王虹
- 作品数：93 被引量：150H指数：5
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- comE基因缺陷影响肺炎链球菌体内诱导基因的表达
- 2010年
- 【目的】筛选受comE调控的肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)体内诱导基因。【方法】通过插入失活构建基因comE缺陷的S.pn菌株,与野生菌株分别腹腔注射BALB/c小鼠,经过体内诱导后取小鼠血,分离细菌提取RNA,用RT-PCR法检测13个体内诱导基因mRNA水平差异。【结果】将RT-PCR结果通过Quantity-one灰度分析,进行配对t检验,显示8个体内诱导基因在缺陷菌株和野生菌株中mRNA表达水平具有统计学差异(P<0.05),其中spd-0300、spd-0414、spd-0622、spd-1663、spd-1719、spd-0235、spd-0873受转化上调,spd-1672受转化下调。【结论】筛选出受转化调控的体内诱导基因spd-0300、spd-0414、spd-0622、spd-1663、spd-1719、spd-0235、spd-0873、spd-1672,它们可能参与生长调节、温度感应、糖脂代谢等环节,表明细菌转化可通过调节某些体内诱导基因的表达来增强细菌的毒力。
- 刘鑫尹楠林张雪梅杨晓亮庞丹王虹尹一兵胥文春
- 关键词：肺炎链球菌COME毒力
- 无融合标签人胱抑素C重组蛋白的制备
- 2012年
- 目的构建人胱抑素C(CysC)基因的原核表达质粒pCold TF-CysC,表达并制备去标签蛋白的CysC。方法用人CysC的全长编码基因插入原核表达载体pCold TF并测序鉴定。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导、镍柱纯化后获得带有His标签的重组蛋白TF-CysC。利用GST-HRV 3C蛋白酶去除该融合蛋白的TF标签,再经分子筛一步法同时去除TF标签、3C蛋白酶获得CysC,SDS-PAGE鉴定其纯度。用该CysC免疫新西兰大白兔,制备抗血清,并用间接ELISA及Western blot鉴定。结果测序结果与Genbank中人CysC序列一致,实现了CysC可溶性高表达。纯化的无标签CysC纯度大于95%,分子质量约为13.3 ku,与预期相符。免疫家兔后,获得的抗血清效价达到1∶4×106以上,能特异性识别市售CysC蛋白。该蛋白稳定性良好,在4℃保存一个月未见明显下降。结论成功应用原核表达系统,获得了可用作免疫诊断试剂标准品的CysC,为进一步建立CysC的免疫检测方法奠定了基础。
- 陈特刘宇思谌海兰陈曦王虹张雪梅胥文春
- 关键词：胱抑素C原核表达蛋白纯化
- 流感嗜血杆菌D蛋白黏膜免疫保护效果研究被引量：1
- 2016年
- 目的评估D蛋白(protein D,PD)黏膜免疫对流感嗜血杆菌感染的保护效果,研究其免疫应答机制,为发展新疫苗提供依据。方法运用分子克隆技术构建PD蛋白表达质粒;用含有或无霍乱毒素(cholera toxin,CT)的PD蛋白黏膜免疫C57BL/6小鼠,ELISA方法检测血清Ig G、唾液Ig A及脾细胞的细胞因子分泌水平;建立定植和致死性感染模型,观察细菌清除及小鼠生存情况;以裸鼠和μMT小鼠来研究细胞和体液免疫应答在PD免疫保护效果中的作用。结果单独PD蛋白黏膜免疫野生鼠能诱导高滴度的抗PD Ig G和s Ig A,血清中Ig G1、Ig G2a和Ig G2b亚型水平相当,脾细胞分泌IL-17A增加,小鼠鼻咽部流感嗜血杆菌清除增加,致死性感染生存率为82%;裸鼠和μMT小鼠免疫PD后对流感嗜血杆菌的清除效应和致死性感染保护作用受损,PD抗血清被动免疫μMT小鼠后其抗感染能力恢复;PD+CT组抗体滴度及脾细胞分泌IL-4和IL-17A水平均高于PD组,细菌清除效应与PD组相似,但无致死性感染保护能力。结论无佐剂PD蛋白黏膜免疫能有效诱导黏膜应答,抵抗流感嗜血杆菌的定植与致死性感染,为黏膜疫苗的发展提供了可能的选择。
- 邢燕王建敏粟玉凤王虹崔鲂张雪梅孟江萍
- 关键词：流感嗜血杆菌黏膜免疫
- 46株肺炎链球菌的血清型别和毒力因子基因的保守性分析被引量：3
- 2013年
- 目的研究临床分离的肺炎链球菌菌株的血清型和重要毒力因子碱基序列的保守情况，为临床肺炎链球菌疫苗的使用和蛋白质疫苗的研发提供参考依据。方法收集2010—2013年重庆医科大学附属儿童医院11岁以下儿童中分离的46株肺炎链球茵，用多重PCR进行血清型分型。同时PCR扩增肺炎链球菌的11个毒力基因ply、lytA、nanA,phtD、c如P、cps2A、bacterio—cin、psaA,piaA、pcsB和stkP，测序后分析碱基序列的突变情况。结果46株肺炎链球茵共检出13种血清型，其中19A（19．57％）为最常见的血清型，其次为23F和19F（各占15．22％）。临床菌株毒力基因ply、lytA、nanA、phtD、czpP、cps2A、bacteriocin,psaA,piaA、pcsB和stkP的碱基序列保守性分别为97．82％、96．31％、82．96％、87．50％、98．48％、83．68％、66．27％、99．46％、98．63％、88．72％和96．67％。结论在重庆地区儿童感染的肺炎链球菌中，血清型19A分布比例最高，本地区儿童接种肺炎链球菌疫苗时应首选含有19A血清型荚膜多糖抗原的PCVl3疫苗。毒力因子ply、stkP、piaA、lytA、cop和psaA基因在临床菌株中保守性较高，具有作为肺炎链球菌疫苗候选蛋白质的潜力。
- 刘孟涓张群王虹胥文春何於娟尹一兵张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌血清分型毒力因子
- 中外护理高等教育发展的比较研究
- 随着知识经济时代和经济全球化的到来，护理教育和护理服务的国际化趋势日趋明显，全球性的护士短缺和护士流失是各个国家正共同面对的现实问题。在临床护理、社区护理和卫生保健等领域培养出具有较高的职业素质、道德修养的护士，已成为护...
- 王虹
- 关键词：护理教育高等教育
- 文献传递
- 肺炎链球菌comX基因可影响细菌毒力基因表达被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨肺炎链球菌的转化相关基因comX与其毒力表达的关系.方法:采用插入失活的方法制备肺炎链球菌的相关基因缺陷菌株,通过小鼠毒力实验观察它们毒力的变化,并应用RT-PCR测定肺炎链球菌的主要毒力因子透明质酸酶(phd),分泌型IgA结合蛋白(sIgA),肺炎链球菌自溶酶(lytA),肺炎链球菌神经氨酸酶A(nanA)和肺炎链球菌溶血素(ply)在细菌感受态发生过程中的表达,并比较其在野生和缺陷菌株中的表达的异同.结果:野生菌株的毒力基因受感受态刺激因子(CSP)诱导表达增加;虽comX基因缺陷菌株与野生菌株感染小鼠的能力无显著差异,但其ply基因的表达与comE基因缺陷菌株一样显著低于野生菌株的表达.结论:comX可通过细菌转化的通路影响细菌毒力基因的表达.
- 张雪梅尹一兵孟江萍许颂霄王虹黄远帅
- 关键词：毒力基因
- 新型duplex scorpion探针技术在结核分枝杆菌定量PCR检测中的应用
- ＜正＞结核病仍然位于全球传染病首位,特别是随着艾滋病的传播与流行、吸毒、贫困等原因,各国发病率、死亡率都有上升趋势。我国属于全球22个结核病高负担国家之一,而且结核病人
- 王虹钟敏许颂霄尹一兵
- 关键词：结核分枝杆菌定量PCR检测细菌学检查分子生物学诊断
- 文献传递
- 核苷酸mts90及其在结核病诊断中的用途
- 本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及核苷酸mts90及其片段在结核病诊断中的用途。本发明要解决的技术问题是为人型结核分枝杆菌的鉴定和结核病的诊断提供一种新的选择。本发明的技术方案是核苷酸mts90，其序列如SEQIDN...
- 胥文春赵家宁尹一兵张雪梅何於娟王虹
- 文献传递
- 肺炎链球菌蛋白在抗肺炎链球菌感染中的应用
- 本发明提供肺炎链球菌蛋白在抗肺炎链球菌感染中的应用。本发明的肺炎链球菌肽链内切酶O(PepO)为皮下免疫佐剂，与锌金属蛋白酶B(ZmpB)第673位至第863位氨基酸肽段的混合及融合表达，制备的肺炎链球菌蛋白质疫苗对抵抗...
- 尹一兵尹一帆张雪梅胥文春王虹何於娟肖江明王婧瑶
- 文献传递
- 鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白可增强DnaJ蛋白的免疫反应被引量：2
- 2014年
- 目的:明确鞭毛蛋白的黏膜佐剂作用,并研究其与DnaJ蛋白联合免疫对肺炎链球菌感染的保护作用。方法:含有重组质粒pET-28(a)/鞭毛蛋白基因的大肠杆菌DE3经IPTG诱导后表达鞭毛蛋白,纯化后用于后期动物实验如下:将C57BL/6小鼠随机分为四组通过鼻腔分别滴入鞭毛蛋白(10μg)与DnaJ蛋白(10μg)混合剂(实验组)、DnaJ蛋白(10μg)(对照组1)、DnaJ蛋白(10μg)与GST蛋白(10μg)混合剂(对照组2),每组均30μl。通过检测抗体的效价、亚型以及细胞因子水平来评估鞭毛蛋白能否提高肺炎链球菌DnaJ蛋白诱导的免疫效应;然后用肺炎链球菌D39(5×107CFU)进行鼻腔攻毒,观察小鼠的生存率,以评估其保护效应。结果:实验组较对照组产生更高效价的血清IgG(其中主要产生IgG1)和更高水平的细胞因子IFN-γ、IL-17A和IL-4;另一方面实验组对致死性D39感染的保护率达60%,DnaJ蛋白免疫组的保护率为50%。结论:鞭毛蛋白与DnaJ蛋白联合应用可以增强宿主对DnaJ蛋白的免疫反应,并且对致死剂量的肺炎链球菌感染有保护作用,提示鞭毛蛋白可以作为肺炎链球菌DnaJ蛋白疫苗的佐剂应用。
- 严明刘宇思张帅胥文春王虹张雪梅
- 关键词：鞭毛蛋白肺炎链球菌佐剂
