刘尧
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 发文基金：广西壮族自治区科技攻关计划广西壮族自治区科学研究与技术开发计划更多>>
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- γ射线预处理制备胚胎干细胞滋养层的实验研究被引量：1
- 2010年
- 目的筛选并建立稳定、高效的胚胎干细胞滋养层细胞体外培养的最佳条件,利于胚胎干细胞的培养。方法清洁级昆明系孕12.5天、14.5天、18.5天雌鼠和新生(P0)昆明小鼠各5只。无菌取上述各孕龄小鼠胚胎分离培养原代鼠胚成纤维细胞(MEF)并传代;以60Coγ射线(30Gy,20℃)分别照射10、20、25min后制备滋养层细胞。结果胚龄及60Coγ射线照射对MEF的细胞活性、生长增生和分泌功能有影响。(1)细胞活性状态:①E12.5天、E14.5天、E18天鼠胚和P0来源的第3～5代MEF活性均较好。E18.5天鼠胚和P0来源的第6代MEF,后期深染变形细胞的比例增多达32%,与E14.5天鼠胚来源同代细胞相比有显著差异(P<0.05);②E14.5天来源的第3～6代细胞采用60Coγ射线照射10min组,细胞仍生长迅速。照射20min组,细胞可维持存活达20天以上,细胞密度无显著变化。照射25min组,细胞存活14天左右且细胞密度无显著增加。(2)细胞分泌功能:①E14.5天鼠胚来源的第3～6代MEF以及用60Coγ射线照射10min组和20min组并培养5天时均可见较多数目的Ⅰ型胶原蛋白免疫阳性细胞,且染色较深;②60Coγ射线照射25min组,培养5天后第3～4代MEF中Ⅰ型胶原蛋白阳性细胞数目与正常组相比无明显差异;但第5代后MEF中Ⅰ型胶原蛋白阳性细胞数目减少,染色浅淡。结论 E14.5天鼠胚来源的第3～6代是用于制备滋养层的最佳来源;60Coγ射线(30Gy,20℃)照射20min可作为预处理制备滋养层细胞的最佳条件。
- 刘尧杨明王惠杨卫兵秦茂林李红丽
- 关键词：滋养层
- 不同功能状态滋养层对人胚胎生殖嵴干细胞生长作用的实验研究
- 2010年
- 目的筛选并建立高效胚胎干细胞滋养层体外培养的最佳条件,利于人胚胎生殖嵴原始生殖细胞(PGC)的增殖。方法分离培养孕14.5 d(E14.5 d)和新生0 d(P0)昆明小鼠原代胚胎成纤维细胞(MEF)并传代制备滋养层,以60Coγ射线照射后继续培养并接种人PGC。采用活细胞拒染法、免疫细胞化学染色,对比观察滋养层的生长活性和照射后分泌功能;采用碱性磷酸酶(AKP)染色技术鉴定人PGCs的生长状态。结果 (1)E14.5 d和P0来源的第3～5代MEF生长旺盛。P0来源第6代与E14.5 d来源同代MEF相比深染变形细胞增达32%,经60Coγ照射后衰老细胞明显增多(P<0.05)。(2)E14.5 d来源第3～6代和P0来源第3～4代MEF经60Coγ照射后培养5 d时,Ⅰ型胶原蛋白免疫阳性细胞数目较多,染色较深;但P0来源第5代其阳性细胞数目明显减少,染色变浅。(3)人PGCs接种于E14.5 d第3代制备的滋养层3～4 d后见典型的ESC小克隆团,细胞呈圆形;AKP染色呈深蓝色团;而接种于P0来源第6代MEF制备的滋养层5～6 d,可见ESC克隆松散、变大,周围边界不清,细胞紊乱。结论以60Coγ射线照射小鼠E14.5 d来源第3～6代MEF是制备滋养层的最佳来源,可维持人PGCs增殖。
- 李欣刘尧李丽君秦茂林杨卫兵李红丽
- 关键词：胚胎成纤维细胞滋养层小鼠
- 体外培养获得稳定高效胚胎干细胞滋养层的实验研究
- 2010年
- 目的筛选并优化获得稳定的胚胎干细胞（embryonic stem cells,ESCs）滋养层细胞的来源及其体外培养的最佳条件,为胚胎干细胞体外存活提供必要条件。方法分别取人工流产胎儿皮肤组织、昆明小鼠孕12.5、14.5、18.5d胚胎和新生鼠（P0）组织,分离培养原代胚胎成纤维细胞（embryonic fibroblasts,EFs）并传代制成滋养层。采用活细胞拒染法和免疫细胞化学染色等技术,观察并比较两种来源以及不同时相来源制备的滋养层细胞的功能状态差异。结果细胞活性状态：①人胚来源第1～5代成纤维细胞活性均好;但1～2代时杂细胞较多,此后可见深染色细胞逐渐增多。②E12.5d、E14.5d鼠胚来源的各代细胞均较同代E18.5d和P0来源的活性细胞数目高（P〈0.05）。以E14.5d第3～6代细胞最易培养存活。P0来源第6代与E14.5d来源同代细胞相比,深染变形细胞增多达30%。细胞分泌功能：①人胚来源第3～5代细胞I型胶原蛋白免疫阳性细胞数目少且染色较淡。②鼠胚来源的以E12.5d、E14.5d、E18.5d的第3～6代细胞免疫阳性细胞数目最多,且染色深;P0来源第6代细胞免疫阳性细胞染色深浅不一。结论采用人胚胎来源的成纤维细胞的活性尚可,但分泌功能稳定性欠佳。鼠胚E12.5～18.5d来源的第3～6代成纤维细胞,具有细胞活性强、分泌功能旺盛的特点,是作为胚胎干细胞赖以存活滋养层的最佳选择。
- 杨卫兵刘尧李欣秦茂林李红丽
- 关键词：胚胎成纤维细胞胚胎干细胞滋养层
