蛋白而影响牙齿的发育和矿化。
- 张海英邵丹李伯翰韩婷婷李东亮王玉敏孙岩张娟娟高玉光
- 关键词：整合素Β1成釉细胞
- 烟台市口腔医院儿童口腔科门诊初诊治疗需求特征分析被引量：6
- 2014年
- 目前,对儿童龋病（Dental caries in children）的研究一直是口腔医学界的热点之一。我国儿童口腔科诊疗年龄为18岁以下,此时儿童正处于生长发育阶段。由于长假期间,儿童的时间宽裕,很多家长会选择在不影响儿童学习的情况下来医院就诊。此期更能集中反应儿童口腔疾病防治的情况。
- 王玉敏杜宇唐明娜
- 关键词：口腔科龋齿窝沟封闭
- Jun家族蛋白在釉质发育中的表达及对amelogenin的调控作用被引量：2
- 2015年
- 目的:探讨Jun家族蛋白Jun B、c-Jun和Jun D在小鼠釉质发育中的作用。方法:应用免疫组化染色检测Jun B、c-Jun和Jun D在不同发育阶段小鼠牙胚成釉细胞中的表达;分别以0.5μg和2.0μg的Jun B、c-Jun和Jun D转染小鼠成釉细胞后,运用RT-PCR观察其对釉原蛋白amelogenin mRNA表达的影响。结果:免疫组化染色结果显示:釉质分泌期时,Jun B在成釉细胞核中无显著表达,Jun D呈弱表达,而c-Jun表达明显;釉质转型期时,Jun B和Jun D表达增强且Jun D早于Jun B,c-Jun持续表达明显;在釉质成熟期时,Jun B、c-Jun和Jun D均显著表达。RT-PCR检测显示:高剂量Jun B可明显抑制amelogenin的表达(P<0.05);低剂量c-Jun可明显促进amelogenin的表达(P<0.05);Jun D对amelogenin的表达无显著影响。结论:在釉质发育早期,c-Jun可通过上调釉原蛋白的表达参与釉质发育。在釉质发育后期,Jun B可通过抑制釉原蛋白的分泌促进釉质的成熟。Jun D对amelogenin表达无显著影响。
- 徐畅魏亚红王玉敏张莉韩晓谦韩婷婷高玉光
- 关键词：釉原蛋白
- Foxo3a调控小鼠釉质发育过程中MMP-20基因的表达被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨转录因子Foxo3a在釉质发育过程中调控基质金属蛋白酶-20(MMP-20)基因表达的分子机制。方法:分别利用免疫组织化学技术、免疫荧光、RT-PCR法、双荧光素酶报告基因检测系统检测转录因子Foxo3a与MMP-20启动子区域的转录调控水平,分析Foxo3a调控MMP-20的转录活性的机制。结果:免疫组织化学染色发现Foxo3a在成釉细胞核中呈阳性表达,并且随着釉质的分泌表达逐渐增强,晚期变弱;RT-PCR证实Foxo3a促进MMP-20基因表达(P<0.05);双荧光素酶检测显示,Foxo3a促进MMP-20表达(P<0.05);特定序列定点突变后的Foxo3a对MMP-20基因的转录活性无显著的影响(P>0.05)。结论:转录因子Foxo3a可能通过与特定序列结合而调控MMP-20的表达,从而在釉质分泌过程中发挥重要作用。
- 王云虹慈浩粟杨勇张莉王玉敏李伯翰高玉光
- 关键词：FOXO3ART-PCR
- TGF-β1/Smad3信号通路调控小鼠成釉细胞Amelotin启动子转录活性的研究被引量：3
- 2014年
- 目的:研究TGF-β1/Smad3信号通路对调控小鼠成釉细胞Amelotin启动子转录活性的影响。方法:首先利用双荧光素酶报告基因检测系统分析TGF-β1和Smad3对小鼠Amelotin启动子转录活性的影响;然后利用染色体免疫共沉淀(ChIP)方法观察Smad3与Amelotin启动子特异性结合位点之间的相互作用;最后利用基因定点突变构建Smad3结合位点突变型Amelotin启动子,并用双荧光素酶报告基因检测系统分析TGF-β1和Smad3对野生型和突变型Amelotin启动子转录活性的影响。结果:TGF-β1和Smad3作用于成釉细胞后,Amelotin启动子转录活性明显增强(P<0.05);Smad3与Amelotin基因启动子的"AGAC"及"GTCT"序列有相互作用;将Amelotin启动子上Smad3结合位点特征性序列突变为"TGTC"和"GACA"后,TGF-β1和Smad3对突变型Amelotin基因启动子转录活性的影响较野生型明显减弱(P<0.05)。结论:TGF-β1/Smad3信号通路通过作用于Smad3结合位点调控成釉细胞Amelotin基因启动子的转录活性。
- 李盼王玉敏张莉李伯翰韩婷婷王爱芹高玉光
- 关键词：TGF-Β1SMAD3成釉细胞
- Runx2调控成釉细胞Amelotin基因表达的研究被引量：1
- 2013年
- 目的:研究Runx2与Amelotin基因表达之间的关系,并寻找Runx2在Amelotin启动子上重要的结合位点。方法:利用免疫组化方法定位Runx2与Amelotin在体内的表达;通过RNA干扰和过量表达Runx2的方法,改变Runx2在成釉细胞中的表达量;利用qRT-PCR的方法检测Runx2表达量的改变对Amelotin基因表达的影响;利用软件分析Amelotin启动子近端区域Runx2的可能结合位点后,以PCR方法获取含有该位点的Amelotin基因上游启动子片段,进一步克隆含有该位点的Amelotin启动子荧光报告载体pGL3-Amtn-1463,并对该位点进行定点突变,以此瞬时转染成釉细胞,通过检测荧光素酶活性来分析定点突变对该段启动子转录活性的影响。结果:Runx2在成釉细胞核中有表达,而Amelotin在成釉细胞分泌的牙釉基质中有表达;过量表达或降低表达Runx2时,Amelotin的表达也受到相应影响;成功克隆pGL3-Amtn-1463和pGL3-Amtn-1463-Runx2mut并瞬转染成釉细胞发现,潜在的Runx2结合位点的突变能降低Amelotin启动子的转录活性。结论:-1342/-1336区域的Runx2结合位点在Runx2调控Amelotin基因表达过程中具有重要作用。
- 刘晓影王玉敏李伯翰张娟娟孙岩孙学玲高玉光
- 关键词：RUNX2成釉细胞定点突变
- EGF/EGFR/ErbB2调控成釉细胞MMP-20基因表达的研究被引量：3
- 2013年
- 目的:研究EGF/EGFR/ErbB2信号通路对小鼠成釉细胞中基质金属蛋白酶-20(matrixmetalloproteinase-20,MMP-20)基因表达的调控作用。方法:用定时定量RT-PCR、双荧光素酶报告基因检测系统分析EGF/EGFR/ErbB2调控MMP-20基因的表达、EGF调控MMP-20启动子的主要区域、MAPK信号通路阻断剂对EGF调控MMP-20转录活性的影响、转录因子Jun家族介导EGF/ErbB2对MMP-20转录活性的调控;用基因定点突变和双荧光素酶基因检测报告系统分析EGF/ErbB2、C-Jun对MMP-20基因启动子转录活性的影响。结果:成釉细胞经20 ng/mL EGF刺激后,MMP-20的基因表达上调(P<0.05),MMP-20启动子在(-157～+23)之前的区域转录活性增强(P<0.05);EGFR、ErbB2、ERK阻断剂均能抑制EGF对MMP-20基因表达的调控(P<0.05);转录因子C-Jun介导EGFR/ErbB2上调MMP-20基因的表达(P<0.05);突变MMP-20启动子的AP1结合位点后,MMP-20基因表达的水平下降(P<0.05),同时EGF/ErbB2也失去上调MMP-20基因表达水平的作用。结论:在成釉细胞中EGF通过EGFR/ErbB2～ERK～C-Jun信号通路对MMP-20基因的表达起到调控作用。
- 曲政王玉敏李博涵许针针袁杰高玉光
- 关键词：EGFEGFRERBB2
- MEF2C调控成釉细胞MMP-20基因启动子转录活性的研究被引量：1
- 2013年
- 目的:通过研究MEF2C转录因子对小鼠成釉细胞金属基质蛋白酶-20(matrix metalloprotei-nase-20,MMP-20)基因表达的调控作用,明确MEF2C的功能,为研究MEF2C在釉质形成中的作用奠定基础。方法:用RT-PCR的方法扩增小鼠MEF2C基因,并构建真核表达载体pcDNA3.1/myc-hisA-MEF2C;对MMP-20基因启动子区域(-1197～+23)中MEF2C潜在的结合位点进行定点突变,并构建至荧光报告载体pGL3-Basic中;利用双荧光素酶基因报告系统分析MEF2C对MMP-20基因启动子转录活性的影响。结果:在成釉细胞中过量表达MEF2C能够明显提高MMP-20基因启动子的转录活性,而对定点突变后的MMP-20基因启动子转录调控作用减弱。结论:小鼠成釉细胞核中MEF2C可通过MMP-20启动子上MEF2C潜在的结合位点,上调MMP-20基因表达水平。
- 刘珩李伯翰韩婷婷李东亮王玉敏孙岩曲政高玉光
- 关键词：成釉细胞定点突变
- EGF与TGF-β1调控MMP20基因表达的研究被引量：1
- 2013年
- 目的观察表皮生长因子(EGF)与TGF-β1对小鼠成釉细胞金属基质蛋白酶-20(MMP20)基因表达的调控作用,并探讨其分子作用机制。方法利用Real time-PCR法分析EGF,TGF-β1对成釉细胞MMP20基因表达的影响;阻断MAPK通路,利用Real time-PCR法分析EGF,TGF-β1对MMP20基因表达的影响;利用双荧光素酶基因报告系统分析EGF,TGF-β1对成釉细胞MMP20基因启动子转录活性的影响。结果与对照组相比,EGF与TGF-β1均显著上调MMP20基因表达;加入MAPK抑制剂后,显著抑制了EGF与TGF-β1对MMP20基因表达的作用。双荧光素酶报告基因检测系统显示:与对照组相比,EGF与TGF-β1显著促进MMP20基因启动子的转录活性。结论 EGF通过P38通路与ERK通路上调MMP20的表达;TGF-β1通过p38通路与JNK通路上调MMP20的表达。
- 于会杰王玉敏韩婷婷李东亮李伯翰张娟娟孙岩高玉光
- 关键词：EGFTGF-Β1P38MAPK
