刘林华
- 作品数：36 被引量：65H指数：6
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- 多聚聚合酶-1在氢醌诱导的DNA损伤应答中的作用及其机制被引量：8
- 2015年
- 目的探讨多聚聚合酶-1(PARP-1)在氢醌(hydroquinone,HQ)诱导的DNA损伤应答中的作用及其相关的调控机制。方法以磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以10μmol/L HQ染毒TK6细胞为处理组,分别在染毒0.5、1、2、3、4、5和6 h时收集细胞,以0 h为对照组,或用HQ处理PARP-1沉默细胞,运用western bloting技术检测TK6细胞中磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)、聚腺苷二磷酸核糖(PAR)以及DNA损伤应答(DDR)相关蛋白PARP-1和抗凋亡转录因子(AATF)的表达情况。结果 HQ处理TK6细胞后,γ-H2AX的含量在3 h时达到高峰[(14.83±1.14)倍](P<0.05),此后逐渐下降;AATF的含量一直上升,6 h含量最高[(15.62±1.14)倍](P<0.05)。PARP-1的含量先下降后上升,3 h其含量最低[(0.66±0.04)倍](P<0.05)。PAR的含量在0.5 h达高峰[(1.78±0.13)倍](P<0.05),而后逐渐下降。PARP-1沉默细胞中,HQ处理使得PARP-1、PAR和AATF的含量分别降了77%(P<0.05)、64%(P<0.05)和68%(P<0.05),γ-H2AX的含量上升了1.65倍(P<0.05)。结论 PARP-1通过聚多聚腺苷二磷酸(ADP)核糖基化作用增强AATF稳定性参与由氢醌诱导的DNA损伤修复。
- 凌晓璇温桥生杜谕君云林唐焕文徐永春刘林华
- 关键词：氢醌DNA损伤修复PARP-1TK6细胞
- N-Ras shRNA抑制二羟环氧苯并芘恶性转化细胞增殖
- 目的:检测环境致癌物苯并(a)芘代谢物二羟环氧苯并芘(BPDE)对人支气管上皮细胞Ras基因家族表达的影响,并用小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)干扰技术探讨N-Ras基因过表达对BPDE转化...
- 蒋义国周兰兰沈月兰刘林华
- 关键词：环境毒理二羟环氧苯并芘小发夹RNA
- 文献传递
- 缺氧微环境下钙信号介导鞘氨醇激酶1促进胶质瘤细胞增殖被引量：1
- 2015年
- 目的探讨缺氧微环境下鞘氨醇激酶1(SphK1)调控胶质瘤细胞增殖的分子机制。方法缺氧建立缺氧模型;RNA干扰技术下调SphK1的表达,分别以real-time PCR及蛋白免疫印记方法检测SphK1在mRNA及蛋白水平上的表达;CCK-8检测胶质瘤细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Fluo-3/AM孵育,激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+的动态变化。结果 SphK1表达下调可显著降低缺氧诱导的钙内流,并在缺氧条件下影响胶质瘤细胞增殖;钙通道激活剂OAG可减弱SphK1表达下调引起的细胞增殖抑制。结论缺氧微环境下SphK1可通过对胞内钙离子的调控影响胶质瘤的增殖。
- 张贺刘林华石明刘小山唐焕文
- 关键词：缺氧钙信号胶质瘤
- 沉默PARP-1对miR-221表达的影响被引量：1
- 2015年
- 目的探讨PARP-1沉默TK6细胞miR-221的表达。方法以空载体TK6细胞为对照组,以PARP-1沉默TK6细胞为处理组。免疫印迹法检测PARP-1蛋白表达量,反转录实时荧光定量-聚合酶链反应检测miR-221的表达改变。结果 PARP-1-shRNA组细胞PARP-1蛋白表达量与对照组细胞[(1.00±0.11)倍]相比,下降了75%(P<0.05),miR-221表达量与对照组细胞[(1.00±0.07)倍]相比,下降了26%(P<0.05)。结论 TK6细胞miR-221表达受PARP-1调节。
- 刘嘉贤唐焕文杜谕君云林凌晓璇刘林华
- 关键词：PARP-1MIR-221
- 低剂量氢醌对TK6淋巴母细胞生物学性状及miR-221表达影响被引量：7
- 2011年
- 目的探讨低剂量氢醌(HQ)对TK6淋巴母细胞的生物学性状及小分子非编码RNA(microRNA)-221(miR-221)表达的影响。方法磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组为对照组,分别以2.5、5.0和10.0μmol/L HQ染毒TK6细胞为处理组。应用CCK-8试剂盒检测细胞活力和细胞增殖,通过磷脂结合蛋白(Annexin V)/碘化丙啶(PI)标记的流式细胞技术检测细胞凋亡,用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-221的表达改变。结果细胞增殖以48 h最为明显,2.5、5.0和10.0μmol/L组细胞增殖指数分别为1.33(P<0.05)、1.14(P<0.05)和1.12(P<0.05);miR-221表达改变以72 h最为明显,2.5、5.0、10.0μmol/L HQ组细胞miR-221表达量分别抑制了0.31倍(P<0.05)、0.39倍(P<0.05)和0.33倍(P<0.05)。结论低剂量HQ能抑制TK6细胞凋亡和miR-221的表达,促进细胞增殖。
- 刘林华梁小虎凌晓璇唐焕文
- 关键词：氢醌TK6细胞
- CpG岛甲基化结合蛋白在氢醌致骨髓增殖性白血病病毒原癌基因转录激活中的作用被引量：1
- 2012年
- 目的深入揭示氢醌（HQ）致MPL转录激活的表观遗传学机制。方法以磷酸盐缓冲液（PBS）溶解HQ，以正常TK6细胞、PBS处理细胞为对照组，分别以2．5、5．0、10．0和20．0μmol／LHQ染毒TK6细胞为染毒组。应用实时荧光定量一聚合酶链反应检测甲基化CpG结合蛋白1～5（MBD1～5）的表达。结果与对照细胞相比，MBD1—4的mRNA表达量在所有的HQ处理细胞中全部下降，20．0μmol／LHQ对MBD2和MBD4表达的抑制效果最为明显，抑制率分别为50％和32％（P〈O．05）；而10．0μmo1／LHQ对MBD1和MBD3表达的抑制效果最明显，抑制率分别为36％和33％（P〈0．05）；MBD5表达无统计学意义（P〉0．05）。在MPL的CpG岛内有3个MBD1序列特异性结合位点。结论HQ致MPL的转录激活可能与MBD1表达异常有关。
- 刘林华凌晓璇梁海荣罗皓戴娟秀唐焕文
- 关键词：氢醌TK6细胞转录
- 白血病相关原癌基因在氢醌处理TK6细胞中的表达
- 2012年
- 目的探索氢醌(hydroquinone,HQ)致DNA整体低甲基化的后续结果。方法用磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组为对照组,分别以2.5、5.0、10.0和20.0μmol/L HQ染毒TK6细胞为处理组。应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测白血病相关原癌基因MPL、BRAF、ERBB2、MYB、MYC和RAF1的表达水平。结果与对照细胞相比,HQ处理细胞MPL和RAF1的mRNA表达量都随HQ剂量增加而上升,其中20μmol/L HQ对原癌基因表达的影响最为明显,分别上升了80%(P<0.05)和35%(P<0.05);MYB、MYC和ERBB2基因的mRNA表达量随HQ的剂量上升而下降。结论 MPL的转录活化很有可能与HQ导致的DNA整体低甲基化有关。
- 凌晓璇刘林华梁海荣戴娟秀郭莲仙唐焕文
- 关键词：氢醌TK6细胞原癌基因
- MicroRNA在苯并[a]芘诱导支气管细胞癌变中的作用
- ＜正＞苯并（a）芘（Benzo[a]pyrene,B[a]P）是一种常见的环境污染物,广泛存在于燃煤和吸烟过程中,是一种间接致癌物,B[a]P暴露与人类肺癌的发生密切相关。microRNA（miRNA）是最近发现的一类在...
- 刘林华吴延段慧菡沈月兰蒋义国
- 文献传递
- N-Ras基因靶向的shRNA抑制二羟环氧苯并芘诱导的恶变细胞增殖
- 2009年
- 目的用小发卡RNA(small hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默N-Ras基因表达,探讨N-Ras基因表达对二羟环氧苯并芘(BPDE)转化人支气管上皮细胞(16HBE-T)恶性性状的影响。方法将已建立的针对N-Ras基因的shRNA干扰表达质粒载体pGPU6/GFP/Neo-NRas-566转染16HBE-T细胞,经G418筛选,建立稳定沉默N-Ras基因转化细胞系。采用Western blot筛选最佳N-Ras基因沉默细胞系,用流式检测N-Ras沉默细胞周期变化,用软琼脂实验和裸鼠成瘤实验进行细胞表型分析。结果成功培养出稳定沉默N-Ras基因的16HBE-T细胞系,Western blot显示N-Ras蛋白抑制率最高达86%。流式分析发现稳定沉默N-Ras基因表达诱导转化细胞G0/G1期捕获,软琼脂实验和裸鼠成瘤实验发现稳定沉默N-Ras基因降低了体外恶性转化细胞的集落形成率、抑制了体内肿瘤细胞生长。结论N-Ras基因沉默可以降低转化细胞的细胞周期进程和细胞恶性性状表型,提示N-Ras基因在二羟环氧苯并芘诱导细胞恶变过程中具有重要作用。
- 周兰兰蒋义国谭爱军沈月兰刘林华杨巧媛
- 关键词：二羟环氧苯并芘小发夹RNAN-RAS基因
- CCK-8试剂在血液毒理学检测中的应用被引量：1
- 2013年
- 目的:优化CCK-8试剂盒在血液毒理学检测中的应用条件。方法:以CCK-8试剂盒标准检测法和两种优化的方法分别检测不同浓度的氢醌(hydroquinone,HQ)对TK6细胞增殖速度的影响,分别与计数法比较,分析影响实验检测的原因。结果:试剂盒标准方法中,HQ对CCK-8试剂的检测结果有影响,结果出现偏差,优化后的两种方法与计数法检测结果较为相似。结论:HQ对CCK-8试剂检测结果有影响,优化出一种适用于HQ血液毒理学检测的细胞增殖方法。
- 凌晓璇刘林华梁海荣程小广唐焕文
- 关键词：氢醌TK6细胞细胞增殖
