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猪瘟病毒E2蛋白酵母表达及其免疫活性研究被引量：1: 2020年; 猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,呈世界性分布,对养猪业危害严重。猪瘟病毒属于黄病毒科、瘟病毒属,在自然条件下只感染猪。E2蛋白是猪瘟病毒的重要结构蛋白,也是猪瘟病毒的主要保护性抗原。以猪瘟病毒E2蛋白胞外区基因为模板,构建毕赤酵母表达载体pPICZαA-E2,并通过电转获得毕赤酵母X-33阳性克隆,经SDS-PAGE、Western blot鉴定筛选出猪瘟病毒E2蛋白表达菌株。通过亲和层析技术纯化蛋白,并将蛋白免疫动物,进行免疫原性分析。结果表明,猪瘟病毒E2蛋白在毕赤酵母中成功分泌性表达,经纯化纯度达95%以上;动物试验显示,该蛋白具有良好的免疫原性,为猪瘟病毒亚单位疫苗及相关检测技术的开发奠定了基础。; 周稳金前跃陈晓丁培阳丁培阳王垚柴永笑张雨航周恩民郭军庆周恩民张改平; 关键词：猪瘟病毒 E2蛋白蛋白纯化免疫活性

略阳乌鸡肤色变异与FM突变的关联性分析被引量：4: 2014年; 20号染色体上2个基因组片段(Dup1和Dup2)的异常复制是引起乌鸡超黑素化性状的关键突变。本研究分析了Dup1、Dup2拷贝数与略阳乌鸡肤色性状的关联性,旨在阐明依据拷贝数对肤色性状提纯的可行性。30只略阳乌鸡和30只尼克鸡Dup1、Dup2拷贝数与胸、背和腿部肤色被测定。肤色性状用Hunter Lab色差仪测定,L值用于评价肤色乌黑程度;拷贝数用Real-time PCR检测。略阳乌鸡3个部位L值均显著低于尼克鸡(P<0.05),变异程度高于尼克鸡;同一品种不同部位间L值差异不显著(P>0.05);L值与Dup1(r=-0.135,P=0.478)、Dup2(r=0.098,P=0.607)拷贝数均不存在相关。研究表明略阳乌鸡L值测定结果与肤色视觉观察结果相一致,可以用作定量评价肤色乌黑程度的指标;FM突变在略阳乌鸡群体中存在,但无法用于肤色性状标记辅助选择。; 王哲鹏陈晓刘福柱刘瑞芳; 关键词：略阳乌鸡

略阳乌鸡绿壳蛋、玫瑰冠、乌皮性状遗传基础分析被引量：5: 2014年; 本研究旨在阐明略阳乌鸡绿壳、玫瑰冠和乌皮表型遗传基础,为略阳乌鸡上述性状的选育提供理论指导。本研究采用PCR和测序的方法,在略阳乌鸡群体中对引起绿壳、玫瑰冠和乌皮的性状突变进行检测。结果表明:在5只产深绿壳蛋的略阳乌鸡中存在EAV-HP插入,但在20只产浅绿壳蛋的略阳乌鸡中,仅在5只鸡中发现该插入;对17只带有玫瑰冠表型的略阳乌鸡进行检测,发现了引起玫瑰冠表型的R1基因,但并未发现另一个R2基因;对41只略阳乌鸡检测结果证实,在略阳乌鸡群体中存在引起乌皮性状的FM基因。结果提示,略阳乌鸡绿壳、玫瑰冠和乌皮表型的遗传基础与前人报道的结果一致,不支持略阳乌鸡群体存在平行进化(性状相同,遗传基础不同)的可能性。; 王哲鹏陈晓蒋志强梁肖伟李娜刘福柱; 关键词：绿壳蛋略阳乌鸡

略阳乌鸡肤色变异与FM突变的关联性分析: 略阳乌鸡肤色变异较大,这对其市场认可度产生了不利影响.20染色体上2个基因组片段(Dup1和Dup2)的异常复制是引起乌鸡超黑素化性状的关键突变(FM).本研究分析了Dup1、Dup2拷贝数与肤色性状的关联性,旨在阐明依...; 王哲鹏陈晓刘福柱刘瑞芳; 关键词：略阳乌鸡; 文献传递

新城疫病毒HN蛋白的酵母表达及其活性鉴定被引量：4: 2020年; 为了制备新城疫病毒(NDV)HN蛋白并研究其免疫原性,将优化的HN基因胞外区插入毕赤酵母表达载体pPICZαA中,构建毕赤酵母表达载体pPICZαA-HN,并将其电转入毕赤酵母X-33感受态中,经PCR鉴定得到阳性转化子,甲醇诱导表达后,经SDS-PAGE和Western blot鉴定筛选出目的蛋白表达菌株;通过对诱导剂含量、诱导时间、培养基初始pH值和诱导温度进行优化,研究最佳表达条件;采用镍柱亲和层析对目的蛋白进行纯化,并用SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA对目的蛋白进行鉴定;利用去糖基化酶PNGase F对目的蛋白进行处理,验证其糖基化修饰程度.结果显示,HN重组蛋白在毕赤酵母中成功表达,且在28℃ 条件下,培养基初始pH值为7.0,用0.5%甲醇诱导5 d,蛋白质表达量最高;通过镍柱亲和层析可获得纯度高于90%的重组蛋白;间接ELISA结果表明,重组蛋白活性良好;去糖基化试验验证了重组蛋白存在糖基化修饰.综上,利用毕赤酵母X-33成功表达了HN蛋白,且纯化产物纯度较高、活性良好,具有糖基化修饰.; 李旭锋王垚金前跃周稳柴永笑陈晓陈晓陈晓; 关键词：新城疫病毒 HN蛋白毕赤酵母蛋白质纯化

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陈晓