陈燕 作品数:12 被引量:130 H指数:4 供职机构: 中国科学院生物物理研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 更多>>
胶质细胞原神经营养因子研究进展 被引量:4 1996年 叙述了新近纯化的胶质细胞源神经营养因子(GDNF)的生物功能及其在鼠胚中的分布,着重介绍了该因子对损伤的多巴胺能神经元及运动神经元促进存活。 陈燕关键词:胶质细胞 神经营养因子 神经活动 胶质细胞源神经营养因子基因克隆及产物纯化 被引量:1 1996年 用PCR方法从人基因组DNA中扩增出胶质细胞源神经营养因子(GDNF)的编码序列,使它在E.coli中表达并纯化了重组GDNF. 陈燕 张瑛 李金照 邓巍 夏另朝 邱蓉关键词:胶质细胞 神经营养因子 基因克隆 提纯 神经营养因子GDNF编码顺序的克隆及表达产物的纯化 1998年 根据基因库中的顺序,设计了胶质细胞源神经营养因子(GDNF)基因的PCR引物,以此从人基因组DNA中扩增并克隆了GDNF的编码序列,经DNA测序确认后,该片段克隆到表达质粒pET-3a中,转化大肠杆菌BL21(DE3).培养的重组菌经IPTG诱导,在T7启动子调控下表达出hGDNF蛋白.经电泳分析表明GDNF主要存在于细菌包涵体中.从培养菌中制备包涵体,经充分洗涤,溶解于含8mol/L尿素的变性缓冲液中.经SP-Sepharose柱层析分离,梯度洗脱,以15%SDS-PAGE检查含GDNF的部分.将含单体GDNF部分进行复性,再次用SP-Sepharose离子柱分离同源二体GDNF.最后经SDS-PAGE制备电泳纯化,纯度大于95%.经N端测序表明序列正确.经测定,每升培养菌可得约10mg纯化的GDNF. 陈燕 张瑛 李金照 邓巍 邓巍 邱蓉关键词:神经营养因子 神经元的突触可塑性与学习和记忆 被引量:79 2008年 大量研究表明,神经元的突触可塑性包括功能可塑性和结构可塑性,与学习和记忆密切相关.最近,在经过训练的动物海马区,记录到了学习诱导的长时程增强(long term potentiation,LTP),如果用激酶抑制剂阻断晚期LTP,就会使大鼠丧失训练形成的记忆.这些结果指出,LTP可能是形成记忆的分子基础.因此,进一步研究哺乳动物脑内突触可塑性的分子机制,对揭示学习和记忆的神经基础有重要意义.此外,在精神迟滞性疾病和神经退行性疾病患者脑内记录到异常的LTP,并发现神经元的树突棘数量减少,形态上产生畸变或萎缩,同时发现,产生突变的基因大多编码调节突触可塑性的信号通路蛋白,故突触可塑性研究也将促进精神和神经疾病的预防和治疗.综述了突触可塑性研究的最新进展,并展望了其发展前景. 陈燕关键词:记忆 外源基因在蛙神经元中的表达 被引量:1 1997年 含 β 半乳糖苷酶基因的真核表达载体DNA ,直接注射到视神经切断或正常的黑斑蛙的视网膜中 .注射 2周后 ,观察到蛙视网膜神经细胞仍然有转染基因表达 ,这种基因转染对神经元的类型没有选择性 .被转染神经元主要局限于注射点周围 .蛙视神经切断后 。 夏另朝 李金照 陈燕 邱蓉 张瑛 邓巍关键词:基因转染 基因表达 外源基因 神经元 脑髓——成脑中多能性神经干细胞存在的区域 被引量:9 2000年 近来大量研究表明成年哺乳动物的脑中存在着具有增殖和分化潜能的多能性神经干细胞 .含有这些神经干细胞的脑组织 ,由于它与造血的骨髓有许多共性 ,而称之为“脑髓” .研究成体脑中神经细胞的新生是神经科学中十分重要的领域 .深入的研究将会促进利用成体脑中增殖神经元的迁移以及胚胎干细胞的移植来治疗神经退行性疾病 . 陈燕关键词:神经干细胞 神经退行性疾病 脑髓 脑源神经营养因子基因转染神经断端促进切断坐骨神经再生 被引量:14 1997年 为了研究体内表达的脑源神经营养因子(Brain-derivedNeurotrphicfactor,BDNF)对脊髓运动神经元存活及切断神经再生的作用,我们将人BDNFcDNA克隆到真核表达载体pCB6中,使BDNF基因在CMV启动子控制下表达。在雏鸡出生后3小时内及第二天直接将pCB-BDNFcDNA·lipofectin混合物注射到坐骨神经预切断位点附近肌肉内。第二天切断坐骨神经,神经切断10天后进行实验检测,观察到,BDNFcDNA转染阻止了切断神经一侧的腰脊髓内(L4-L6)运动神经元的大量死亡。并显著的促进了切断坐骨神经的再生。这些结果表明直接注射含BDNFcDNA的质粒对损伤的神经进行基因治疗,具有良好的前景;lipofectin介导重组质粒进行基因转染是导入外源基因到体内的一个可行方法。 李金照 陈燕 夏另朝 邱蓉 张瑛 邓巍关键词:神经营养因子 基因治疗 坐骨神经损伤 人脑源性神经营养因子基因表达 被引量:4 1998年 用聚合酶链式反应(PCR)从人基因组DNA中扩增了人脑源性神经营养因子(hBDNF)cDNA和hBDNF成熟蛋白编码片段,分别克隆到pUC18中.经测序确认两个插入片段序列正确.hBDNFcDNA在CMV启动子控制下在NIH/3T3细胞中表达,用RTPCR检测转染细胞确有BDNFmRNA存在.BDNF成熟蛋白编码序列在T7启动子控制下在E.coli中表达,SDSPAGE表明,BDNF得到表达,以包涵体形式存在. 陈燕 张瑛 李金照 邓巍 夏另朝 邱蓉关键词:PCR 基因表达 人胰岛素原基因在大肠杆菌中高效外分泌表达 被引量:10 1995年 将胰岛素原基因融合到金色葡萄球菌蛋白A的基因上,构建成大肠杆菌中基因融合的外分泌表达载体。它能高效表达且有效地分泌表达产物。利用亲和层析能方便地从培养液中分离出融合蛋白。融合蛋白经CNBr裂解后,经反相HPLC分析,分离得到具有天然结构的胰岛素原并进行了鉴定。 陈燕 李金照 夏令朝 张瑛 李强关键词:胰岛素 大肠杆菌 胶质细胞源神经营养因子cDNA全序列的克隆及其生物学功能的研究 被引量:3 1999年 为了研究GDNF在神经系统中的生物学功能,通过RT-PCR方法从大鼠睾丸总RNA中扩增出GDNFcDNA全序列,序列分析表明与GenBank中的顺序完全相同.将GDNFcDNA以非融合方式连接在真核表达载体pEGFP-NⅠ的绿色荧光蛋白的上游,在CMV启动子控制下表达.通过绿色荧光蛋白报告基因的表达表明GDNFcDNA能在真核细胞HeLa中很好表达.采用裸DNA转染方法研究GDNF对损伤的坐骨神经的修复作用,在雏鸡出生后3h切断其右侧坐骨神经,将pEGFP-GDNF与Lipofectin的混合物注射到坐骨神经切断位点附近肌肉内,5d后追补一次.20d后进行实验检测,观察到GDNFcDNA的转染阻止了切断神经侧的腰脊髓内[L4-L6]运动神经元的大量死亡,并显著促进了切断坐骨神经的再生. 段峰海 张瑛 夏另朝 邱蓉 邓巍 李金照 陈燕关键词:GDNF 坐骨神经 CDNA