赵微
- 作品数：28 被引量：104H指数：6
- 供职机构：辽宁医学院基础学院更多>>
- 发文基金：辽宁省科技厅基金辽宁省教育厅基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 人星状病毒I型非结构蛋白nsP1a及其C末端蛋白nsP1a/4的原核表达及鉴定被引量：1
- 2015年
- 人星状病毒(Human Astrovirus,HastV)是导致婴幼儿腹泻的重要病原体。HastV非结构蛋白nsP1a及C末端蛋白nsP1a/4含有各种保守的功能结构域,在星状病毒的复制、转录,病毒与宿主的相互作用中起重要作用。为获得nsP1a及其nsP1a/4蛋白,为后续蛋白相关研究提供平台,本研究在E.coli系统中进行人星状病毒非结构蛋白nsP1a及nsP1a/4蛋白的表达并对表达产物进行鉴定。首先将nsP1a及nsP1a/4基因克隆入原核表达载体PGEX-4T-1,构建nsP1a及nsP1a/4蛋白融合表达质粒;在E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,摸索两种融合蛋白表达的最优条件并对表达蛋白进行免疫印迹鉴定。结果表明nsP1a蛋白在30℃,1mM IPTG诱导12h时,蛋白表达量达到最高;nsP1a/4蛋白在20℃,0.5mM IPTG诱导8h时,蛋白表达量达到最高。Western blot结果显示两种融合蛋白既可与nsP1a蛋白免疫血清发生特异性反应,也可被GST标签抗体所识别。本研究成功利用原核系统表达并鉴定了人星状病毒非结构蛋白nsP1a及其C末端蛋白nsP1a/4,为进一步研究星状病毒非结构蛋白的功能及病毒的致病机制奠定基础。
- 刘文慧阚丽丽崔永胜谭李倩梁雪雪李新赵微
- 关键词：原核表达融合蛋白
- 凝溶胶蛋白对小鼠成肌细胞分化及肌纤维形成的影响研究
- 2010年
- 为了研究凝溶胶蛋白(gelsolin,GSN)对成肌细胞分化及肌纤维形成的作用及其作用机制,试验采用蛋白导入试剂将人血浆凝溶胶蛋白导入C2C12细胞中;通过倒置显微镜定性观察细胞分化的形态学变化并应用间接免疫荧光染色法检测凝溶胶蛋白的导入情况;利用TaqMan实时定量RT-PCR方法定量分析分化前导入凝溶胶蛋白对细胞骨骼肌肌动蛋白表达水平的影响。结果表明:外源凝溶胶蛋白改变了C2C12小鼠成肌细胞的形态,使其形成发达的片状伪足或丝状伪足,分化形成的多核肌管更多;细胞分化前导入凝溶胶蛋白上调骨骼肌肌动蛋白的表达。体外试验证明C2C12小鼠成肌细胞分化前导入凝溶胶蛋白可促进肌细胞的分化及肌纤维的形成。
- 姜瑜苏玉虹曾瑞霞赵微Kin Chow Chang
- 关键词：凝溶胶蛋白分化
- 猪CFL2b基因cDNA克隆初步分析被引量：4
- 2009年
- 利用基因表达谱芯片分析法筛选出与大白猪高肌肉产量-肌纤维形成有关的CFL2b基因.参考人和小鼠CFL2b基因序列,采用SMART-RACE技术结合EST序列拼接技术,从猪骨骼肌肌肉中首次克隆了猪CFL2b的全长cDNA序列(GenBank登录号EU561660,EU561661),Northern杂交检测CFL2b基因mRNA.结果表明,猪CFL2b基因含有2个转录本,长转录本3012bp,短转录本1466bp.CFL2b基因在多种真核生物中都有表达,且编码区序列非常保守,开放式读码框501bp编码了166个氨基酸的蛋白质.氨基酸序列分析表明,猪CFL2b基因与人和小鼠氨基酸同源性分别为100%和99.1%.核苷酸序列相似性分别为88.1%和74.9%.
- 赵微曾瑞霞巴彩凤宋慧娟苏玉虹
- 关键词：CDNASMARTRACENORTHERN杂交
- 大蒜素体外抗猴甲型轮状病毒的研究被引量：2
- 2016年
- 目的研究大蒜素体外抗猴甲型轮状病毒(SA11)的作用。方法通过病毒滴度测定来确定大蒜素能否抗SA11以及最佳浓度。结果大蒜素对MA104细胞的最大无毒浓度为100 mg/ml,病毒滴度测定可以得出,50 mg/ml的大蒜素可以抑制SA11感染的MA104细胞出现细胞病变效应(CPE)。结论一定浓度的大蒜素在体外有抗SA11的作用。
- 王佳美王胜男陈江曼赵微李永刚
- 关键词：大蒜素抗病毒
- 犬黑皮质素受体4真核表达载体的构建及表达被引量：3
- 2008年
- [目的]构建带myc和His标签的犬黑皮质素受体4真核表达载体并在MDCK细胞中进行表达。[方法]以犬MC4R基因组DNA为模板PCR扩增目的基因编码区,将扩增产物进行T-A克隆;酶切、测序鉴定成功后将目的基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A。重组体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R经酶切和测序鉴定;采用FuGENE HD介导转染技术将重组体导入MDCK细胞;转染后继续培养72 h,提取细胞内总RNA,RT-PCR鉴定目的基因的表达;提取细胞总蛋白,Western Blot检测蛋白表达。[结果]构建带标签的pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R重组真核表达载体,测序结果与GenBank公布的序列相似性为99%。RT-PCR和Western Blot检测到目的基因表达。[结论]成功构建犬真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A-MC4R,重组体能在MDCK细胞中表达。
- 王光川巴彩凤苏荣健张轶博赵微宋慧娟武洁
- 关键词：真核表达载体MDCK细胞
- 附红细胞体病研究综述被引量：15
- 2007年
- 对附红细胞体病(Eperythrozoonosis)的病原形态特征、病原分类、发病机制、流行病学、体外培养、治疗及预防等研究成果进行了综述,以期对该病的病原学及防治研究提供参考。
- 冯会权巴彩凤苏玉虹苏荣健聂茹赵微
- 关键词：附红细胞体病附红细胞体人兽共患病
- 猪新基因CFL2真核表达载体的构建及在C2C12细胞中的瞬时表达被引量：1
- 2008年
- 从猪的股二头肌中提取总RNA,利用RT-PCR技术从猪骨骼肌中获得CFL2基因的编码区序列,T-A克隆至PMD-18T载体,经HindⅢ和XhoⅠ酶切后定向克隆至真核表达载体pCDNA3.1(+)中。获得的重组质粒pCDNA3.1(+)/CFL2用限制性内切酶酶切分析和DNA测序分析鉴定,并经脂质体瞬时转染C2C12细胞,最后利用PCR检测转基因细胞中CFL2基因的存在及其表达情况。结果显示:猪CFL2基因已克隆到真核表达载体pCDNA3.1(+)中,转染的C2C12细胞中检测到细胞内较高量CFL2的表达。pCDNA3.1(+)/CFL2真核表达载体的成功构建,为深入研究CFL2基因在猪肌肉细胞中的功能奠定基础,为猪肉质品质的改良提供了新的思路。
- 赵微苏玉虹巴彩凤苏荣健宋慧娟
- 关键词：真核表达载体PCDNA3.1(+)C2C12
- 猪附红细胞体病PCR诊断方法的建立及应用被引量：3
- 2009年
- 目的建立一种新型的猪附红细胞体病PCR诊断方法。方法根据猪附红细胞体部分CDS基因序列(AJ504999)设计引物,建立一种新的猪附红细胞体病PCR诊断方法。通过实验室染毒实验,建立感染猪附红细胞体病的小鼠模型,并应用研制的PCR方法进行实验室验证。应用建立的PCR诊断方法对辽宁5个城市的385个猪样本进行猪附红细胞体病流行病学情况调查,确定猪附红细胞体病的感染率。结果成功建立猪附红细胞体病PCR诊断方法,通过染毒模型验证了该方法具有快速、特异性强、敏感性高的特点。并估计出辽宁省猪群中附红细胞体总体感染率95%的可信区间为(82.50%,89.44%)。结论本研究建立的猪附红细胞体病PCR诊断方法及临床应用,为辽宁地区乃至全国附红细胞体病的防治工作提供了科学理论数据。
- 巴彩凤李久纯冯会权赵微
- 关键词：猪附红细胞体病PCR动物模型感染率
- 东北荷包猪FUT1基因多态性及其与产仔性能的关联分析被引量：8
- 2010年
- [目的]分析荷包猪Fun基因多态性及其与产仔性能的关系，为荷包猪资源保存、品种选育和开发利用提供参考依据。[方法]提取猪耳组织DNA，采用PCR-RFLP技术分析荷包猪FE们的基因多态性，并分析其基因型与产仔数的相关关系。[结果]用胁丽I限制性内切酶对扩增片段进行酶切，检测到GG、AG和AA3种基因型。抗性纯合子AA型个体1～5各胎次产仔数均值均高于AG和GG型个体，且第3胎和第4胎的产仔数均值显著高于AG型和GG型个体。[结论]荷包猪Fun基因具有多态性，其基因频率与国外杜洛克基本一致，与国外长白、大白和两者杂交猪差别较大。AA基因型对产仔性能而言是有益基因型。
- 朱弘焱赵颂赵微苏玉虹
- 关键词：荷包猪FUT1基因多态性产仔性能
- 猪CFL2b/荧光蛋白融合基因在小鼠成肌细胞中的表达与定位
- 2008年
- [目的]了解猪CFL2b基因在成肌细胞中的表达与定位。[方法]用RT-PCR方法扩增得到猪CFL2b基因,连接到T载体上,双酶切后通过定向克隆将其与真核表达载体pEGFP-N1的绿色荧光蛋白基因融合,构建CFL2b-荧光蛋白融合基因表达载体。然后经真核表达质粒-脂质体介导,导入C2C12细胞系。[结果]荧光显微镜观察显示:在空白载体pEGFP-N1转染的C2C12细胞中荧光布满整个细胞,而在转染阳性载体pEGFP-N1-CFL2b的C2C12细胞中荧光主要聚集在细胞质的肌动蛋白丝。表明转染的C2C12细胞系能够高效表达猪CFL2b蛋白,猪CFL2b基因表达的蛋白定位于细胞质中。[结论]该研究为CFL2b基因的功能及该基因与猪肉质性状的相关性的研究奠定了基础。
- 赵微李久纯巴彩凤苏荣健苏玉虹
- 关键词：C2C12细胞
