陈敏霞
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：北京大学人民医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- TIMP-1基因缄默削弱SH-SY5Y细胞的增殖潜能并诱导其凋亡增强
- 2008年
- 前期研究发现,人基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1)在唐氏综合征(Down’s syndrome,DS)胎儿脑组织内表达下调.为了探讨TIMP-1表达下调参与DS脑病变发生的可能机制,本研究以人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)为模型,观察TIMP-1基因沉默后对其增殖和凋亡的影响.应用LipofectaminTM2000将TIMP-1特异性短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)导入SH-SY5Y细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定表达TIMP-1-shRNA细胞株;应用RT-PCR、real-time PCR和Western印迹对干扰效率进行鉴定:与SH-SY5Y细胞相比,无论在mRNA水平还是蛋白水平,SH-SY5Y-TIMP-1-shRNA细胞中TIMP-1的表达显著下调(下调率接近100%).结果显示,已成功构建了TIMP-1基因沉默的SH-SY5Y细胞模型.在此基础上,通过MTT检测发现,TIMP-1基因沉默后SH-SY5Y细胞增殖减慢;流式细胞仪和荧光显微镜凋亡检测显示,TIMP-1基因沉默后SH-SY5Y细胞凋亡明显增加.这些研究结果表明,TIMP-1基因沉默能削弱SH-SY5Y细胞的增殖能力并增强SH-SY5Y的凋亡效应,提示TIMP-1可能是通过影响神经细胞的增殖和凋亡参与DS智力低下的发病过程.
- 陈敏霞郁卫东梁蓉杨丽君晁爽赵贺华郭静竹
- 关键词：TIMP-1基因沉默增殖凋亡SH-SY5Y细胞
- 受体相互作用蛋白140敲低对小鼠小胶质瘤细胞增殖的影响被引量：3
- 2008年
- 目的探讨受体相互作用蛋白（RIP）140基因敲低对小鼠小胶质瘤细胞（BV-2）增殖的影响。方法用脂质体转染方法将RIP140-短发夹RNA（shRNA）质粒导入BV-2细胞，用嘌呤霉素筛选稳定表达RIP140-shRNA的细胞系，用实时定量PCR和Western印迹法检测RIP140敲低的效果，用四甲基偶氮唑蓝（MTY）法检测RIP140敲低对细胞增殖的影响。结果成功构建稳定表达RIP140-shRNA的BV-2-71674和BV-2-71080；与BV-2细胞相比，BV-2-71674和BV-2-71080细胞中RIP140的表达无论mRNA水平还是蛋白质水平均明显低，下调率（mRNA）分别为73％和75％（均P〈0．01）；MTT法检测显示，BV-2细胞在24、48、72、96h 4个时间点增殖率分别为3．03±0．01、7．36±0．08、14．15±0．25、23．35±0．09，BV-2-71674细胞则分别为2．15±0．03、6．43±0．08、11．77±0．31、18．47±0．04，BV-2-71080细胞分别为1．77±0．03、4．74±0．25、10．03±0．02、17．66±0．21；BV-2-71674和BV-2-71080细胞增殖率均明显低于BV-2细胞，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论RIP140敲低可以抑制BV-2细胞的增殖。
- 晁爽郁卫东杜军保曾超美梁蓉杨丽君陈敏霞赵贺华郭静竹
- 关键词：神经胶质瘤细胞增殖
- 唐氏综合征消减杂交文库的构建及差异表达基因筛选
- 2007年
- 目的:分离和鉴定唐氏综合征胎儿与正常胎儿脑组织差异表达的基因片断,为进一步认识DS脑病变发生的分子机制奠定基础。方法:利用抑制性消减杂交的方法对DS胎儿及正常胎儿脑组织样品进行正向消减杂交,利用斑点杂交对所获的基因片断进行进一步的验证。结果:从构建的消减杂交库中随机挑取80个阳性克隆,经点杂交鉴定获得13个代表了在DS胎儿脑组织特异高表达基因片断,其中包括转录因子、神经退行性变相关基因、能量代谢相关基因及神经发育相关基因。结论:所筛选出来的基因中部分与其他神经系统的疾病密切相关,或者具有潜在的致凋亡功能,可能参与了DS的脑病变的发生。
- 张峰郁卫东梁蓉杨丽君陈敏霞郭静竹
- 关键词：唐氏综合征抑制性消减杂交21号染色体
