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CD4^+CD25^+调节性T细胞作用机制的双模式被引量：10: 2006年; CD4+CD25+调节性T细胞是具有免疫抑制功能的细胞群,在多种生理病理过程中发挥了重要作用。它们的作用机制主要包括细胞-细胞接触依赖和可溶性细胞因子介导两种抑制模式。由于CD4+CD25+调节性T细胞的抑制机制复杂,争议较大,进一步阐明它们的作用机制将有利于多种免疫相关疾病的防治。; 高波熊思东; 关键词：CD4^+CD25^+调节性T细胞双模式

基于表位多肽的抗TRIM22抗体的制备及其初步应用被引量：1: 2008年; 目的制备抗TRIM22多肽抗体及鉴定其性能。方法将TRIM22 N端15个氨基酸的多肽(MDFSVKVDIEKEVTC)与钥孔嘁血蓝蛋白(KLH)偶联,免疫新西兰白兔制备抗血清;将TRIM22多肽与Affi-Gel 10偶联制备免疫亲和层析柱,兔抗血清经亲和层析纯化后得到TRIM22多肽特异性抗体;采用ELISA测定抗体效价、Western blot鉴定抗体特异性,并利用该抗体通过间接免疫荧光实验来检测TRIM22蛋白的细胞内定位。结果获得了抗TRIM22特异性抗体。Western blot结果显示该抗体能特异识别真核及原核表达的TRIM22蛋白。利用该抗体进行的间接免疫荧光实验发现TRIM22蛋白主要定位在HepG2细胞核中。结论该抗体的制备为TRIM22分子的功能研究提供了有力的工具。; 高波段志坚高震洪晓武徐薇熊思东; 关键词：多肽抗体 WESTERNBLOT 间接免疫荧光

抗病毒固有免疫分子TRIM22 C端SPRY结构域对其转录、翻译及亚细胞定位的影响被引量：4: 2010年; 本文旨在探讨TRIM22 C端SRPY结构域对其转录、翻译及亚细胞定位的影响。以野生型TRIM22真核表达质粒为模板,扩增出C端SPRY结构域缺失的TRIM22基因片段,并将其克隆入真核表达质粒pcDNA3.1。将野生型和突变型TRIM22真核表达载体分别转染高分化人肝癌细胞株HepG2。通过反转录-聚合酶链反应检测其mRNA表达水平,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测其蛋白表达水平,并通过间接免疫荧光法检测其亚细胞内定位。结果成功构建了C端SPRY结构域缺失的TRIM22真核表达质粒。转染HepG2细胞后,TRIM22 SPRY结构域缺失突变体在转录和翻译水平上均与野生型TRIM22无明显差异,但TRIM22 SPRY结构域缺失突变体完全丧失了核定位能力,这为进一步研究SPRY结构域在TRIM22抗病毒过程中所发挥的作用及机制提供了有益的启示。; 高波段志坚徐薇熊思东; 关键词：突变亚细胞定位

人、黑猩猩和叶猴FKN全基因的克隆及体外表达的比较研究被引量：1: 2007年; 目的克隆人、黑猩猩和叶猴FKN全基因及体外表达,比较研究FKN在进化过程中基因组水平和蛋白表达水平的差异。方法应用基因重叠延伸拼接PCR法(Gene splicing by overlapping extension PCR,SOE-PCR)将FKN的3个外显子编码序列依次进行前后拼接,然后插入pcDNA3.1/myc-His(-)A真核表达载体中,经酶切、测序鉴定后转染CHO细胞体外表达,RT-PCR、SDS-PAGE和Western blot检测其表达产物。结果酶切、测序鉴定证实插入的基因片段为完整的FKN,RT-PCR可从转染的CHO细胞中扩增出一条与目的基因大小一致的DNA片段,其表达蛋白能分泌至胞外,SDS-PAGE显示其分子量约为95000,抗c-myc抗体可与载体上的c-myc蛋白特异性结合。测序显示人、黑猩猩和叶猴相比,FKN基因除了有散在的点突变外,还发现有一明显的30bp的缺失,但此缺失对FKN蛋白的表达并不影响。结论成功克隆人、黑猩猩和叶猴FKN全基因,基因组水平和蛋白表达水平的比较研究为后续探讨FKN在高级灵长类物种进化过程中免疫学功能的演变奠定基础。; 洪晓武张亚平储以微高波邵先安蒋正刚熊思东; 关键词：FKN 基因克隆灵长类

固有免疫分子TRIM5α对乙型肝炎病毒复制的影响被引量：2: 2009年; 目的:构建固有免疫分子TRIM5α的真核表达质粒,研究TRIM5α对HBV复制的影响。方法:通过巢氏RT-PCR技术从恒河猴肺组织中扩增出TRIM5α的编码基因,并将其克隆入pcDNA3.1真核表达载体。将TRIM5α真核表达质粒转染HepG2细胞,用Western blot的方法鉴定TRIM5α蛋白表达情况。将TRIM5α真核表达质粒与复制型HBV质粒通过磷酸钙沉淀法共转染HepG2细胞、通过尾静脉高压注射法共转染BALB/c小鼠。ELISA检测转染细胞上清及小鼠血清中的HBsAg和HBeAg;免疫组化检测小鼠肝组织HBcAg的表达;Southern blot检测转染细胞中HBV复制中间体。将TRIM5α真核表达质粒转染293T细胞3小时后,再将基于HIV-1结构的慢病毒载体三质粒系统转染293T细胞,通过检测转染细胞上清中的HIV-1 p24抗原含量来鉴定TRIM5α抗HIV-1功能。结果:成功构建TRIM5α真核表达质粒;过表达TRIM5α不能有效降低HBV抗原和复制中间体水平,但可抑制HIV-1 p24抗原的表达。结论:TRIM5α不能有效抑制HBV的复制。; 高波段志坚徐薇熊思东; 关键词：真核表达 HBV 共转染

人TRIM22基因真核表达质粒的构建和表达及TRIM22对Jurkat T细胞增殖的影响被引量：4: 2008年; 研究TRIM22对Jurkat T增殖的影响,探讨TRIM22分子的生物学效应。分离人外周血单个核细胞,获得其细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增人TRIM22基因,经Nhe I和Hind III双酶切后插入pcDNA3.1/myc-His(-)真核表达载体,并对其进行酶切和测序鉴定。将构建好的真核表达质粒pcDNA/TRIM22转染Jurkat T细胞,用Western blot方法鉴定TRIM22蛋白表达情况,用CCK-8试剂检测TRIM22对T细胞增殖的影响,用双荧光素酶报告基因方法检测TRIM22对IL-2基因启动子的转录活性,用半定量RT-PCR方法检测TRIM22对IL-2 mRNA表达水平的影响。结果:成功构建了C端带有myc标记的真核表达质粒pcDNA/TRIM22,质粒转染Jurkat T细胞后能够表达TRIM22蛋白,细胞增殖检测结果显示TRIM22能够降低Jurkat T细胞的增殖达30%左右,报告基因检测结果显示TRIM22能够抑制IL-2启动子活性达20%至50%,过表达TRIM22降低IL-2 mRNA表达水平,这些结果为进一步深入研究TRIM22的生物学特性奠定了基础。; 段志坚高波徐薇周倩熊思东; 关键词：真核表达细胞增殖 IL-2

PEI介导的凋亡DNA胞内递送及其对原代巨噬细胞活化的作用被引量：3: 2009年; 观察以多聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)为载体,介导活化并发生凋亡的淋巴细胞来源的DNA(凋亡DNA)的胞内递送,探讨凋亡DNA对原代巨噬细胞活化的影响。采用PEI为载体,介导凋亡DNA和正常淋巴细胞来源的DNA(正常DNA)进入胞内,以ELISA方法检测巨噬细胞IL-6、TNF-α的分泌;分析各种因素对PEI胞内递送效率的影响,并评价其对原代巨噬细胞的安全使用剂量。结果显示:PEI可介导DNA对原代巨噬细胞的胞内递送;凋亡DNA进入胞内后,可以刺激巨噬细胞活化,诱导炎症因子IL-6和TNF-α的分泌;相同的条件下,正常DNA却不能引起这些变化。进一步观察发现PEI与DNA的质量比为2或3时胞内递送效率最佳;小于10μg/ml的PEI用量并于转染6 h后换液对原代巨噬细胞毒性较小。上述结果表明,PEI作为载体,可以有效介导对原代巨噬细胞的基因(哺乳动物DNA或质粒)递送;进入胞内的凋亡DNA可促进巨噬细胞活化并分泌大量炎性细胞因子,这对于研究系统性红斑狼疮(SLE)的发病机制具有意义。; 周倩高波段志坚陈敏徐薇熊思东; 关键词：巨噬细胞 SLE

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高波