和艳敏
- 作品数：62 被引量：78H指数：4
- 供职机构：浙江省血液中心更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金国家自然科学基金浙江省卫生高层次创新人才培养工程项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学经济管理更多>>
- 汉族人群白血病患者HLA-A、-B、-DRB1等位基因多态性和单体型频率分析
- 目的分析白血病患者HLA-A、-B和-DRB1位点在高分辨基因分型水平上的单体型频率及连锁不平衡特征。方法回顾性分析1330名白血病患者HLA高分辨分型情况,HLA-A、-B和-DRB1基因座高分辨分型方法采用聚合酶链反...
- 章伟严力行王炜陈男英和艳敏陶苏丹韩浙东何俊俊朱发明吕杭军
- MICB基因的克隆表达及其在抗体测定中的初步应用
- 2015年
- 目的：构建可行的MICB （ major histocompatibility complex class Ⅰ chain-related gene B）基因原核表达系统及蛋白质纯化体系,利用表达纯化蛋白建立ELISA方法初步应用于肾移植患者中MICB抗体的检测。方法外周血RNA经RT-PCR和特异性引物扩增获得MICB基因cDNA, MICB cDNA和原核表达载体pET-28a分别双酶切后连接构建重组表达载体,转染宿主菌E. coli BL21 DE3,IPTG诱导表达。亲和层析的Ni-NTA Spin纯化蛋白质,并通过Western blot鉴定。利用纯化蛋白建立ELISA法检测肾移植患者中MICB抗体。结果构建3个MICB常见等位基因2、3外显子的pET-28a-MICB重组表达体系,经Ni-NTA Spin纯化获得重组的MICB蛋白,Western blot鉴定。利用3个不同MICB蛋白质成功构建了ELISA方法,初步检测24份肾移植患者标本MICB抗体,显示不同的重组蛋白敏感性存在差异。结论本研究建立MICB基因克隆与体外表达技术,鉴定并纯化具有生物活性的蛋白质,同时建立MICB抗体检测的ELISA方法,为进一步研究MICB与移植免疫的关系提供基础资料。
- 应燕玲和艳敏陶苏丹何吉朱发明吕杭军
- 关键词：MICB蛋白表达纯化抗体测定
- mica基因的克隆及其在原核系统中的表达被引量：1
- 2010年
- 本研究构建mica基因原核表达系统并纯化MICA蛋白。利用外周血标本提取RNA,经RT-PCR获取mica基因cDNA。将mica cDNA经TOPO克隆连接构建克隆载体,然后将克隆重组载体和原核表达载体pET-28a经双酶切后进行连接构建重组表达载体,进而转染宿主菌E.coliBL21DE3进行表达。利用亲和层析的Ni-NTASpin纯化重组的MICA蛋白。结果表明:带有重组质粒pET-28a-mica的宿主菌经IPTG诱导表达后,以可溶性形式大量表达重组的MICA蛋白,经Ni-NTA Spin纯化后得到重组的MICA蛋白。结论:本研究构建了mica基因原核表达系统并纯化了MICA蛋白,为探讨MICA与移植免疫的关系奠定了基础。
- 和艳敏陶苏丹应燕玲朱发明吕杭军严力行
- 关键词：MICA基因基因克隆原核表达
- 高分辨精确组织配型技术的研制及其临床应用
- 朱发明严力行吕杭军和艳敏章伟何俊俊王炜韩浙东陈男英许先国刘晋辉
- 项目通过自行设计引物，系统建立了HLA-A、-B、-C基因1-7外显子双向测序的高分辨组织配型技术，并成功进行专利申请。项目建立了HLA-Ⅰ类基因克隆方法，可以将个体HLA-Ⅰ类基因的两个等位基因有效分离。建立了HLA-...
- 关键词：
- 关键词：等位基因
- 浙江汉族人群HLA-A、-B、-DRB1高分辨等位基因频率和单体型分析被引量：4
- 2010年
- 研究表明HLA具有高度连锁不平衡的遗传特点,不同民族或地区人群基因或单体型频率分布存在明显的不同,可作为不同种群特征性的遗传标志,目前有关不同人群HLA-A、-B、-DRB1基因频率和单体型分布情况已有众多的报道,但大多研究采用低分辨基因分型方法[1-3].本实验采用高分辨基因分型技术检测了1100例浙江汉族人群的HLA-A、-B、-DRB1位点,分析了人群HLA高分辨等位基因分布、单体型频率及连锁不平衡特征,现将结果报告如下 ：
- 何俊俊章伟和艳敏陶苏丹韩浙东朱发明吕杭军严力行
- 关键词：等位基因频率HLA-A单体型分析汉族人群基因分型方法
- 同源盒基因HoxA10的重组逆转录病毒载体及稳定包装细胞株的建立和鉴定被引量：1
- 2010年
- 本研究构建携带同源盒基因hoxA10的重组逆转录病毒载体,并建立稳定产毒的包装细胞株。通过PCR扩增获得hoxA10基因编码区全长序列,克隆至逆转录病毒载体MSCVneo,并测序鉴定插入的hoxA10基因。将重组载体及空载体经脂质体分别转染包装细胞系PT67,以G418筛选稳定产毒细胞株。收集病毒悬液并测定病毒滴度。结果表明:重组逆转录病毒载体MSCVneo插入的hoxA10基因序列正确。将筛选所得的高效产毒细胞株命名为PT67/MSCVneo、PT67/MSCVneo-hoxA10。测定病毒滴度分别为5×105CFU/ml、4×104 CFU/ml。结论:成功构建了同源盒基因hoxA10的重组逆转录病毒载体,建立了稳定、高效、准确产生逆转录病毒的细胞株,为探讨hoxA10基因在造血干细胞的增殖和分化功能提供了实验基础。
- 和艳敏朱发明严力行
- 关键词：同源盒基因HOXA10逆转录病毒载体
- 高效液相色谱法测定α1,2岩藻糖基转移酶活性
- 2011年
- 目的:利用反相高效液相色谱技术建立α-1,2岩藻糖基转移酶活性的测定方法。方法:反应混合物处理后进样,以90%的20 mmol/L KH2PO4(含5%四丁基溴化铵)和10%甲醇为流动相,254 nm波长下检测底物β-苯酰半乳糖苷的减少量。结果:方法回收率≥97%,变异系数为1.66%,准确度和精密度都较高。β-苯酰半乳糖苷峰单一,无其它杂峰干扰。反应管与对照管相比,β-苯酰半乳糖含量明显降低。结论:建立的反相高效液相色谱法测定α-1,2岩藻糖基转移酶方法可靠,适合于常规检测和体外表达研究。
- 陶苏丹应燕玲和艳敏洪小珍许先国朱发明吕杭军严力行
- 关键词：反相高效液相色谱活性测定
- α-1，2岩藻糖基转移酶基因293C〉T和658C〉T突变真核细胞稳定表达的研究被引量：4
- 2011年
- 目的建立α-1，2岩藻糖基转移酶基因（α-1，2-fucosyltransferase gene，FUT1）293C〉T和658C〉T突变真核表达细胞，阐明FUT1突变引起H抗原减弱的机制。方法抽提类孟买型先证者基因组DNA扩增FUT1全长编码序列，扩增片段与真核表达载体peDNA3．1连接构建重组表达质粒。采用脂质转染技术将重组质粒转染COS7细胞并进行稳定表达筛选。采用实时荧光定量PCR检测mRNA表达量，应用HPLC检测酶活性，采用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel eieetrophoresis，SDS-PAGE）和Western印迹技术鉴定蛋白。结果构建了pcDNA3．1-FUT1野生型、pcDNA3．1-FUT1293C〉T、pcDNA3．1-FUT1658C〉T真核表达重组质粒，转染后通过G418筛选获得了稳定表达FUTj的COS7细胞。以野生型重组体转染细胞中FUT1mRNA量作为对照，293C〉T和658C〉T重组体转染细胞FUT1mRNA量分别为野生型的97．10％和104．74％。经SDS—PAGE电泳和Western印迹检测显示细胞表达相对分子质量约46000大小的目的蛋白片段，pcDNA3．1-FUT1野生型重组体转染细胞表达蛋白可催化相应的酶促反应，而peDNA3．1-FUT1293C〉T、pcDNA3．1-FUT1658C〉T转染细胞蛋白完全失去酶活性。结论体外实验提示293C〉T和658C〉T突变并不影响FUT1mRNA转录和蛋白生成，但表达蛋白的酶活性明显下降，从而导致H抗原生成减弱。
- 陶苏丹和艳敏洪小珍应燕玲朱发明吕杭军严力行
- 关键词：类孟买型基因突变酶活性
- PCR-SBT检测HLA-C座位1-7外显子序列鉴别HLA-C＊07：01：01G和C＊07：02：01G组等位基因被引量：1
- 2012年
- 本研究旨在探讨区分人类白细胞抗原(HLA)-C*07:01:01G和HLA-C*07:02:01G组内等位基因,并分析其与HLA-B的连锁情况。通过收集HLA-C*07:01:01G组和HLA-C*07:02:01G组标本,采用聚合酶链反应测序分析方法(PCR-SBT)检测HLA-C座位第1-7外显子编码序列,并采用PCR-SBT方法对标本进行HLA-B基因分型。结果表明,13例HLA-C*07:01:01G组标本中,4例(30.8%)标本为HLA-C*07:01:01,9例(69.2%)标本为HLA-C*07:06;连锁分析显示,HLA-C*07:06与HLA-B*44:03高度连锁。102例HLA-C*07:02:01G组标本全部为HLA-C*07:02:01;连锁分析显示,HLA-C*07:02:01与HLA-B*51:01、B*46:01、B*39:01、B*40:01、B*38:02、B*15:02高度连锁。结论:HLA-C*07:01:01G组中发现存在HLA-C*07:01:01和HLA-C*07:06,而HLA-C*07:02:01G组中以HLA-C*07:02:01为主导。
- 吕杭军章伟何俊俊和艳敏王炜韩浙东陈男英朱发明严力行
- 荧光定量聚合酶链反应检测血液制品中细菌污染方法的建立被引量：2
- 2011年
- 目的建立快速检测血液制品中细菌污染的荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法。方法以大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌分别作为革兰阴性菌和革兰阳性菌代表菌,模拟不同程度细菌污染的血液标本,利用3种不同抽提方法提取细菌基因组DNA进行荧光定量PCR(FQ-PCR);以大肠埃希菌系列浓度梯度基因组DNA为模板建立标准曲线,将14株不同菌株模拟细菌污染的血液标本进行FQ-PCR检测。结果根据Ct值和扩增效果,3种基因组抽提方法中以DNA过柱纯化法效果最佳;以大肠埃希菌梯度稀释(1.2×108)～(1.2×102)CFU/ml进行FQ-PCR反应,得到标准曲线为Y=-0.2211X+8.80(R2=0.998);14株不同细菌均能在103CFU/ml检测出阳性,但Ct值差异有统计学意义。结论建立了检测血液制品中细菌污染的荧光定量诊断技术,该方法快速可靠,在预防和诊断输血相关性细菌污染上具有一定的应用价值。
- 应燕玲陶苏丹和艳敏许先国朱发明吕杭军严力行
- 关键词：血液细菌污染荧光定量聚合酶链反应分子诊断
