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从C57BL/6J小鼠胚胎中分离ES细胞系(英文): 1997年; ＥＳ细胞（ＥｍｂｒｙｏｎｉｃＳｔｅｍＣｅｌｓ）是来源于小鼠早期胚胎的细胞系，它可以在体外大量培养而不失去其发育的多潜能性。ＥＳ细胞不仅可以用来制作转基因动物，而且能够作为载体进行基因打靶等多种研究。目前，国际上常用的胚胎干细胞系都是来源于１２９小鼠的胚胎。因而，有必要探讨用其它品系小鼠建立ＥＳ系。１９９１年，Ｌｅｄｅｒｍａｎｎ等人首次报道从Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠胚胎中建成了ＥＳ细胞系，但是没有对建立的细胞系进行特性分析。国内柴桂萱等人虽然做了特性分析，但是他们所建细胞系的细胞直径较大，生长速度较慢，不同于常见的ＥＳ细胞系。我们从Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ品系小鼠胚胎中共分离了四个ＥＳ细胞系，分别命名为ＣＥ１、ＣＥ２、ＣＥ３、ＣＥ４（Ｆｉｇ．１ａ＆ｂ）。这四个细胞系核型正常率均达到７０％以上。我们检查了ＣＥ２细胞的分化能力，当将ＣＥ２细胞注入同基因型小鼠的皮下后，获得的畸胎瘤（Ｆｉｇ．３）组织切片检查的结果表明：该细胞能够分化成多种组织（Ｆｉｇ．２）。我们也研究了ＥＳ细胞的嵌合能力，用ＩＣＲ小鼠胚胎作为受体胚胎，采用囊胚显微注射法构建嵌合鼠。在幸存的幼鼠中我们获得了来源于ＣＥ２细胞的嵌合鼠（Ｔａｂｌｅ１，Ｆｉｇ．４）。综?; 何维高建刚刘晓刘晓; 关键词：小鼠 ES细胞系胚胎建系

影响HM—1细胞获得种系嵌合鼠的两种因素: 1997年; ES细胞系统与基因定位致变相结合，进行基因敲除（knockout)已成为研究基因在生物体内功能的重要手段。在ES细胞系的建立、外源基因导入ES细胞、种系嵌合鼠的获得等三个重要环节中，种系嵌合鼠的获得是最关键的一环。由于ES细胞系统技术复杂，实验条件要求很高，心管国际上已报导了上百例的基因敲除（knockout)实验，但是到目前为止，我国这无一例在国内条件下获得种系嵌合鼠的正式报道。本研究对影响种系嵌合鼠获得的两种因素（饲养层细胞、受体胚胎种类）进行了比较研究，成功地获得了种系嵌合鼠。将HM－1细胞在STO和MEF培养层上培养至21－33代，注射到不同不鼠囊胚里，经过恢复培养，移植到假孕的昆明白雄鼠子宫内。由于HM－1细胞来源于粟色的129品系，而胚胎供体鼠的毛色为黑或白色，仔鼠出生一周后即可辨别是否为毛色嵌合鼠。用成年嵌合鼠与其受体胚胎相同品系的小鼠交配，进行种系嵌合鼠鉴定。曾有报导：STO培养层会导致ES细胞发生核变。我们改用MEF培养层，获得嵌合鼠的比率高达48．6％（Table1)。不同小鼠胚之间存在差异，C57BL／6J、ICR和昆明白三者提供的受体胚胎产生嵌合鼠的比率分别为71．4％、55％和18％（Table2）。因此C57BL6J品系小鼠胚胎更适于做HM－1细胞的受体胚胎。由于HM－1细胞的染色体组型属于XY型，所获得的嵌合鼠产生明显的性别偏离现象（Table3)，甚至有育现象发生。交配实验表明：两只以C57BL／6J小鼠囊胚为受体胚胎获得的嵌合鼠为种系嵌合鼠，可以进行种系传递，其它嵌合鼠均没有种系传递发生（Fig.1&2)。这两只鼠种系传递的比例为47．4％（Table4）。现在看来，在改用MEF培养层以前，一直认为不能进行种系传递的HM－1细胞是能够嵌合入生殖腺并形成有功能的配子的。; 何维孙方臻

癌基因EJ－ras在小鼠胚胎干细胞（ES－5）中的表达及其对ES－5细胞一些特征的影响被引量：1: 1996年; 转基因动物在研究基因的功能、医药、畜牧业等方面有重要的应用。利用胚胎干细胞（ＥＳ）制作转基因动物，比传统的显微注射法有无可比拟的优点。但是，目前、只在小鼠中建立起了ＥＳ细胞系，在其它哺乳动物（包括家畜）中尚未建成。近来，人们开始探索：改变胚胎细胞的遗传物质（如：把外源基因导入胚胎细胞）是否有利于获得ＥＳ细胞系．在各种外源基因中，癌基因是值得尝试的基因。因为：（１）ＥＳ细胞的建系是使胚胎的ＩＣＭ细胞永生化的过程；（２）在体外利用癌基因转染可使许多原代培养细胞永生化；（３）ＥＳ细胞高表达一些原癌基因。我们用癌基因ＥＪ－ｒａｓ转染小鼠ＥＳ细胞，观察其对ＥＳ－５细胞一些特性（增殖、嵌合能力）的影响，以便选择合适的癌基因用于家畜ＥＳ细胞的建系。ＥＳ－５细胞通常培养在丝裂霉素处理的小鼠胚胎成纤维细胞（ＭＥＦ）上（Ｆｉｇ．Ａ）。转染用ＥＳ－５细胞培养在无饲养层细胞的、含有大鼠肝细胞（ＢＲＬ）的条件培养液ＤＭＥＭ中。ＥＪ－ｒａｓ基因克隆在真核表达载体ＰＳＶ２ｎｅｏ的ＢａｍＨＩ位点上、使用磷酸钙法转染ＥＳ－５细胞，Ｇ－４１８法筛选阳性克隆，得到的抗性克隆仍以集落形式生长（Ｆｉｇ．Ｂ），选取５个较好的克隆（ＥＳ－ｒａｓ１，２，?; 高健刚何维李秀玲丛笑倩姚鑫; 关键词：小鼠癌基因表达

远交系小鼠胚胎干细胞系的建立及嵌合鼠的获得被引量：4: 1996年; ＥＳ细胞（ＥｍｂｒｙｏｎｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌｓ）是来源于小鼠早期胚胎的多潜能干细胞，它可以在体外大量培养。并以单细胞的形式注射到早期胚胎里，发育为嵌合体。到目前为止，通常使用的１２９小鼠品系是来源于近交系（ｉｎｂｒｅｄ）小鼠的胚胎．与之相比，远交系小鼠应当具有较强的生命力和抗病能力。曾有人报道过建成了远交系小鼠胚胎干细胞系，但是尚没有见到获得嵌合鼠的报道。有人甚至认为：由于不同品系小鼠所具有的遗传背景不同，有的小鼠不能建成ＥＳ细胞系。最近，本实验室在这方面做了有益的探索，成功地建成了远交系小鼠胚胎干细胞系，并在这里报导首例用远交系小鼠胚胎干细胞系培育成功嵌合体小鼠。采用源于Ｓｗｉｓｓ小鼠远交群的昆明（ＫＭ）品系小鼠囊胚建成了三个小鼠胚胎干细胞系（ＫＥ１．ＫＥ２．ＫＥ５）。核型正常率均达到７０％以上。自第八代起分批冻存，复苏后，培养至第１２代，消化成单细胞，通过囊胚显微注射，将其注射到６１５品系小鼠胚胎。在幸存的幼鼠中获得了一只来源于ＫＥ１细胞的嵌合鼠（Ｔａｂｌｅ１）．其毛色表现为受体鼠（６１５）的白色中嵌合有供体鼠（ＫＭ）的黑褐色（ＰｌａｔｅＩ－Ａ）．嵌合鼠与受体鼠的杂交后代鼠中仍然出现了受体鼠的毛色类型（?; 何维高建刚刘晓孙方臻; 关键词：ES细胞系建系嵌合鼠

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