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陈樱: 作品数：151 被引量：259H指数：9; 供职机构：广西大学动物科学技术学院更多>>; 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金国家自然科学基金广西大学科研基金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生文化科学生物学更多>>

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猪肠病毒G型实时定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：2: 2020年; 为建立一种能够准确、快速地鉴别猪肠病毒G型的诊断方法,本研究参考猪肠病毒G型的3D基因序列设计1对特异性引物,扩增片段预计大小约为104 bp,将3D基因片段克隆到pMD18-T载体上的阳性重组质粒作为标准品,建立猪肠病毒G型的实时定量PCR检测方法,并应用到临床样品的检测。研究结果显示,该方法设计的引物具有高度的特异性;标准曲线的Cq值与质粒标准品模板在2.92×10^8copies/μL^2.92×10^2copies/μL范围内,呈良好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-4.023;组内与组间重复性试验显示变异系数很小,在0.26%~1.57%之间。该方法的最低检测限量可达2.92×10 copies/μL。使用本方法对2017-2019年广西部分地区的猪场临床腹泻粪便样品进行检测,猪肠病毒G型阳性检出率为18.42%,说明广西部分地区的猪场存在猪肠病毒G型的感染。本研究成功建立了猪肠病毒G型实时定量PCR检测方法,可用于猪肠病毒G型感染的临床检测。; 杨春杰米雪刘雪婷蹇慧刘芳陈樱韦祖樟黄伟坚欧阳康; 关键词：实时定量PCR

塞内卡病毒广西分离株的初步分离与鉴定被引量：1: 2022年; 为了确诊一例疑似SVA感染的临床病例,本试验将从广西地区某猪场母猪和肥育猪鼻及蹄部采集的出现典型水泡性病变的猪水泡液进行无菌处理后接种PK-15细胞,连续传代培养,通过细胞病变、RT-PCR扩增、基因序列测定、TCID_(50)和间接免疫荧光等方法对分离得到的病毒进行鉴定。结果显示:该病毒株在PK-15细胞上生长良好,可见明显细胞病变;接种PK-15细胞进行TCID_(50)测定,病毒滴度达到10^(-6.75)/mL;间接免疫荧光试验结果显示,接种第4代细胞培养物的BHK-21细胞出现特异的绿色荧光;扩增和测定了VP1基因序列后进行同源性及遗传进化分析,发现该毒株与Senecavirus病毒属中的病毒成员同源性最高,与之前2017年报道的广东分离株SVA-CH-GDYS02-2017和SVA-CH-GDLZ01-2017位于较近的进化分支内。以上结果表明,已成功从样品中分离到了SVA,且该毒株可以在PK-15和BHK-21细胞上进行增殖。本研究成功分离到一株SVA,为后续塞内卡病毒的诊断和疫苗研制提供试验材料。; 牛晨霞王豪农作荣全东群曾悦任同伟王玉旭王景隆刘畅陈樱欧阳康黄伟坚韦祖樟

广西猫杯状病毒全基因组序列测定及其遗传进化分析被引量：2: 2022年; 为了掌握广西猫杯状病毒(FCV)的流行情况及其变异规律。本研究于2018年3月至2019年9月采集疑似FCV鼻拭子59份,其中阳性检出率49.2%(29/59)。将阳性病料接种CRFK细胞,成功分离获得一株FCV毒株,命名为NN01-19。为深入了解其遗传进化规律和分子特征,本研究通过RT-PCR方法扩增获得该毒株的全基因组序列,并对其ORF2基因进行了遗传进化和序列分析。结果表明,NN01-19毒株基因组全长7709 bp,其中ORF2基因全长2010 bp。遗传进化分析发现该毒株与广西早期分离株GX01-13同属基因I群,但核苷酸和氨基酸同源性仅为77.9%和86.5%。其中,超变区(E区)抗原线性表位新增T448A、T450G、G451Q和T454S四个突变位点。重要的是,该区域还发生了V430T的突变,符合VS-FCV致病性氨基酸突变特点。本研究为深入了解FCV的流行特点及其变异规律提供了参考依据,同时也为今后防控FCV提供了重要的理论基础。; 丁仰保何剑桥刘林林余良政崔柏杨周华波韦祖樟欧阳康黄伟坚陈樱; 关键词：全基因组 ORF2基因遗传进化分析

水牛匈爱病毒结构蛋白VP1的截短表达及多克隆抗体的制备: 2023年; 为了制备水牛匈爱病毒(BufHuV)结构蛋白VP1截短基因的多克隆抗体,将病毒的VP1截短基因克隆至原核表达载体pET-32a(+)获得重组质粒pET-32a-BufHuV-VP1,重组质粒转化至BL21感受态细胞(DE3)后诱导表达,VP1截短蛋白的分子质量约为31.5 ku,主要以包涵体的形式表达。以纯化好的重组蛋白免疫昆明小鼠以制备多克隆抗体,通过Western-blot与IFA鉴定其特异性。结果显示,制备的小鼠多克隆抗体能与纯化的VP1重组截短蛋白和感染BufHuV的细胞表达的VP1特异性结合,表明多克隆抗体具有良好的反应原性和特异性。水牛匈爱病毒VP1截短重组蛋白及其多克隆抗体的成功制备为研究BufHuV致病机制、VP1蛋白功能以及血清学检测方法的建立提供了材料基础。; 邹延林张广欣罗宇航朱鑫玥刘黄豪莫筱可谢江王小玲陈樱欧阳康韦祖樟覃一峰潘艳黄伟坚; 关键词：结构蛋白原核表达多克隆抗体

一株猪瘟病毒的分离鉴定及E2基因遗传变异分析被引量：3: 2020年; 为分析广西猪瘟病毒(CSFV)遗传变异情况及其与疫苗株的差异,通过RT-PCR方法在猪瘟常规免疫猪场发病材料中检测到1份猪瘟病毒阳性的病料。将病料研磨、过滤后接种PK-15细胞,并在细胞上连续传代进行病毒的分离,通过RT-PCR和间接免疫荧光(IFA)方法鉴定,成功分离到了1株猪瘟病毒,命名为CSFV GXNN1896株。对GXNN1896株E2基因进行扩增、克隆测序和序列比对,结果表明该毒株E2基因与HCLV株、Shimen株等参考毒株E2基因的核苷酸序列同源性为81.9%~97.5%,氨基酸相似度为87.7%~96.8%,E2基因结构域的B、C亚区分别在12个和19个氨基酸的变异,与我国2.1 d亚型哈尔滨分离株NK150425株(GenBank;MF150643.1)同源性最高(96.8%),与德国疫苗毒株Reims(GenBank;AY259122.1)同源性最低(87.7%),与中国猪瘟兔化弱毒疫苗株C株(GenBank;Z46258.1)相比有46个氨基酸的突变。遗传进化树分析发现GXNN1896株的E2基因与参考疫苗毒株遗传距离较远,且位于2.1 d亚群,属于野毒株。说明广西地区流行CSFV毒株逐渐往偏离疫苗株的方向发展。; 刘畅曾悦王豪颜顺通黄伟坚陈樱欧阳康韦祖樟; 关键词：猪瘟病毒

猫常见病毒多重PCR快速检测试剂盒及其引物组: 本发明公开了猫常见病毒多重PCR快速检测引物组，包括针对FCV、FPV、FIV、FHV‑1四种猫呼吸道及肠道病毒的四对PCR引物，它们分别具有序列表SEQ.ID.NO.1至SEQ.ID.NO.8的碱基序列。据此，发明人还...; 陈樱郭嘉宁周华波郭金凡曾昊韦祖樟欧阳康黄伟坚; 文献传递

一例猫肠梗阻病例的诊断与治疗: 2024年; 肠梗阻是一种临床上较为常见的消化系统疾病,多为犬猫喜爱衔咬玩耍误食异物或异食癖导致。就一例猫吞食软性异物所致消化道梗阻的病例,阐述其诊断与治疗方案,为提高猫肠梗阻的临床诊断及治疗水平提供参考。; 郭昕怡周华波黄满陈建材孙凡媛陈樱; 关键词：肠梗阻消化道异物

犬源H9N2亚型流感病毒的遗传进化及其致病性分析: 2022年; 【目的】明确犬源H9N2亚型流感病毒的分子变异特征及致病性,为今后探究流感病毒的禽—犬跨种传播机制提供科学依据。【方法】从流浪犬中分离H9N2亚型流感病毒,利用RT-PCR扩增其8个基因节段进行BLAST同源比对,然后基于国内外的22株参考毒株进行遗传进化分析,并通过小鼠滴鼻感染试验评估分离毒株的致病性。【结果】从采集的393份犬鼻拭子样品中分离获得1株H9N2亚型流感病毒,命名为A/canine/Guangxi/LZ11/2018(简写为LZ11)。分离毒株LZ11为三重组毒株,其中,HA、NA和NS基因属于BJ/94类谱系,PB2和M基因属于G1类谱系,PB1、PA和NP基因属于F/98类谱系;病毒基因组成属于近年我国广泛流行的S基因型。分离毒株LZ11的HA蛋白在第324~331位存在1个裂解位点(PSRSSR↓GL),符合低致病性流感病毒的特征;HA蛋白还出现226Q→L突变,具有优先结合人类α-2,6唾液酸受体的能力;NA蛋白在119E、151D、276E、292R和294N未发生突变,但M2蛋白出现31S→N突变,说明分离毒株LZ11仍对神经氨酸酶抑制剂敏感,但已对金刚烷胺类药物产生耐药性;聚合酶蛋白出现多个哺乳动物适应性相关的氨基酸位点突变,包括PB2蛋白的292I→V、PB1蛋白的368I→V及PA蛋白的409S→N和356K→R。分离毒株LZ11虽然未引起小鼠出现典型的临床症状,但可在肺脏和上鼻窦有效复制,病毒滴度分别为3.82和5.98 lg PFU/mL。【结论】分离获得的犬源H9N2亚型流感病毒属于近年流行的S基因型,其8个基因节段分属于3种谱系(BJ/94类谱系、G1类谱系和F/98类谱系),且存在多个哺乳动物适应性相关氨基酸位点突变,具备感染哺乳动物的分子特征,可在小鼠脏器内有效复制。鉴于人类与宠物犬的密切关系,今后应加强对犬源H9N2亚型流感病毒的监测与防控。; 曾昊何剑桥崔柏杨郭嘉宁郭金凡周华波韦祖樟欧阳康黄伟坚陈樱; 关键词：流感病毒 H9N2亚型遗传进化

一例猫传染性腹膜炎的诊治被引量：1: 2020年; 猫传染性腹膜炎(Feline Infectious Peritionitis,FIP)是猫冠状病毒(Feline Coronavirus,FCoV)感染引起的一种发病率、死亡率较高的慢性、渐进性、致死性传染病[1]。该病在幼龄猫经常突发,有较高的传染性和致死率,据研究表明可通过粪便传播。4岁以下的猫多见FIP群体发病,症状多为精神萎靡、厌食和消瘦,发烧的特点是黄昏时体温较高,入夜后会缓慢恢复正常。FIP后期症状分成干湿两型,第一种是湿型,患猫多于发病2个月内死亡,胸腹腔有高蛋白的渗出液。; 黄满黄崇强周华波刘林林陈建材张心琴余星莹李修文陈樱; 关键词：胸腹腔群体发病渗出液致死率 FIP

猪丁型冠状病毒S基因的原核表达及多克隆抗体的制备: 2023年; 纤突(Spike,S)蛋白是猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)诱导机体产生抗体的主要抗原,为制备其重组蛋白和多克隆抗体,本实验对分离株CHN/20GXNN-1/2020的S基因进行序列分析,选择抗原指数较高的b区S1b,克隆至表达载体pET-32a进行原核表达,重组蛋白S1b主要以包涵体形式表达,大小约为34.1 kDa。利用Ni-NTA琼脂糖树脂纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。通过间接ELISA测定多克隆抗体的效价高于1∶128000,Western blot和IFA均证明其可以与病毒S蛋白特异性结合。本研究制备的多克隆抗体特异性良好,为进一步研发PDCoV的检测方法和研究S蛋白的功能奠定了基础。; 张政秦秋英洪大林覃先锦樊柳忻刘科勉陈樱韦祖樟韦祖樟欧阳康; 关键词：S基因原核表达多克隆抗体

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