黄妙容
- 作品数：10 被引量：11H指数：2
- 供职机构：华南农业大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 福寿螺多功能纤维素酶基因egx的克隆及其体外功能性表达被引量：7
- 2011年
- 【目的】克隆福寿螺多功能纤维素酶基因egx,并在大肠杆菌和哺乳动物细胞中进行表达分析。【方法】通过RT-PCR的方法,从福寿螺胃组织总RNA中克隆福寿螺多功能纤维素酶基因egx序列,连接克隆载体pMD18-T,再通过Eco RⅠ和NotⅠ两个酶切位点分别与表达载体pET-32a(+)及pcDNA3.1(+)连接,构建原核、真核表达载体,并在E.coli BL-21(DE3)和猪肾细胞PK15中进行表达,最后采用DNS法测定表达产物酶学活性。【结果】RT-PCR扩增得到1 326 bp的序列,包括1 185 bp的编码序列和部分侧翼序列,编码序列与已报道的福寿螺多功能纤维素酶基因cDNA序列相似性为99%,氨基酸序列相似性为100%。原核细胞表达产物经包涵体复性后,对羧甲基纤维素钠、2-羟乙基纤维素、羟乙基纤维素、微晶纤维素、木聚糖的水解活性分别为:24.78、15.67、18.42、600.91和175.43 U.mg-1;而在PK15细胞中重组酶对以上5种底物的活性分别为:0.84、0.78、1.01、14.62和4.23 U.mL-1。【结论】克隆出了福寿螺多功能纤维素酶基因,并能在大肠杆菌和哺乳动物细胞中成功地表达。
- 黄妙容刘德武吴珍芳
- 关键词：福寿螺原核表达真核表达酶活测定
- 稳定转染纤维素酶相关基因的猪胎儿成纤维细胞系的建立被引量：1
- 2013年
- 旨在构建带有双筛选标记的纤维素酶基因的腮腺特异性表达载体,筛选稳定转染该载体的猪胎儿成纤维细胞系,为制备转纤维素酶基因的转基因克隆猪提供核供体细胞。采用SOE-PCR和PCR方法,分别扩增获得筛选标记基因NEO-T2A-EGFP序列和纤维素酶相关基因的融合序列SP-EGX-F2A-BGL1,构建腮腺特异性表达载体pPSP-SP-EGX-F2A-BGL1-CMV-NEO-T2A-EGFP,经PCR、酶切、测序鉴定正确后,通过脂质体转染猪胎儿成纤维细胞,利用G418抗性和绿色荧光蛋白进行稳定筛选,并利用PCR和Western blot进行检测。结果表明,成功构建了带双筛选标记的腮腺特异表达纤维素酶基因的表达载体,并获得稳定转染该载体的猪胎儿成纤维细胞系。该结果为生产腮腺特异表达纤维素酶的转基因克隆猪研究奠定基础。
- 黄妙容张献伟刘德武邹娴帅亮袁玉娟朱财林吴珍芳
- 关键词：纤维素酶
- 福寿螺多功能纤维素酶基因egx的克隆及其体外功能表达
- 【目的】克隆福寿螺多功能纤维素酶基因egx,并在大肠杆菌和哺乳动物细胞中进行表达分析。【方法】通过RT-PCR的方法,从福寿螺胃组织total RNA中克隆福寿螺多功能纤维素酶egx基因序列,连接到克隆载体pMD18-T...
- 黄妙容刘德武吴珍芳
- 关键词：福寿螺原核表达真核表达酶活测定
- 文献传递
- 携带不同信号肽的黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因在CHO细胞中的表达
- 本研究分别构建了携带黑曲霉β-葡萄糖苷酶自身信号肽和腮腺分泌蛋白信号肽的真核细胞表达载体，并在CHO细胞中进行分泌表达，结果发现，两个载体表达的酶活性均不高，其中携带黑曲霉β-葡萄糖苷酶自身信号肽的重组酶活性略低于猪腮腺...
- 黄晓灵黄妙容刘德武李紫聪吴珍芳
- 关键词：黑曲霉Β-葡萄糖苷酶信号肽CHO细胞
- 腮腺特异性表达egx和bglⅠ双基因共表达载体的构建及转基因小鼠模型的制备
- 纤维素酶是由多种酶组成的复合酶体系，包括内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶三大类。协同理论认为：外切酶作用于不溶性纤维表面，使形成结晶结构的纤维素长分子链开裂，长链分子末端部分发生游离，从而使纤维素易于水化;内切...
- 黄妙容刘德武黄晓灵许惠李紫聪吴珍芳
- 关键词：黑曲霉Β-葡萄糖苷酶
- IGFBP3基因对猪的部分生长性状的影响
- 试验以杜洛克猪、大白猪和长白猪计461头为研究对象，采用PCR-RFLP方法分析了IGFBP3基因Tas Ⅰ限制性内切酶酶切位点的多态性及其对部分生长性状的影响。结果表明，GG基因型对大白猪的体高、瘦肉率，杜洛克猪的瘦肉...
- 陈永睛黄妙容刘德武
- 关键词：生长性状限制性内切酶酶切位点瘦肉率养猪技术
- 文献传递
- 黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因的克隆及其在猪胎儿成纤维细胞中的表达
- β-葡萄糖苷酶是纤维素酶系三大成员之一，在纤维素糖化作用中水解纤维二糖和短链的纤维寡糖生成葡萄搪。虽然-葡萄糖苷酶对天然纤维素不起直接作用，但由于它可以消除内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶催化的反应产物对纤维素水解反应的抑制作...
- 黄妙容刘德武蔡更元许惠邹娴黄志华周庆丰曾海玉吴珍芳
- 关键词：黑曲霉Β-葡萄糖苷酶酶活测定基因克隆
- 文献传递
- 带neo-egfp双筛选标记、腮腺特异性表达纤维素酶基因egx-bgl Ⅰ的共表达载体的构建
- 本研究拟构建腮腺特异性表达纤维素酶相关基因的双基因多酶活表达载体，同时，本研究还将neo和egfp两个筛选基因进行融合并连接到该特异性载体中，为后续利用该载体筛选稳定转染的猪胎儿成纤维细胞、生产转纤维素酶基因的克隆猪研究...
- 黄妙容张献伟刘德武李紫聪吴珍芳
- 关键词：共表达
- 木聚糖酶-甘露聚糖酶融合酶的真核表达分泌与部分酶学性质分析
- 本研究尝试利用α-螺旋刚性肽a3，对木聚糖酶基因和甘露聚糖酶基因进行融合，构建可在猪细胞内进行高效表达和分泌的耐酸性木聚糖酶和甘露聚糖酶融合酶(XynB-a3-ManA)，为环保型转基因猪的研究打基础。
- 张冠冠张献伟刘德武李紫聪黄妙容张茂吴珍芳
- 关键词：木聚糖酶甘露聚糖酶转基因
