俞新大
- 作品数：18 被引量：47H指数：4
- 供职机构：南开大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 人生长激素基因在昆虫细胞中的表达及产物分析
- 1999年
- 俞新大耿朝晖张宝珠谌莉郜鹏郭宏杰岳鹏李建民
- 关键词：人生长激素基因昆虫细胞重组病毒放射免疫测定
- 真核细胞基因工程产物人生长激素的纯化研究
- 1997年
- 应用反相高效液相色谱法（ＲＰ－ＨＰＬＣ）对真核细胞基因表达产物人生长激素进行了纯化研究，发现在７１．６７％的乙晴浓度下人生长激素可有效地与其它杂蛋白分离，乙晴与人生长激素的短时间接触不影响其放射免疫活性．
- 于自然俞新大周卫东耿朝晖张宝珠李建民崔同昌
- 关键词：人生长激素纯化基因工程真核细胞
- 利用免疫荧光标记研究磷酸化组蛋白H3在乳腺癌细胞中的分布被引量：6
- 2002年
- 在时间上与细胞周期相关并且在功能上又与染色质凝集偶联的一类组蛋白翻译后修饰就是组蛋白H3磷酸化。运用一个针对H3 Ser10磷酸化的特异性抗体 ,通过SDS PAGE、免疫印迹和免疫荧光标记检测了磷酸化H3在MCF 7细胞周期中的分布。共聚焦显微结果显示 :H3磷酸化在早前期细胞核膜附近以斑点状起始 ,之后扩展到整个凝集的染色质上 ,然后在早中期达到最高水平。H3去磷酸化开始于有丝分裂后期 ,很快在末期完成 ,而此时末期细胞凝集的染色质并未完全解凝集。H3磷酸化与染色质初期凝集之间存在着精确的时间和空间上的相关性。另外 ,对H3磷酸化可能的作用进行了讨论。
- 杨琴陈家童耿朝晖俞新大黄熙泰
- 关键词：免疫荧光标记磷酸化组蛋白H3乳腺癌细胞染色质凝集细胞周期
- 人生长激素基因在昆虫细胞中表达的初步研究被引量：4
- 1998年
- 将人生长激素hGH的cDNA片段克隆在转移载体pVL1393的多角体蛋白基因启动子下游，构成重组转移载体pVL1393hGH，将该质粒DNA与昆虫杆状病毒（AcNPV）DNA共转染秋粘虫（Spodopterafrugiperda）细胞Sf9，通过体内同源重组，hGH基因取代多角体蛋白基因，从而整合到病毒基因组上，经感染昆虫细胞后表达外源hGH基因，通过反复病毒空斑纯化，获不含多角体的重组病毒，利用免疫化学发光法测定hGH表达量达40μg／mL．
- 俞新大耿朝晖周卫东张宝珠张爱虹李建民沈孝宙王瑛
- 关键词：ACNPV昆虫细胞
- 神经生长因子基因的克隆及在昆虫细胞中的表达
- 2011年
- 以人胎盘组织DNA为模板,经PCR扩增出包含信号肽,前肽和成熟肽部分的prepro-NGF序列,经序列分析后克隆至转移载体pFastBac1中得到pFastBac-NGF,再将其转化含穿梭载体Bacmid的大肠杆菌DH10Bac,发生转座作用后,得到含NGF基因的重组穿梭载体rBacmid-NGF,用纯化的rBacmid-NGFDNA直接转染培养的昆虫细胞Sf9,得到重组病毒rAcV-Bac-hGH,经PCR和酶切鉴定,NGF基因正确地插入在病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下.表达产物经SDS-PAGE和Western blot检测在34 kD左右有一表达带并具有神经生长因子的免疫学活性.
- 程秀玮赵娟何冰江汉民俞新大
- 关键词：神经生长因子杆状病毒昆虫细胞基因表达
- 小麦叶绿体psbA基因PCR扩增及其克隆被引量：4
- 1995年
- 利用聚合酶链反应（Polymerasechainreaction）对小麦叶绿体的psbA基因进行情异性扩增，并以pBS+质粒为载体将完整的psbA基因克隆到E.coli中．通过分子杂交，PCR反应和酶切分析证明。重组质粒pTD1Ⅱ中含有完整的小麦叶绿体psbA基因．
- 于玲俞新大张自立
- 关键词：PSBA基因克隆聚合酶链反应扩增
- 磷酸化组蛋白H3在小麦有丝分裂与减数分裂中的分布(英文)被引量：1
- 2002年
- 在细胞周期中 ,与染色质凝集偶联的一类组蛋白修饰是组蛋白H3的磷酸化。运用H3_Ser 10磷酸化的特异性抗体 ,通过间接免疫荧光标记检测了磷酸化组蛋白H3在小麦 (TriticumaestivumL .)有丝分裂与减数分裂细胞中的分布。有丝分裂时 ,H3磷酸化起始于早前期 ,消失于末期 ,在中期与后期 ,H3磷酸化主要分布在着丝粒两侧的异染色质区。减数分裂时 ,H3磷酸化起始于细线期向偶线期转换时 ,并且从前期Ⅰ到后期Ⅰ保持均一分布于整个染色体上 ,直到末期Ⅰ消失 ,而中期Ⅱ与后期Ⅱ在着丝粒两侧的异染色质区的信号略强于染色体臂 ,直至消失于末期Ⅱ。磷酸化组蛋白H3在两类细胞分裂中的不同分布暗示这种保守的翻译后修饰可能发挥着除参与染色体凝集外的更复杂的作用。
- 杨琴黄熙泰耿朝晖俞新大
- 关键词：磷酸化组蛋白H3小麦有丝分裂减数分裂免疫荧光标记
- 人神经生长因子基因在大肠杆菌中的克隆、表达及产物纯化被引量：5
- 2006年
- 从人胎盘组织中提取总DNA,经PCR扩增编码人β神经生长因子(β-NGF)成熟肽的基因,并克隆到大肠杆菌表达载体pET15b中。重组质粒pET15b-NGF经测序与报道的完全一致。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导表达得到16kDa的目的蛋白带,与预期的大小一致,NGF表达量约占全菌总蛋白的25%。经过亲和层析柱(Ni2+-chargedIDAhis-bindcolumn)纯化后得到了单一的NGF蛋白条带,蛋白纯度可达90%以上,从每升表达菌液中可以得到4.56mgNGF。表达产物的Western印迹鉴定结果显示:重组人神经生长因子能与兔抗人β-NGF的多克隆抗体发生特异性结合反应,在16kDa处出现单一的条带,表明诱导表达的重组NGF具有免疫学活性。鸡胚背根神经节感觉神经元鉴定试验表明,表达的重组NGF具有良好的生物学活性。
- 赵娟何冰江汉民程秀玮俞新大
- 关键词：基因克隆纯化生物活性
- 人类肝脏F抗原基因克隆及其表达
- 刘树业俞新大陆伟高英堂张健东朱争艳张宝珠齐之丽
- 该课题研究的特点在于采用基因工程的方法制备表达人肝脏F蛋白。设计完成适用于人类肝脏F抗原RNA RT－PCR的上下游引物，得到了碱基数约为1200bp的RT－PCR产物，完成了克隆及表达载体的构建。将表达载体导入E.co...
- 关键词：
- 关键词：F蛋白RT-PCR克隆表达
- 小麦叶绿体psbA基因的克隆及表达被引量：6
- 1995年
- 用ＰＣＲ直接从小麦叶绿体基因组扩增到完整的ｐｓｂＡ基因，并构建了ｐｓｂＡ基因的克隆ｐＴＤ１Ⅱ。为研究ｐｓｂＡ基因在Ｅ·ｃｏｌｉ中的表达，将完整的ｐｓｂＡ基因正向插入高表达载体ｐＫＫ２２３－３中构建表达克隆ｐＫＴＤ１。含有重组表达质粒的转化细胞经ＩＰＴＧ诱导后提取总蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，小麦叶绿体ｐｓｂＡ基因能在Ｅ·ｃｏｌｉ中表达３２ｋＤ的Ｄ１蛋白，表达的Ｄ１蛋白占细菌总蛋白的３％以上。
- 俞新大于玲岳强杜荣骞张自立
- 关键词：小麦PSBA基因无性系叶绿体基因表达
