以商业果胶为原料依次采用酸水解、膜分离、酶水解和离子交换色谱分离方法制备具有不同分子质量及结构特征的果胶片段。将果胶一次或分次加入1.5 mol/L HCl溶液中,配制成240 g/L的溶液,于80℃下水解6 h,可分别得到分子质量250 k^270 k Da的均一半乳糖醛酸区(homogalacturonan region,HG区)大片段和分子质量约为30 k Da的鼠李半乳糖醛酸聚糖区(rhamnogalacturonan region,RG区)小片段,同时酸水解产物酯化度从原料的61%降为10%;水解液中和后用10 k Da超滤膜脱盐,之后用商业果胶酶Pectinex Ultra SP-L酶解,获得分子质量约70 k Da的果胶多糖片段,所得酶解液再经过DEAE Sepharose Fast Flow弱阴离子交换柱,依次以纯水、0.05~1.0 mol/L Na Cl溶液洗脱,得到果胶片段样品MCP-1,MCP-2,MCP-3,MCP-4,相应的峰位分子质量分别为12.39 k Da,125.33 k Da,146.49 k Da和193.31 k Da,单糖组成分析结果显示样品中半乳糖醛酸含量依次上升,即MCP-1中RG区含量最高,而MCP-4中HG区含量最高。
选取水蜜桃、油桃、蟠桃及黄桃4种桃为原料,以ZipTipC18微量层析柱为纯化工具快速分离纯化果皮及果肉中的桃过敏原蛋白Pru p 3,并利用液相色谱-串联质谱对其进行鉴定。结果表明,该纯化方法获得的产物为桃过敏原蛋白Pru p 3,蛋白纯度为95%。该方法为桃过敏原蛋白Pru p 3的研究提供了技术支撑。
