吴均
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
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- 人巨细胞病毒糖蛋白52kD抗原编码区段在大肠杆菌中高效表达
- 1992年
- 采用聚合酶链反应,从人巨细胞病毒重组质粒克隆pBH中扩增并分离了含糖蛋白52kD抗原编码区段;扩增产物经纯化和EcoR Ⅰ酶切后,与相同酶切的高效表达质粒pBV-220重组,构成含人巨细胞病毒糖蛋白52kD抗原编码区段的高效表达质粒pHcMV 52;用此重组表达质粒转化大肠杆菌JM101,经增殖和42℃温度诱导以及筛选。阳性克隆经12.5％SDS-PAGE表明,外源基因表达蛋白质量占菌体溶解液中蛋白质总量20％。蛋白质印迹(western blot)杂交证实该表达产物具有免疫原性。
- 吴均陈俊杰唐泽媛顾建人万大方马安卿曲淑敏李宏年
- 关键词：聚合酶链反应人巨细胞病毒糖蛋白
- 人巨细胞病毒B基因克隆的构建及其DNA限制性位点的微机系统分析被引量：2
- 1990年
- 作者以pBR322为载体,成功地构建了人巨细胞病毒(HCMV)B基因克隆,并用微机处理系统分析了B基因核苷酸序列的限制性位点。用BamHI酶解重组抽粒PAT153,电泳分离8.5kb片段,与经BamHI酶解、小牛肠碱性磷酸酶处理后的载体pBR322连接形成重组质粒pB_1。然后再用BamHI和HindⅢ双酶酶解pB_1,电泳分离5.1kb片段,与经双酶酶解后的载体pBR322连接构成HCMV B基因的pBH_1次级克隆。B基因核苷酸序列中存在13种限制性内切酶位点,片段大小在22bp至2.9kb之间。
- 吴均唐泽媛陈俊杰
- 关键词：人巨细胞病毒基因克隆
- 聚合酶链反应用于人巨细胞病毒B基因编码区段的体外扩增被引量：1
- 1991年
- 作者采用聚合酶链反应(PCR)成功地从含人巨细胞病毒B基因的重组质粒pBH_2DNA中扩增及分离了B基因编码区段及其产物糖蛋白52kd抗原编码区段。0.2μg的模板DNA经过30次循环,目的基因片段的扩增量达到10μg,足以用于酶谱分析及克隆的构建。
- 吴均陈俊杰唐泽媛顾建仁陈渊卿李岱宗
- 关键词：聚合酶链反应人巨细胞病毒B基因
- 人巨细胞病毒基因工程糖蛋白52kd抗原的临床初步应用
- 1992年
- 作者在构建人巨细胞病毒(HCMV)糖蛋白52 kd抗原编码区段的表达质粒pHCMV-52基础上,从含该克隆基因的大肠杆菌中分离并纯化其表达产物作为抗原,与已知ELISA-HCMV-IgM为阳性(12例)和阴性(4例)的血清反应,采用辣根过氧化物酶(HRP)标记的马抗人抗体取代同位素检测特异抗原—抗体复合物,两种方法结果一致者10例(10/12)。该临床初步结果显示,基因工程技术制备HCMV抗原可用于HCMV感染的临床诊断,并具有抗原制备方便、产量高、临床实用和易于推广等优点。
- 吴均唐泽媛陈俊杰顾建人万大方曲淑敏李宏年
- 关键词：人巨细胞病毒体外表达
- 人巨细胞病毒基因HindⅢ F片段重组质粒pAT153的转化鉴定及其临床应用被引量：1
- 1990年
- 作者采用常规质粒转化程序,将含人巨细胞病毒(HCMV)基因HindⅢ F大片段(20.7kb)的 质粒pAT153转化大肠杆菌HB101。转化效率24％。用同位素^(32)P标记探针筛选出阳性克隆。用改良碱 裂解法提取质粒DNA,产量和纯度高并省时,HCMV HindⅢ F片段与其他疱疹病毒DNA无同源性, 经同位素^(32)P标记作为探针,其检测灵敏度为0.25pg,适用于临床早期诊断HCMV感染,具有快速、灵 敏度和特异性高等优点。
- 吴均唐泽媛陈俊杰张秋萍
- 关键词：人巨细胞病毒重组DNA分子杂交
