田爱玲
- 作品数：7 被引量：1H指数：1
- 供职机构：山东大学齐鲁医院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学一般工业技术更多>>
- 脂肪间充质干细胞在功能化自组装纳米多肽水凝胶三维培养下旁分泌的研究被引量：1
- 2018年
- 目的探讨脂肪间充质干细胞（ADMSCs）在自组装纳米多肽水凝胶介导的三维培养条件下旁分泌促血管生成激素及其影响因素。方法分离、培养人ADMSCs，并合成RADAI-16、RGD、KLT 3种多肽且按体积比2∶1∶1制备RADAI-16∶KLT∶RGD多肽混合溶液，原子力显微镜（AFM）下观察多肽水凝胶形态（n＝4）。使用水凝胶对ADMSCs进行三维培养，并设置ADMSCs普通培养组（37 ℃、5%CO2细胞培养箱）和缺氧培养组（37 ℃、10%CO2、1%O2乏氧培养箱）作为对照。酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组细胞培养上清内血管内皮生长因子（VEGF）（n＝3）、肝细胞生长因子（HGF）（n＝3）浓度；Western blot检测细胞内血红素氧合酶-1（HO-1）（n＝3）的表达。结果分离培养的ADMSCs为长梭形，呈＂漩涡式＂生长。RADA16-I、RGD、KLT及自组装多肽溶液在AFM下均为纳米纤维状，直径10～20 nm，长度100～500 nm。ELISA法测得普通培养1 d、缺氧培养1 d及三维培养1 d后细胞培养上清中HGF浓度分别为（47.31±6.75）、（247.86±17.59）、（297.25±17.95） ng/L；VEGF浓度分别为（218.30±3.03）、（267.13±4.27）、（289.14±3.11） ng/L，缺氧及三维培养条件下细胞旁分泌HGF、VEGF均增高，但三维培养条件下增高更明显（P＝0.000）。Western blot结果显示三维培养组细胞内HO-1的表达量约为普通培养组2倍（P＝0.000），为缺氧培养组1.2倍（P＝0.033）。结论功能性自组装纳米多肽水凝胶介导ADMSCs的三维培养能明显促进其旁分泌作用，且缺氧是其重要影响因素之一。
- 凌建民田爱玲范鲁峰邵闻冲武涵焦阳胡三元孙念峰
- 关键词：脂肪间充质干细胞旁分泌缺氧
- 磁性金纳米基因载体的制备及结合DNA研究
- 2013年
- 目的制备1种高分子材料聚乙烯亚胺（PEI）修饰的磁性金纳米粒子作为新型基因载体，观察其表征及结合DNA的能力。方法应用原位合成法合成稳定的复合磁性金纳米微粒（Au-MP-PEI）,将适量FeCl3和FeS04制备纳米磁颗粒（MP-CA）分散液，加人适量PEI溶液及氯金酸（AU-C14 ·3H20）溶液沸腾制得Au-MP-PEI;通过透射电镜观察磁性金纳米粒形态，并检测该纳米粒的粒径及电位分析;采用原液及稀释1 倍的纳米载体进行磁性金纳米载体-DNA的结合实验。结果对PEI包敷的纳米磁颗粒（MP-PEI）做磷钨酸染色后电镜扫描可见每1个团聚体都有数个纳米颗粒构成,笼罩在薄薄一层灰黑色分子下，大小在90 nm左右，而在磁性金纳米颗粒电镜照片中磁颗粒表面可见较多黑色点状颗粒，此即为合成的胶体金。通过不同浓度的金磁纳米载体凝胶阻滞电泳证明磁性金纳米原液能将DNA完全结合。结论成功制备粒径均一的磁性金纳米粒子作为新型基因载体，并且凝胶电泳实验证明该基因载体对DNA具有完全结合的能力。
- 孙念峰徐伯栋胡三元田爱玲钟孝斌孟庆义王瑞华刘兆轩
- 关键词：DNA
- 重组质粒pDsRed1-C1-TRAIL的构建及鉴定
- 2010年
- 目的:构建重组质粒pDsRed1-C1-TRAIL并鉴定,为下一步利用纳米载体介导FL基因移植作用于结肠癌细胞的体内实验奠定基础。方法:应用基因合成和克隆技术构建重组质粒pDsRed1-C1-TRAIL,并进行酶切鉴定及序列测定,以检测其核苷酸序列与设计是否完全一致。结果:重组质粒pDsRed1-C1-TRAIL经酶切鉴定分析,琼脂糖凝胶电泳鉴定可见清晰地切出与TRAIL基因大小相符的片段并与DNA marker相符,同时进行序列测定,证实其核苷酸序列与设计完全一致。结论:成功构建重组质粒pDsRed1-C1-TRAIL并得到正确鉴定,为下一步结肠癌的基因治疗打下实验基础。
- 孙念峰孟庆义田爱玲王瑞华刘兆轩李博
- 关键词：重组质粒TRAIL基因基因治疗
- 纳米脂质体介导酪氨酸激酶受体3配体基因转染树突状细胞对结肠癌细胞凋亡的作用
- 2011年
- 目的观察利用阳性纳米脂质体介导的基因治疗联合免疫治疗对结肠癌细胞的治疗作用。方法应用基因克隆技术分别构建含有绿色荧光蛋白报告基因的重组质粒（pEGFP），并依据静电吸附原理制备携带基因的阳离子纳米脂质体，再将转染阳性的树突状细胞（DC）移植作用于结肠癌细胞。结果成功构建含有绿色荧光蛋白报告基因的重组质粒，并得到酶切鉴定和序列测定证实。携带酪氨酸激酶受体3配体（FL）基因的阳离子纳米脂质体成功转染DC，发现基因在细胞内得到很好表达，且随着培养时间的增加，蛋白表达量有所增加，72h时表达量最高。基因移植后发现对照组肿瘤体积增长最快，FL基因组肿瘤体积增长较慢；FL基因组肿瘤细胞凋亡率和死亡率明显高于对照组（P〈0．05）；而pEGFP组和对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论阳离子纳米脂质体作为基因载体具有一定优越性。基因治疗联合免疫治疗在结肠癌治疗中具有重要意义。
- 孙念峰孟庆义田爱玲王瑞华刘兆轩胥莉
- 关键词：基因治疗结肠癌
- 纳米缓释药物和基因载体的制备及其在结肠癌治疗中的作用
- 胡三元孙念峰田爱玲陈伟杰陈景波
- 该项目属于肿瘤临床基础研究及临床应用范畴。《纳米缓释药物和基因载体的制备及其在结肠癌治疗中的作用》是由国家863计划子课题(编号2007AA021802)、山东省自然科学基金(Y2008C08)和教育部高等学校博士学科点...
- 关键词：
- 关键词：结肠癌治疗基因载体药物治疗
- 抗凋亡Bag-1基因RNA干扰载体构建及内源性筛靶研究
- 2012年
- 目的构建Bag-1短发卡RNA（shRNA）干扰载体并通过内源性筛靶实验检测Bag-1基因mRNA和蛋白的表达，筛选出最佳的干扰靶序列。方法应用干扰技术构建Bag-1shRNA干扰载体，在细胞转染预实验中将构建好的带有绿色荧光蛋白的质粒转染Lovo细胞，通过观察绿色荧光蛋白来判断转染的效率，分别应用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot法检测Bag-1在LoVo细胞中的表达。在shRNA干扰序列筛选实验中，通过定量PCR和Westernblot法来检测构建的干扰载体在LoVo细胞中的表达。结果重组质粒分别经双酶切分析，琼脂糖凝胶电泳鉴定可见清晰地切出与Bag-1及pGPHl／GFP／Neo载体大小相符的片段并与DNAMarker相符。用带绿色荧光基因的pGPHl／GFP／Neo-shNC质粒转染LoVo细胞，在转染后的第24、48及72小时分别观察到逐渐增强的绿色荧光蛋白的表达。分别应用RT—PCR和Westernblot法检测Bag-1在LoVo细胞中的表达，可见Bag-1在LoVo细胞中的mRNA和蛋白表达水平均较高。在Bag-1有效shRNA干扰序列筛选实验中，综合定量PCR及Westernblot内源筛靶结果，筛选出Bag-1-homo-825作为最佳干扰靶序列。结论成功构建针对小鼠Bag-1基因的特异性shRNA质粒，获得稳定转染的结肠癌Lovo细胞株，结果证明所构建的pGPHl／GFP／Neo—Bag-1-homo-825作为最佳干扰靶序列，显著抑制Lovo细胞Bag-1mRNA和蛋白的表达。
- 孙念峰田爱玲徐伯栋田玉玲胡三元
- 关键词：RNA干扰BAG-1基因基因治疗结肠癌
- 重组质粒pEGFP-c1-FLT3L的构建及鉴定
- 2011年
- 目的:构建重组质粒pEGFP-c1-FLT3L并鉴定,为下一步利用纳米载体介导FL基因移植作用于结肠癌细胞的体内实验奠定基础。方法:应用基因合成和克隆技术构建重组质粒pEGFP-c1-FLT3L,并进行酶切鉴定及序列测定,以检测其核苷酸序列与设计的是否完全一致。结果:重组质粒pEGFP-c1-FLT3L经酶切鉴定分析,琼脂糖凝胶电泳鉴定可见清晰地切出与FLT3L基因大小相符的片段并与DNAmarker相符,同时进行序列测定,证实其核苷酸序列与设计完全一致。结论:成功构建重组质粒pEGFP-c1-FLT3L并得到正确鉴定,为下一步结肠癌的基因治疗打下实验基础。
- 孙念峰孟庆义田爱玲王瑞华刘兆轩李博
- 关键词：重组质粒基因治疗
