罗春华
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 供职机构：南华大学医学院肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：湖南省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 稳定表达外源性p16基因肝癌SMMC-7721细胞株的建立及鉴定被引量：3
- 2005年
- 目的 构建稳定表达外源性p1 6基因的肝癌SMMC - 772 1细胞株。方法 利用脂质体介导的基因转染方法,借助真核质粒表达载体pcDNA3.1 ( + ) ,将外源性p1 6基因转染入此基因表达下调的人肝癌细胞株SMMC - 772 1细胞中,经G41 8筛选,建立稳定表达的细胞株,用逆转录聚合酶链反应(RT -PCR)及免疫组织化学法鉴定p1 6基因的表达,同时对细胞株分泌蛋白进行活性检测。结果 转染p1 6基因的SMMC - 772 1细胞中可以检测到p1 6mRNA及蛋白的表达。结论 建立稳定表达P1 6抑癌蛋白的SMMC - 772 1细胞株有助于研究p1 6抑癌基因在肝癌发生中的作用。
- 罗春华朱建思
- 关键词：P16抑癌基因基因转染肝肿瘤
- 人canstatin基因的克隆及其真核载体的构建被引量：1
- 2005年
- [目的]克隆人canstatin基因,构建并鉴定其真核表达载体pSecTag2/canstatin。[方法]采用RT-PCR方法从中国人胎盘脐带组织中扩增canstatincDNA,T-A克隆到pUCm-T载体中,酶切后将人canstatincDNA亚克隆入pSecTag2,构建真核表达载体pSecTag2/canstatin,重组质粒经限制性内切酶鉴定并进行测序分析。[结果]人canstatin基因片断正确插入载体,与Genebank中报道的序列一致。[结论]pSecTag2/canstatin真核载体的构建为进一步进行canstatin蛋白表达、活性鉴定和作用机制研究以及canstatin用于基因治疗奠定了基础。
- 苏影朱建思周建国罗春华
- 关键词：CANSTATIN血管生成抑制因子真核表达载体
- 外源性p16基因对人肝癌细胞生物学行为的影响及其机制
- 目的:构建人p16cDNA重组真核表达载体。探讨转入外源性p16cDNA对人原发性肝癌SMMC-7721细胞生物学行为的影响及其抑制细胞生长的机制。
方法:从pBS-p16克隆载体中,将人p1...
- 罗春华
- 关键词：G1期阻滞CYELIND1PRB
- 文献传递
- 外源性p16基因对人原发性肝癌细胞生物学行为的影响及其机制被引量：1
- 2005年
- 目的:探讨导入外源性p16cDNA真核表达载体对人原发性肝癌细胞系SMMC- 772 1生物学行为的影响及其分子机制。方法:构建外源性p16基因真核表达载体并转染SMMC- 772 1细胞,经G4 18抗性筛选和扩增,得到稳定的表达株,并经RT -PCR及免疫细胞化学鉴定。通过生长曲线,流式细胞术,免疫细胞化学及Western -Blot等实验方法,对转基因后肿瘤细胞生物学行为及细胞周期调控因子CDK4 ,CyclinD1及pRb进行观察。结果:转染外源性p16基因的SMMC- 772 1细胞有外源性p16基因的整合及表达,细胞生长速度明显减慢,倍增时间明显延长,G1期细胞明显多于转基因前(P <0 .0 5 ) ;免疫细胞化学显示外源性p16表达可下调CDK4及cylinD1的表达(P <0 .0 5 ) ,Western -Blot提示转染外源性p16基因后细胞中磷酸化pRb表达明显降低。结论:外源性p16基因导入人肝癌细胞株SMMC -772 1中可稳定表达并使细胞停滞在G1期,抑制细胞生长,其机制可能为下调CDK4、cyclinD1的表达和抑制pRb磷酸化有关。
- 罗春华朱建思苏影周建国董琳
- 关键词：G1期阻滞CYCLIND1CDK4PRB
