肖田
- 作品数：3 被引量：15H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金卫生部临床学科重点项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 饥饿诱导肿瘤细胞自噬对细胞周期的影响被引量：8
- 2008年
- 背景与目的:无血清饥饿方法可以诱发细胞自噬,同时也可以引起细胞周期阻滞。虽然研究者们对细胞自噬与细胞周期已经进行了深入的研究,但是对于两者之间的关系还是知之甚少。本研究旨在通过研究细胞周期素(Cyclin)在饥饿诱导的细胞发生自噬时表达的变化,来探讨自噬对细胞周期的影响。方法:对照组:d-Hanks液代替培养基饥饿诱导处于对数生长期的HeLa细胞,收获饥饿0、3、6、12h的细胞。实验组:用d-Hanks液开始饥饿的同时加入3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA),收获饥饿0、3、6、12h的细胞,用流式细胞术和Western blot法检测细胞周期素和特异性标记自噬的兔抗人微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC-3)。结果:饥饿3h对照组HeLa细胞中有LC-3表达,并随饥饿时间延长而逐渐增加。Cyclin E、Cyclin D3在饥饿3h开始减少,在饥饿6h降低至最低水平,而Cyclin A、Cyclin B1在饥饿6h开始下降。实验组HeLa细胞在饥饿3h时LC-3的表达水平较低,随饥饿时间的延长LC-3表达基本不变化,Cyclin D3、Cyclin E、Cyclin A、Cyclin B1表达的下降速度也较对照组减慢。结论:自噬参与饥饿诱导的Cyclin降解的水解过程,Cyclin D3、Cyclin E水解比Cyclin A、Cyclin B1出现早,降解速度快。
- 葛军娜黄丹肖田王尊李小兰肖徽陶德定龚建平
- 关键词：HELA细胞自噬细胞周期素细胞周期流式细胞术
- 人重组Fas配体体外诱导细胞周期特异性凋亡模型的建立被引量：3
- 2007年
- 目的运用人重组Fas配体(rhFasL),体外诱导稳定而又典型的Fas介导的细胞周期特异性凋亡模型,为针对其细胞凋亡过程中的细胞周期机制研究、肿瘤的生物学治疗和自身免疫性疾病的防治等提供科学的研究平台。方法以白血病细胞系(Molt-4和Jurkat细胞系)和进入细胞周期的外周血淋巴细胞为载体,用人重组Fas配体诱导细胞6～36h后,用亚G1峰法、传统的AnnexinⅤ/PI和改良后的API法进行标记并用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果改良后的API法显示人重组Fas配体诱导的细胞凋亡具有细胞周期特异性及始动位点;传统的AnnexinⅤ/PI显示在将细胞凋亡控制在10%～20%并以早期细胞凋亡为主时诱导的模型最典型;亚G1峰法只能检测晚期细胞凋亡和进行DNA直方图分析。结论人重组Fas配体体外诱导的细胞凋亡具有细胞周期特异性并始动于G1期,联合应用传统的Annex-in-Ⅴ/PI及改良后的API法能为建立稳定而又典型的体外Fas介导的细胞周期特异性凋亡模型提供技术支撑。
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- 关键词：细胞周期细胞凋亡流式细胞术
- 分选后晚G_1期凋亡细胞Cyclin E表达分析被引量：4
- 2009年
- 目的以G1期细胞凋亡为模型,检测细胞周期素Cyclin E是否与凋亡相关。方法收获紫外线照射后的人类急性淋巴细胞性白血病细胞,一部分采用流式细胞术将凋亡诱导后的细胞进行Cyclin E/DNA双参数分析和细胞周期特异性细胞凋亡API双参数分析;一部分利用流式细胞分选术将凋亡诱导后的细胞分为凋亡组和未凋亡组,Westernblot法检测并比较两组细胞Cyclin E蛋白表达情况。结果Cyclin E/DNA双参数分析观察到凋亡诱导后细胞周期阻滞过程中细胞Cyclin E表达水平明显升高。分选后Western blot检测观察到凋亡组Cyclin E表达明显低于未凋亡组。结论Cyclin E表达水平的升高可能对晚G期细胞的凋亡起到保护作用。
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- 关键词：细胞周期细胞周期检测点细胞周期素
