罗晓莹
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
- 供职机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程生物学更多>>
- miR-103/MTHFR轴抑制肝细胞癌中LINE-1基因的甲基化水平被引量：1
- 2022年
- 目的:研究肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中长散在核元件1(long interspersed nuclear element-1,LINE-1)基因的甲基化状态,并探讨调控DNA整体甲基化的可能因素。方法:使用Taqman实时荧光定量PCR方法检测LINE-1基因的甲基化水平,用实时荧光定量PCR检测微RNA(microRNA,miRNA,miR)-103和亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)mRNA的表达水平,采用蛋白质印迹法和免疫组织化学法检测MTHFR蛋白的表达水平。利用癌症基因组图谱(e Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库,分析HCC组织中不同miRNA的表达水平,利用miRDB等靶基因预测数据库预测miR-103的靶基因,采用荧光素报告基因实验检验miR-103与其靶基因MTHFR的直接相互作用。将miR-103-mimics、miR-103-inhibitor及各自阴性对照(negative control,NC)或过表达miR-103/MTHFR慢病毒颗粒转入肝癌BEL-7402细胞中,检测不同处理对LINE-1基因甲基化的影响。结果:HCC组织中LINE-1基因甲基化水平较癌旁组织下降,且这种低甲基化与预后差相关。TCGA数据库分析结果显示,miR-103是HCC组织中高表达且表达上调的miRNA之一,miR-103表达高的患者较表达低者预后差,这种表达上调在176例患者的样本中得到验证。miR-103过表达可直接抑制MTHFR的表达,导致LINE-1基因甲基化水平降低。HCC患者癌组织较癌旁对照组织的MTHFR mRNA和蛋白水平降低。MTHFR过表达的细胞中LINE-1基因甲基化水平升高。结论:LINE-1基因的甲基化水平受miR-103/MTHFR轴调控,在HCC组织中降低且与患者预后相关;miR-103在HCC组织中高表达,提示miR-103/MTHFR/DNA整体甲基化可能是HCC进展中的重要变化过程。
- 刘玉玲梁顺顺徐慧莉胡晶莹张源洲罗晓莹
- 关键词：肝细胞癌DNA甲基化MTHFR
- 分泌型簇集素蛋白在肺癌细胞株中生物学行为的研究被引量：1
- 2013年
- 背景与目的:簇集素蛋白(clusterin,CLU)在肺癌的发生、发展中发挥重要作用。本研究用分泌型CLU体外处理肺癌细胞株,旨在探讨分泌型CLU对肺癌细胞株的影响。方法:用真核表达纯化的分泌型CLU处理非小细胞肺癌细胞株H460、A549,采用Boyden小室试验检测细胞的迁移能力,用CCK8检测细胞的增殖能力,利用芯片技术分析CLU处理H460细胞的microRNA表达谱,然后采用实时荧光定量PCR检测分泌型CLU处理H460细胞中microRNA的表达,初步分析分泌型CLU执行肿瘤生物学功能的microRNA相关分子机制。结果:分泌型CLU处理组H460迁移的细胞是BSA处理组的3.10倍(P<0.000 1);分泌型CLU处理组A549迁移的细胞是BSA处理组的3.40倍(P<0.000 1);分泌型CLU抑制了肺癌细胞株H460/A549的生长(P<0.000 1);利用芯片技术发现microRNA-302b-3p、microRNA-23a-5p和microRNA-101-5p高表达。结论:在非小细胞肺癌细胞株H460/A549中,真核表达的分泌型CLU促进了细胞迁移、抑制了细胞生长,并且能引起microRNA表达谱的改变,本研究为探索分泌型CLU在非小细胞肺癌中的作用提供了重要的实验依据。
- 马晓罗晓莹李宗海李鹤成
- 关键词：细胞迁移
- 靶向肽位置影响融合蛋白与细胞结合活性被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨靶向多肽与标签蛋白(绿色荧光蛋白)的位置关系是否会影响融合蛋白与细胞之间的结合能力。方法:将获得的GE11和LyP1两种靶向多肽分别与增强型绿色荧光蛋白在不同位置融合表达,通过原核系统表达纯化,将纯化的蛋白加入血清饥饿的SMMC-7721肝癌细胞株培养液中,处理3h,通过荧光显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白的情况检查融合多肽与细胞的结合情况。结果:绿色荧光蛋白的羧基端和GE11、LyP1多肽分别融合表达,处理细胞后,融合蛋白显示与细胞有很强的结合能力;当GE11、LyP1在绿色荧光蛋白氨基端融合时,融合蛋白几乎不能与细胞结合。在此基础上,检测了多种靶向肽对多种细胞的靶向效应。结论:不合适的融合策略会降低,甚至消除靶向多肽的结合能力;融合大分子量蛋白也会改变靶向肽的靶向效应。因此,当使用靶向多肽携带基因进行研究时,其在融合蛋白中的位置应该非常谨慎。
- 王海石必枝杨胜利李宗海罗晓莹
- 用于新型冠状病毒检测的纳米材料及生物传感技术被引量：1
- 2023年
- 新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)疫情大流行引起全球对此重大突发公共卫生事件的高度关注。新型冠状病毒(SARS-CoV-2)经过多次突变,出现传染速度加快、免疫逃逸、隐匿性传播等特性,令防控形势至今仍异常严峻。对患者的早发现、早隔离仍然是目前最有效的防控措施。因此,迫切需要快速、高灵敏的检测手段来甄别此病毒,以便及早识别感染者。本文简要介绍了SARS-CoV-2的一般特征,并针对核酸、抗体、抗原及病原体作为检测靶标的不同检测手段及最新进展进行分类概述;对一些光学、电学、磁学以及可视化的新型纳米传感器在SARS-CoV-2检测技术上的应用进行了分析。鉴于纳米技术的应用在提高检测灵敏度、特异性以及准确率上具有优势,本文详细介绍了新型纳米传感器在SARS-CoV-2检测中的研究进展,包括表面增强拉曼基生物传感器、电化学生物传感器、磁纳米生物传感器以及比色生物传感器等,并探讨了纳米材料在新型生物传感器构建中的作用和挑战,为纳米材料研究人员开发各种类型的冠状病毒传感技术提供思路。
- 李妍妍彭宇思林成龙罗晓莹滕峥张曦黄政仁杨勇
- 关键词：核酸抗原纳米材料生物传感器
- 功能纳米材料应用于电化学新冠病毒生物传感器的研究进展
- 2023年
- 新冠疫情暴发对全球公共卫生构成了巨大威胁,病毒的快速、准确诊断对新冠疫情防控具有至关重要的作用。近年来,以纳米材料为基础的电化学传感技术在快速、高灵敏度/高特异性分子诊断方面显示出巨大的潜力。本文简要介绍了新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的结构特征及常规检测方法,总结了电化学生物检测相关传感特点和机制。在此基础上,详细评述了金纳米材料、氧化物纳米材料、碳基纳米材料等为基础的电化学传感器用于快速、准确检测新冠病毒的研究进展。最后,展望了基于电化学传感技术在未来生物分子诊断中的应用。
- 刘瑶尤勋海赵冰罗晓莹陈星
- 关键词：电化学生物传感器纳米材料
- 真核表达分泌型簇集素蛋白的纯化及其功能的初步研究
- 2013年
- 目的:本研究旨在通过纯化分泌型簇集素(secretory clusterin,sCLU)蛋白,并对其生物学功能进行初步探索。方法:以人肺癌NCI-H460细胞cDNA为模板,构建真核表达质粒pRAG5-ag-sCLU,并转染HEK-293F细胞表达目的蛋白;采用亲和层析柱纯化目的蛋白后,分别采用Flag抗体及clusterin抗体行蛋白质印迹法检测鉴定纯化的sCLU蛋白。采用不同浓度纯化的sCLU蛋白处理NCI-H460细胞,观察其对细胞形态的影响。采用Boyden小室法鉴定sCLU蛋白对肺癌LETP-a-2细胞迁移能力的影响。结果:成功纯化获得具有二级结构的sCLU蛋白;sCLU蛋白浓度为5.4μmol/L时可使NCI-H460细胞的形态发生改变,并促进LETP-a-2细胞的迁移(P=0.0021)。结论:sCLU蛋白可能通过上皮间质转化促进肺癌细胞的迁移,sCLU蛋白的纯化将为其进一步应用于临床研究奠定了良好的实验基础。
- 马晓罗晓莹朱晓丽李宗海李鹤成
- 关键词：真核表达载体上皮间质转化
