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祝文涛: 作品数：22 被引量：62H指数：5; 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>; 发文基金：湖北省自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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电磁场刺激对骨髓间充质干细胞即刻早期基因表达的影响被引量：4: 2008年; 背景:细胞受刺激后即刻早期基因在细胞核内快速表达,其编码的核蛋白作为反式作用因子,通过激活某些基因的转录而调控细胞的增殖、分化等生物学行为。目的:观察电磁场刺激对大鼠骨髓间充质干细胞c-fos、c-myc和c-jun即刻早期基因表达的影响。设计、时间及地点:电刺激干预的体外细胞学观察,于2006-10/2007-01在同济医院矫形外科实验室完成。材料:清洁级健康Sprague-Dawley大鼠6只,由华中科技大学同济医学院动物实验中心提供。电磁场发生器由海军工程大学电机系设计制造。方法:贴壁筛选法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,传至第4代按2×103个/孔接种,每孔均加入200μL含10%胎牛血清的DMEM-F12培养基,分为2组,对照组细胞置于普通培养箱中培养3d,暴磁组在培养箱中安装电磁场发生器,频率50Hz、强度1mT的正弦波,每次刺激30min,间隔11.5h,2次/d,共刺激5d。主要观察指标:MTT法检测细胞增殖活性,考马斯亮蓝法测定细胞碱性磷酸酶活性,RT-PCR检测即刻早期基因的表达。结果:电磁场刺激3d后,暴磁组MTT产物吸光度值明显高于对照组(P<0.01);电磁场刺激5d后,暴磁组细胞碱性磷酸酶活性明显高于对照组(P<0.01)。与对照组比较,暴磁组c-fos和c-myc基因表达均有不同水平的上调(P<0.01),c-jun基因无明显变化。结论:电磁场刺激可上调骨髓间充质干细胞中c-fos和c-myc即刻早期基因的表达,可能通过该途径来促进骨髓间充质干细胞的增殖活性,诱导其向成骨细胞分化。; 赵东明吴华祝文涛杨勇陶超雄陈超; 关键词：电磁场骨髓间充质干细胞即刻早期基因增殖分化

肺癌抑癌基因1对人前列腺癌T_3B细胞增殖的抑制效应被引量：3: 2009年; 背景与目的:肺癌抑癌基因1(tumor suppressor in lung cancer1,TSLC1)是新近发现的一种肿瘤抑制基因,它在包括前列腺癌在内的多种恶性肿瘤中是失活的。本研究通过将TSLC1转染至人前列腺癌T3B细胞来观察T3B细胞增殖的受抑情况。方法:将克隆有TSLC1全长cDNA的真核重组载体pCI-TSLC1稳定转染至前列腺癌T3B细胞中(实验组)。以转染空质粒pCI-neo的T3B细胞为对照组,野生型T3B细胞为空白组。四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖,FACSort流式细胞仪检测细胞周期,AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡情况。结果:实验建立了高表达TSLC1蛋白的稳定细胞株。与对照组和空白组相比,实验组细胞生长速度减慢,增殖受到明显抑制,G0/G1期细胞为(80±3)%,高于对照组(66±4)%和空白组(64.2±0.9)%;S期细胞为(11.1±1.3)%,低于对照组(24.0±2.4)%和空白组(26.2±0.6)%,组间差异有显著性(P<0.01),实验组细胞周期发生了明显的G0/G1期阻滞。实验组细胞早期凋亡率,晚期凋亡率和总凋亡率分别为(11.9±0.4)%,(10.2±0.4)%和(22.1±0.6)%,与对照组和空白组细胞相比均明显升高(P<0.01)。结论:TSLC1基因明显抑制T3B细胞增殖,并诱导细胞发生凋亡。; 袁林陈安民郭风劲祝文涛王江廖晖; 关键词：前列腺肿瘤抑癌基因 TSLC1

siRNA抑制人高迁移率族蛋白1表达对前列腺癌PC-3增殖的影响被引量：6: 2008年; 目的:研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因的表达对人前列腺癌细胞PC-3增殖的影响。方法:构建真核表达载体Pgenesil-1/HMGB1 siRNA,在脂质体Lipofectamine 2000的介导下转染前列腺癌PC-3细胞株,通过RT-PCR和Western Blot检测HMGB1的mRNA及蛋白质的变化;流式细胞仪检测细胞周期;噻唑蓝(MTT)检测细胞生长曲线。观察转染后PC-3细胞HMGB1基因表达和体外增殖活性的变化。结果:成功构建siRNA表达载体Pgenesil-1/HMGB1 siRNA,所获表达载体转染可使PC-3细胞HMGB1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),并能有效抑制PC-3增殖活性(P<0.05)。结论:应用siRNA干扰技术能有效的抑制HMGB1基因的表达,同时也可有效抑制癌细胞的体外增殖活性,为肿瘤的生物学治疗提供新思路。; 宋登新陈安民郭风劲谢柏臻廖晖祝文涛王江; 关键词：高迁移率族蛋白1 SIRNA 人前列腺癌细胞

肺癌抑癌基因-1对人骨肉瘤细胞株MG63的侵袭和转移抑制效应研究: 2013年; 目的观察肺癌抑癌基因-1(TSLC1)稳定转染至骨肉瘤细胞株后对其侵袭、转移及裸鼠皮下成瘤能力的影响。方法采用稳定表达TSLC1基因的人骨肉瘤细胞株M8T为研究对象,转染空载体的细胞系M8P设为对照组,MG63细胞株为空白组;Transwell法检测三组细胞株的体外侵袭和迁移能力;将细胞制成1×107细胞悬液,于裸鼠尾静脉注射,第4周开始处死裸鼠,肉眼及镜下观察肺部转移灶形成情况,肺组织石蜡包埋切片HE染色检测。将0.5 mL磷酸盐缓冲液(PBS)重悬2×107细胞皮下注射5周龄裸鼠,皮下肿瘤生长情况1周检测1次。结果 M8T细胞株体外侵袭细胞数目为(25.86±2.12),迁移的细胞数目为(37.55±3.46);其裸鼠皮下成瘤形成时间:于注射后第4周开始生长,较对照组和空白组细胞株成瘤时间晚,体积显著减小,体内肺转移形成时间为注射后第9周,肺部转移灶发生率为40%。结论 TSLC1基因可明显抑制人骨肉瘤细胞的侵袭和转移及皮下成瘤能力。; 覃莉陈安民祝文涛; 关键词：肺癌骨肉瘤肿瘤侵润

重组蛋白sCAR-TMTP1增强腺病毒对骨肉瘤细胞基因转染效率的研究: 2016年; 目的提高腺病毒(adenovirus,ADV)在缺乏柯萨奇腺病毒受体(coxsackie and adenovirus receptor,CAR)的骨肉瘤细胞中的转染效率。方法通过昆虫(Bac-to-Bac)杆状病毒表达系统表达含有CAR胞外段(s CAR)及TMTP1肽的重组蛋白(s CAR-TMTP1),并对其纯化、鉴定。流式细胞仪分别检测骨肉瘤细胞及人胚肾细胞293(HEK293)的CAR表达水平,ADV对其的感染效率及FITC-TMTP1的结合能力。重组蛋白s CAR-TMTP1与ADV共同孵育形成复合物,流式细胞仪研究其在缺乏CAR的骨肉瘤细胞(MG-63)中的转染效率。结果表达及纯化的s CAR-TMTP1蛋白在相对分子质量约31 000处可见特异蛋白条带,感染的sf9细胞裂解上清可与兔抗小鼠s CAR单克隆抗体发生特异性反应。MG-63可与FITCTMTP1特异结合,其CAR表达水平低,ADV转染效率低。经s CAR-TMTP1修饰后的ADV/GFP对MG-63细胞的感染效率显著高于未经修饰的含报告基因GFP的ADV(ADV/GFP)。结论重组蛋白s CAR-TMTP1可显著提升ADV对缺乏CAR的骨肉瘤细胞的转染效率。; 罗丹枫龚静吉程腾魏睿魏军成祝文涛; 关键词：骨肉瘤腺病毒重组蛋白

人ACHN肾癌裸鼠荷瘤模型建立及相关特性研究被引量：4: 2008年; [目的]探讨建立肾癌ACHN细胞系裸鼠皮下移植瘤及转移瘤模型的适宜条件。[方法]MTT法观察细胞生长情况。将裸鼠分组,分别用2.0×106/100μl(A组)、3.0×106/100μl(B组)和4.0×106/100μl(C组)的细胞接种浓度,注入裸鼠后项中间皮下;用4.0×106/100μl的细胞接种浓度,分别接种于裸鼠后项中间(C组)、背部(D组)和前肢腋窝皮下(E组);分别用第20代(F组),第30代(G组)和第10代(C组)的肿瘤细胞4.0×106/100μl,注入裸鼠后项中间,观察各组成瘤情况。尾静脉注射瘤细胞1.0×106/ml建立转移模型。[结果]第4天细胞进入对数生长期。A组成瘤率为33.3%、B组和C组的成瘤率均为100%,但C组的成瘤速度明显高于B组;C组、D组和E组的成瘤率均为100%,注射肿瘤细胞后第10天,C组、D组和E组的肿瘤生长平均相对体积,各组间尚无明显差异;注射后第30天,C组的肿瘤生长平均相对体积显著高于D组和E组(P<0.05);G组的成瘤率为83.3%,F组的成瘤率为100%,与C组相比,无显著性差异(P>0.05)。尾静脉注射组全部出现转移灶。[结论]使用ACHN细胞株,控制好浓度、接种部位以及传代次数后能获得较理想的裸鼠肾癌皮下移植瘤模型;使用传统尾静脉注射法可以建立裸鼠转移模型。; 王江陈安民郭风劲祝文涛丁然; 关键词：肿瘤转移肾肿瘤

shRNA表达载体介导的细胞周期蛋白E1基因沉默对肾癌ACHN细胞生长的抑制作用: 2008年; 背景与目的:肾细胞癌中细胞周期蛋白E1(cyclinE1)的过表达与预后密切相关。为进一步验证其作为肿瘤基因治疗新靶点的可行性,本研究探讨shRNA表达载体介导的cyclinE1基因沉默对肾癌ACHN细胞生长的抑制作用。方法:针对cyclinE1基因设计并合成特定的RNA干扰模板片段,连接到pGenesil-1-U6载体上构建shRNA真核表达载体;将上述重组载体经脂质体转入ACHN肾癌细胞株。RT-PCR、Western印迹分析cyclinE1基因mRNA及蛋白表达抑制率;MTT比色法绘制细胞生长曲线;流式细胞术测细胞周期和凋亡细胞比率;Transwell小室体外侵袭实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果:shRNA重组载体介导肾癌ACHNcyclinE1抑制效果显著(0.09±0.05),显著低于空载体对照组(0.88±0.04)及未转染组(0.90±0.03)(P<0.05)。经流式细胞术测得转染重组质粒组细胞生长停滞于G1期且凋亡比率显著升高(11.15±4.00)%(P<0.05)。生长曲线结果显示重组载体转染组细胞生长明显缓慢(P<0.05)。Transwell及迁移实验结果提示,转染重组质粒组细胞侵袭和迁移能力显著下降(P<0.05)。结论:肾癌cyclinE1的表达可被载体介导诱发的RNA干扰所成功抑制,进而导致细胞生长、增殖以及侵袭能力受抑并诱导凋亡;本研究为探讨肾癌的RNAi治疗提供了初步实验依据。; 王江陈安民郭风劲祝文涛袁林陈剑峰; 关键词：RNA干扰细胞增殖凋亡

肺癌抑癌基因1对人骨肉瘤细胞株MG63生长和增殖的影响被引量：3: 2013年; 目的观察肺癌抑癌基因1（TSLC1l）对人骨肉瘤细胞株MG63的生长和增殖能力的影响。方法将稳定表达TSLC1的人骨肉瘤MG63细胞株M8T设为研究对象，转染空载体的骨肉瘤MG63细胞株M8P设为对照组，人骨肉瘤细胞株MG63设为空白组。噻唑蓝（MTT）法检测M8T细胞增殖；FACSort流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡；将2×10^7个瘤细胞皮下注射裸鼠，观察体内成瘤的影响。结果稳定转染TSLC1的实验组M8T细胞株与对照组及空白组细胞比较，其细胞增殖能力下降，生长速度明显受到抑制；M8T细胞G0～G1期细胞数为（63．76±2．78）％，生长周期出现了G0-G0期阻滞，细胞凋亡总数为（28．45±0．65）个，显著增加（P〈0．1）；裸鼠皮下成瘤于皮下注射后3周开始形成。结论TSLC1能明显抑制骨肉瘤MG63细胞的生长和增殖。; 覃莉林阳陈文坚陈安民祝文涛; 关键词：骨肉瘤增殖

颈椎后纵韧带骨化症的外科治疗方式被引量：5: 2012年; 目的研究不同类型颈椎后纵韧带骨化症﹙OPLL﹚的手术治疗方式及疗效分析。方法统计2007年~2009年治疗的颈椎OPLL患者64例,分别采用后路椎板单开门减压成形术、前路减压植骨融合内固定术及前后路联合减压手术治疗,统计术前术后JOA评分并计算神经功能改善率,评估疗效。结果后路手术44例,术前JOA评分7~12分,平均9.2±1.3分,术后1年JOA评分10~16分,平均13.6±1.5分,神经功能改善率16.7%~87.5%,平均﹙55.7±18.7﹚%;前路手术14例,术前JOA评分8~11分,平均8.9±0.9分,术后1年JOA评分12~15分,平均14.1±0.8分,神经功能改善率44.4%~77.8%,平均﹙63.4±10.0﹚%;前后联合手术6例,术前JOA评分7~10分,平均8.0±1.1分,术后1年JOA评分13~14分,平均13.5±0.5分,神经功能改善率55.6%~70.0%,平均﹙60.8±6.1﹚%。前路手术组术前症状较后路手术组重,手术难度更大,但术后神经功能恢复更好。结论根据颈椎OPLL的类型、部位、椎管压缩率、年龄选择合适的手术方式,能够取得更好的治疗效果,减少并发症发生。; 林阳祝文涛陈文坚陈安民郭风劲李锋方煌; 关键词：颈椎后纵韧带骨化手术

pTet-on骨骺干细胞株的建立和pTRE-甲状旁腺相关蛋白（1—36）反应质粒的构建被引量：1: 2008年; 目的建立pTet—on骨骺干细胞株，克隆甲状旁腺相关蛋白[PTHrP（1—36）]基因并构建反应质粒pTRE—PTHrP（1—36）。方法用脂质体介导的基因转染技术将pTet—on质粒转染于永生化骨骺干细胞，G418筛选得到稳定克隆，再瞬时转染pTRE-2Hyg—Luc质粒并筛选出高水平诱导、低背景表达的永生化骨骺干细胞系。以RT—PCR方法获得带有酶切位点PTHrP（1—36）基因片段，与载体pTRE-2Hyg均双酶切后连接，转化扩增后对重组质粒进行提取和酶切、测序鉴定。结果筛选到1株诱导后荧光素酶的表达活性增加50倍的骨骺干细胞系；经酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已经插入重组质粒。结论筛选得到的永生化骨骺干细胞株受强力霉素诱导后能够低背景、高水平表达；成功克隆PTHrP（1—36）基因并构建了反应质粒pTRE—PTHrP（1—36），为进一步精确调控PTHrP（1—36）基因的表达奠定了基础。; 张树威陈安民李明辉祁军宋登新祝文涛廖晖郭风劲; 关键词：骨骺强力霉素基因表达调控甲状旁腺相关蛋白

祝文涛

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