迟伟玲
- 作品数：20 被引量：43H指数：4
- 供职机构：山东省千佛山医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金山东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 慢病毒介导的鸟氨酸脱羧酶基因沉默抑制结直肠癌细胞生长的体外和体内研究
- 鸟氨酸脱羧酶(ODC)是多胺生物合成途径中的第一个限速酶,它催化鸟氨酸转变为腐胺。腐胺、精脒和精胺统称多胺,是细胞内主要的阳离子,一直以来,人们认为多胺与正常及异常增生细胞的快速增殖有关。ODC活性的增高是细胞增殖过程中...
- 迟伟玲
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶慢病毒载体基因沉默结直肠癌
- 慢病毒shRNA表达载体介导人肿瘤细胞基因稳定沉默的影响因素被引量：5
- 2007年
- 目的:探讨慢病毒载体介导人肿瘤细胞RNA干扰的影响因素。方法:用介导RNAi的慢病毒载体Lenti6-HIF1α和Lenti6-HIF1β分别转导人肿瘤细胞系Hela、SPCA1和A549,筛选靶基因稳定表达沉默的细胞株。病毒RNA分子拷贝数和靶基因mRNA水平用实时定量RT-PCR确定。结果:针对不同靶基因的慢病毒转导肿瘤细胞的效率与靶基因无关、存在细胞类型特异性。8h内病毒转导效率与吸附时间呈正关,12h后继续延长吸附时间不能提高转导效率。对靶基因表达的特异性抑制效果与病毒量呈正相关。靶基因稳定沉默细胞株的RNAi效果与细胞类型无关,与靶细胞基因组整合的shRNA表达结构的拷贝数呈正相关。结论:慢病毒载体介导人肿瘤细胞RNA干扰,短期基因抑制效果取决于细胞类型、病毒量和病毒的吸附时间,稳定基因沉默效果与病毒整合到靶细胞基因组的拷贝数相关,筛选稳定基因沉默细胞株时,应尽可能提高病毒量以提高病毒整合的拷贝数。
- 宋现让迟伟玲魏玲王兴武柳永蕾宋宝
- 关键词：慢病毒载体RNA干扰
- 人ODC基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定被引量：3
- 2005年
- 目的:构建人鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因的RNAi慢病毒载体。方法:根据ODC mRNA序列, 选择3个19nts的靶序列,设计并合成包含各正反义靶序列的互补DNA链,退火后插入pSuper载体的H1RNA启动子后产生pRiODC,将其中的ODC shRNA表达结构酶切插入慢病毒转移质粒pHR' CMVGFP,产生pHRiODC/GFP。与△R8.2和pCMVVSVG共转染HEK293T细胞,包装产生慢病毒,分别采用转导HEK293T细胞和Real-Time RT-PCR的方法测定慢病毒的功能滴度和病毒RNA分子拷贝数。结果:酶切和测序证实,pRiODC质粒构建正确,产生能同时表达GFP和转录产生ODC shRNA的慢病毒转移质粒PHRiODC/GFP,未浓缩及浓缩病毒悬液的功能滴度分别为6.3×104 TU/ml和7×106TU/ml, RNA拷贝数分别为3.4×108copies/ml和3.6×1010copies/ml。结论:成功构建人ODC基因RNAi慢病毒载体,为通过阻断ODC基因表达治疗恶性肿瘤奠定了基础。
- 迟伟玲刘贤锡宋现让李文通
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶基因疗法逆转录病毒RNA干扰
- 前列腺特异抗原(PSA)启动子组织特异性鉴定
- 2006年
- 目的构建前列腺特异的PGL3-LUC表达载体,观察报告基因的表达情况以验证其组织特异性。方法经过改造的高效前列腺特异抗原(PSA)启动子全序列经酶切亚克隆入pGL3-basic荧光素酶报告基因载体,重组载体pGL3-psa转染前列腺癌细胞(Du-145)和肠癌细胞(HT-29),并应用双荧光素酶检测系统检测荧光素酶活性,排除转染过程误差。结果转染重组载体pGL3-psa诱导前列腺癌细胞荧光素酶活性明显增强,而空载体pGL3-basic和肠癌细胞的荧光素酶表达处于基础水平,比较差异有显著性意义P<0.05。结论构建的经过改造的高效前列腺特异抗原(PSA)启动子的荧光素酶报告基因载体,转染前列腺癌细胞后能够表达荧光素酶蛋白,具有组织特异性。
- 李玮彭翠平刘贤锡翟丽红魏守水迟伟玲刘园园
- 关键词：前列腺特异抗原启动子过程误差亚克隆全序列
- 人HIF-1α基因沉默肺癌细胞株的筛选及鉴定
- 2006年
- 宋现让迟伟玲柳永蕾魏玲王兴武宋宝
- 关键词：肺癌RNA干扰慢病毒乏氧诱导因子
- 等位基因3′末端碱基特异性引物定量PCR检测人脂联素基因单核苷酸多态性被引量：2
- 2007年
- 目的建立非探针标记荧光定量PCR的SNP检测技术,分析人脂联素(APM1)基因单核苷酸多态性(SNP)与Ⅱ型糖尿病(T2DM)的关系。方法设计3′末端碱基特异性引物,进行定量PCR反应,通过比较各对引物的扩增效率判断基因型,并进行测序验证。利用该方法确定20例T2DM、24例肥胖及28例同年龄组正常人APM1基因的45位和276位碱基的SNP。结果该方法能有效地区分不同的基因型,与测序结果符合率100%。APM1基因45位SNP与T2DM相关(P<0.05),基因型为TT纯合子者发生T2DM的危险性是G/T和GG者的3倍;而肥胖与APM1基因45和276位点SNP无关。结论等位基因3′末端碱基特异性引物定量PCR可以用于基因SNP检测。APM1基因45位碱基的SNP与T2DM发生有关。
- 宋现让王淑芳迟伟玲
- 关键词：人脂联素基因单核苷酸多态性
- 鸟氨酸脱羧酶基因沉默抑制宫颈癌细胞生长的研究被引量：5
- 2007年
- 目的:探讨鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因作为宫颈癌治疗靶基因的可行性。方法:采用慢病毒介导的RNA干扰技术,沉默Hela细胞ODC基因,建立ODC稳定沉默的细胞系Hela/ODC,用定量RT-PCR和免疫印迹检测ODC的表达水平。用MTT实验、克隆形成实验、细胞倍增时间和细胞周期分析评价ODC基因沉默对Hela细胞生长的影响。结果:Hela/ODC的ODC mRNA和蛋白质表达水平均明显下降,mRNA水平下调93.4%。Hela/ODC的增殖受到明显抑制,细胞倍增时间从22.3h延长到32.0h,细胞周期分析S期细胞增加,G0/G1期和G2/M期细胞显著减少。结论:慢病毒载体介导RNA干扰能够稳定沉默ODC基因表达,从而成功抑制肿瘤细胞的生长,表明以ODC基因为靶基因进行宫颈癌的基因治疗是可行的。
- 迟伟玲宋现让刘贤锡
- 关键词：宫颈肿瘤鸟氨酸脱羧酶基因沉默肿瘤细胞
- 趋化因子受体CCR4、CCR5在系统性红斑狼疮患者外周血CD4^+T淋巴细胞上的表达及其意义被引量：1
- 2008年
- 目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者趋化因子受体CCR4和CCR5在外周血淋巴细胞表面的表达及其意义。方法流式细胞仪计数法对113例SLE患者和50例健康体检者外周血淋巴细胞表面CCR4和CCR5的表达情况进行检测,分析及评价SLE患者外周血淋巴细胞中CCR4+和CCR5+T淋巴细胞的百分数。结果非狼疮性肾炎(nLN)SLE组外周血CCR4+CD4+T%明显高于健康对照组(P<0.01);狼疮性肾炎SLE组外周血CCR4+CD4+T%明显高于健康对照组(P<0.001);LNSLE组外周血CCR4+CD4+T%明显高于nLNSLE组(P<0.01);nLNSLE组外周血CCR5+CD4+T%高于健康对照组(P<0.05);LNSLE组外周血CCR5+CD4+T%明显高于健康对照组(P<0.001);LNSLE组外周血CCR5+CD4+T%明显高于nLNSLE组(P<0.01)。SLE活动组血清CCR4+CD4+T%与CCR5+CD4+T%较非活动组和对照组明显升高(P<0.01);活动性狼疮性肾炎(LN)与活动性无肾损伤组及对照组比较,其差异具有显著统计学意义(P<0.01)。nLNSLE组外周血CCR4+CD4+T%与CCR5+CD4+T%有相关性(r=0.619,P<0.05);LNSLE组外周血CCR4+CD4+T%与CCR5+CD4+T%有明显相关性(r=0.68,P<0.01);血清CCR4+CD4+T%水平随着SLE疾病活动水平明显升高,与总的系统性红斑狼疮疾病活动性指数(SLEDAI)评分密切相关(r=0.6382,P<0.001);与SLEDAI肾评分亦密切相关(r=0.6980,P<0.001);而CCR5+CD4+T%与疾病活动度不相关(r=0.16,P>0.05)。结论以上结果表明CCR4和CCR5在T细胞趋化至病变部位的过程中可能发挥重要作用,CCR4+CD4+T%与CCR5+CD4+T%可能在肾损伤中起着十分重要的作用,血清CCR4+CD4+T%、CCR5+CD4+T%与SLE疾病活动密切相关,可作为SLE疾病活动,尤其是监测狼疮性肾损伤的重要指标。
- 程慧玲刘建伟马万山迟伟玲
- 关键词：红斑狼疮受体CCR4受体CCR5
- 雄激素与培养前列腺细胞中鸟氨酸脱羧酶基因表达的关系被引量：1
- 1998年
- 为研究雄激素致前列腺良性增生的分子机理，分离培养了人胎儿前列腺间质细胞，并给予ＤＨＴ（１～１００００μｇ／Ｌ）刺激，ＭＴＴ法测定。结果显示，ＤＨＴ对该细胞具有刺激增殖作用，其最适刺激浓度为１０００μｇ／Ｌ。斑点杂交结果显示，鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）ｍＲＮＡ的表达在ＤＨＴ（１０００μｇ／Ｌ）刺激６ｈ时开始升高，２４ｈ时达高峰，３０ｈ时有所降低。提示雄激素刺激前列腺间质细胞增殖的分子机理部分是通过刺激前列腺间质细胞的ＯＤＣ基因表达来完成的。
- 胡海燕刘贤锡迟伟玲卞继峰王磊刘师莲林毓琴
- 关键词：雄激素鸟氨酸脱羧酶基因表达前列腺增生
- EGF对前列腺细胞中鸟氨酸脱羧酶基因表达的调控
- 2002年
- 目的 :探讨EGF诱导前列腺增殖的分子机理。方法 :以MTT法测定不同浓度表皮生长因子(EGF)对前列腺癌细胞PC 3的促增殖作用 ;以最适浓度EGF(5 0ng/ml)刺激该细胞 ,分别于 0、1、3、6、12、2 4h提取总RNA ,用斑点杂交法分析测定各组细胞中ODCmRNA丰度 ;用免疫组化及流式细胞术两种方法检测EGF刺激细胞后ODC蛋白表达量的变化。结果 :①EGF能促进PC 3细胞的增殖 ,而且随着EGF浓度的升高 ,细胞增殖活性增加 ;②斑点杂交显示 ,EGF刺激细胞后 3h ,ODCmRNA开始明显升高 ,12h达高峰 (约为 0h的 3.6 6倍 ) ,至 2 4h时有所降低 ;③免疫组化及流式细胞术检测显示 ,EGF刺激细胞 3d后ODC蛋白阳性细胞表达率明显升高。结论
- 刘贤锡迟伟玲刘师莲胡海燕刘传华耿昭
- 关键词：表皮生长因子鸟氨酸脱羧酶基因表达前列腺
