唐开福
- 作品数：12 被引量：28H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市卫生局科研项目重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 应用RNAi文库筛选HBV复制相关基因被引量：3
- 2008年
- 深入研究HBV复制机理,筛选参与HBV复制的基因,可能为开发抗乙肝病毒新药提供新的靶点.本文拟建立一种筛选HBV复制相关基因的方法:RNAi文库感染HepG2.2.15细胞后,利用免疫磁珠收集HBsAg表达降低的细胞,提取DNA,PCR扩增siRNA编码序列,将PCR产物克隆入T-easy载体,随机挑选克隆测序,发现DDB1基因可能参与HBV复制.本试验建立了一种筛选HBV复制相关基因的方法,为大规模全基因组筛选参与HBV复制的基因奠定了基础.
- 曾贵利沈薇吴进峰任红孙航贺彩霞唐开福
- 长片段RNA抑制HepG2.2.15细胞中HBV基因的表达和复制
- 2011年
- 目的 评估长的反义RNA干扰片段在培养细胞株中对HBV复制的抑制效应.方法将HBV基因组S区的全部核苷酸序列插入至pTARGETTM载体中,并将重组载体转染入HepG2.2.15细胞中.用酶联免疫吸附法检测HBsAg与HBeAg水平,用荧光定量PCR法检测HBVDNA水平.对数据采用多个独立样本Kruskal-Wallis检验与两两比较的Mann-Whitney U检验.结果 经过处理后,HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg表达量（A值）在HBS2组（携带长片段反义RNA）为0.621±0.027,在HBS4组（携带正义RNA）为3.399±0.018,对照组为2.232±0.187;HBeAg表达量（A值）在HBS2组、HBS4组和对照组分别为0.749±0.019、1.548±0.025和1.570±0.044; HBV DNA水平（×104拷贝/ml）在HBS2组、HBS4组、对照组分别为1.597±0.082、3.381±0.297和3.610±0.063.与对照组相比,HBS2组HBsAg、HBeAg和HBV DNA表达量均降低,统计量Z值均为-2.309,P值均＜0.05; HBS4组HBsAg表达量增高（Z=-2.309,P＜0.05）,而HBeAg和HBV DNA表达量无明显差异,统计量Z值分别为-0.866、-1.155,P值均＞0.05.结论 长片段反义RNA能抑制HBV基因的表达和病毒复制.
- 田绿何松李璇胡文艳彭湃澜王峰高昌益任红唐开福
- 关键词：反义RNA
- γδT细胞在疾病中的作用被引量：1
- 2007年
- γδT细胞是皮肤表皮内淋巴细胞和粘膜组织上皮内淋巴细胞的主要成分之一，为非特异性免疫细胞。活化的γδT细胞具有较强的杀伤活性，具有抗感染、抗肿瘤作用；γδT细胞还可以维持免疫耐受，调节免疫应签，异常可导致自身免疫性疾病的发生。因此尽管γδT细胞在人类庞大复杂的免疫体系中数量较少，但却具有不可替代的重要功能。
- 石庆凤任红唐开福
- 关键词：ΓΔT细胞疾病
- 脱氧氮杂胞苷诱导HepG2细胞表达主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A被引量：1
- 2009年
- 目的观察主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A（MICA）在HepG2与L02细胞株中表达的差异及脱氧氮杂胞苷（5-aza-dC）对HepG2细胞株MICA表达的影响，探讨毛细血管扩张眭共济失调突变蛋白（ATM）依赖的DNA损伤途径与5-aza-dC调节MICA表达的关系。方法同时接种并培养L02和HeDG2细胞，在同一时间点收取细胞，流式细胞仪检测细胞膜MICA蛋白表达水平；不同浓度5-aza—dC（0．1、1．0、5．0mmol／L）作用于HepG2细胞不同时间（24、48、72、96h）后，定量PCR检测MICA mRNA水平以寻找5-aza-dC最佳作用浓度和时间；ATM特异性抑制剂咖啡因或RNA干扰技术干扰ATM表达，定量PCR检测细胞mRNA水平，流式细胞术检测细胞膜MICA蛋白表达水平。结果数据比较采用Kruskal-Wallis和Mean-Whitney U方差分析。结果流式细胞结果显示，HepG2细胞高水平表达MICA，而正常肝细胞L02几乎不表达MICA；5-aza—dC处理可上调HepG2细胞MICA的表达（x^2=7．20，P〈0．05），这种上调作用可被ATM特异性阻滞剂咖啡因和ATM特异的小分子干扰RNA所阻断（U=0．00，P〈0．05）。结论MICA在正常肝细胞株中无表达，在肝癌细胞株中高表达；5-aza-dC可诱导HepG2细胞MICA的表达，其机制可能与5-aza-dC引起的ATM依赖的DNA损伤途径有关。
- 吴进峰曾贵利沈薇杨梅王峰田绿李璇胡文艳李小平任红唐开福
- 关键词：DNA损伤主要组织相容性复合物脱氧胞苷
- 细胞黏附对干扰素、5-氟尿嘧啶诱导细胞凋亡的影响
- 2011年
- 目的探讨细胞黏附作用对干扰素、5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导细胞凋亡的影响。方法采用HepG2、HEK293细胞株,常规96孔板培养细胞,分为空白不加药(A组)、多聚赖氨酸包被预处理+贴壁后加药(B组)、贴壁后加药(C组)、未贴壁就加药(D组)、未贴壁就加药和Fn抗体(E组)。选用干扰素、5-Fu分别作用各组细胞,MTT法测定各组增殖抑制率和DNA Fragmentation ELISA测定凋亡率,Western blot检测干扰素诱导各组PKR蛋白水平的表达。结果经多聚赖氨酸包被预处理后,细胞对药物的敏感性减弱,MTT法显示抑制率:干扰素作用G2细胞,B、C组抑制率分别为(27.24±31.77)%、(39.04±14.88)%(P<0.05);5-Fu作用G2细胞,B、C组抑制率分别为(30.61±11.26)%、(32.94±20.93)%(P<0.05);干扰素作用293细胞,B、C组抑制率分别为(32.02±23.48)%、(46.22±25.20)%(P<0.05);5-Fu作用293细胞,B、C组抑制率分别为(14.07±21.91)%、(31.61±31.49)%(P<0.05)。DNAFragmentationELISA示凋亡率:干扰素作用G2细胞,B、C组凋亡率分别为(0.425±0.038)、(0.535±0.039)(P<0.05);5-Fu作用G2细胞,B、C组凋亡率分别为(0.337±0.016)、(0.417±0.075)(P<0.05);干扰素作用293细胞,B、C组凋亡率分别为(0.394±0.033)、(0.499±0.018)(P<0.05);5-Fu作用293细胞,B、C组凋亡率分别为(0.406±0.024)、(0.504±0.069)(P<0.05)。而阻断纤维黏连蛋白(Fn),细胞对药物的敏感性增强,MTT法显示抑制率:干扰素作用G2细胞,D、E组抑制率分别为(49.90±11.90)%、(66.86±24.66)%(P<0.05);5-Fu作用G2细胞,D、E组抑制率分别为(45.96±21.27)%、(68.76±31.41)%(P<0.05);干扰素作用293细胞,D、E组抑制率分别为(58.98±32.96)%、(76.72±21.69)%(P<0.05);5-Fu作用293细胞,D、E组抑制率分别为(47.02±26.84)%、(62.60±29.79)%(P<0.05)。DNAFragmentationELISA示凋亡率:干扰素作用G2细胞,D、E组凋亡率分别为(0.699±0.023)、(0.801±0.040)(P<0.05);5-Fu作用G2细胞,D、E组凋亡率分别为(0.581±0.023)、(0.721±0.027)(P<0.05);干扰素作用293�
- 胡文艳高建李璇田绿彭湃澜王峰高昌益任红唐开福
- 关键词：细胞黏附细胞凋亡细胞增殖药物敏感
- RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU对PKR磷酸化的调节作用被引量：1
- 2010年
- 目的研究ALU自身的RNA聚合酶Ⅲ启动子对RNA聚合酶Ⅱ转录的影响,探讨RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU对PKR磷酸化的调节作用。方法将ALU全基因序列插入pcDNA3.1(-)载体的CMV启动子(一个RNA聚合酶Ⅱ启动子)的下游,构建重组质粒pcDNA3.1-ALU;转染HEK293细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR筛选稳定表达ALU的细胞;用干扰素处理稳定表达ALU序列的细胞,Western blot法检测PKR的磷酸化水平。结果ALU全基因序列插入pcDNA3.1载体的CMV启动子直接下游,能够被RNA聚合酶Ⅱ有效转录;在稳定表达ALU的HEK293细胞中,加干扰素与未加干扰素组PKR的磷酸化水平均明显高于相应的HEK293细胞对照组。结论ALU自身的RNA聚合酶Ⅲ启动子对RNA聚合酶Ⅱ转录无明显影响,但与RNA聚合酶Ⅲ启动下转录的ALU不同,RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU失去了对干扰素的拮抗作用,反而可以通过形成双链RNA的方式激活PKR的活性。
- 杨梅沈薇吴进峰曾贵利王峰任红唐开福
- 关键词：磷酸化干扰素
- 肝癌细胞HepG2间的P-糖蛋白传递作用被引量：2
- 2009年
- 目的探讨肝癌细胞株HepG2细胞间是否存在P-糖蛋白（P—gp）的传递及P—gp与多药耐药基因（mdr1）的关系。方法将pSUPER．neo＋GFP质粒转染至HepG2细胞（命名为HepG2／GFP），并与阿霉素耐药HepG2细胞（命名为HepG2／ADM）混合培养。激光共聚焦显微镜观察肝癌细胞间P-gp的传递。免疫磁珠法分离混合培养细胞，收集原HepG2／GFP细胞（命名为HepG2／aqMDR），采用Western blot分析HepG2、HepG2／ADM、HepG2／GFP、HepG2／aqMDR细胞的P—gp表达水平，同时应用实时荧光定量PCR分析这些细胞mdr1 mRNA的表达水平。多样本均数比较用单因素方差分析，进一步两两比较用SNK—q检验。结果荧光显微镜下可见大量带绿色荧光的稳定克隆。激光共聚焦显微镜下见HepG2／aqMDR细胞以黄色荧光为主，而HepG2／GFP以绿色荧光为主，HepG2／ADM以红色荧光为主。Western blot检测结果显示HepG2／aqMDR细胞中P—gp表达水平低于HepG2／ADM，但明显高于HepG2／GFP（q=35．07，P〈0．05）与HepG2（q=36．87，P〈0．05）。实时荧光定量PCR结果显示，HepG2／ADM细胞中mdr1 mRNA表达水平较高，而HepG2／aqMDR、HepG2、HepG2／GFP三组细胞中mdr1的mRNA表达水平差异没有统计学意义（F=2．30，P〉0．05）。结论P—gp可以从耐药肝癌细胞传递至敏感肝癌细胞，这一现象为进一步研究肝癌多药耐药机制提供了新的思路。
- 陈龙左国庆吴进峰曾贵利李涛刘作金唐开福
- 关键词：P糖蛋白
- 慢性乙型肝炎患者年龄、血脂代谢与HBV-DNA的相关性被引量：4
- 2011年
- 目的分析慢性乙型肝炎患者年龄、血脂代谢与HBV-DNA水平之间的相关性。方法对2007年11月～2009年10月在我院感染科住院的788例慢性乙型肝炎HBV-DNA阳性患者(本研究中将HBV-DNA滴度大于1×103拷贝/ml定义为HBV-DNA阳性)的临床资料进行回顾性分析。用Spearman秩相关分析及多重线性回归分析患者年龄及血脂与HBV-DNA的相关性。结果 Spearman秩相关分析显示,在慢性乙型肝炎HBV-DNA阳性患者中,HBV-DNA水平与患者年龄呈负相关,与血脂中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)及载脂蛋白A-(IApoA-I)呈正相关;多重线性回归分析显示,HBV-DNA水平与患者年龄、血脂中ApoA-I存在线性依存关系。结论慢性乙型肝炎HBV-DNA阳性患者的HBV-DNA水平与其年龄呈负相关,与ApoA-I呈正相关。
- 彭湃澜何松胡文艳李璇田绿任红唐开福
- 关键词：年龄因素血脂
- TSA对不同肝癌细胞株增殖和凋亡的作用及其对HBV复制的影响被引量：10
- 2008年
- 目的:比较组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylase,HDAC)抑制剂HDAC曲古抑菌素A(Trichostain A,TSA)对不同肝癌细胞株和正常肝细胞株增殖和凋亡的作用。初步研究TSA对HBV复制的影响。方法:应用四氮唑蓝(MTT)法,DNA琼脂糖凝胶电泳检测经不同浓度TSA处理过的3种肝癌细胞株HepG2、QGY7701、HepG2.2.15和正常肝细胞株L02,观察细胞增殖和凋亡的改变。用微离子酶联免疫法检测TSA处理组和对照组HepG2.2.15细胞上清中HBsAg和HBeAg的含量,实时荧光定量PCR检测细胞上清中HBV DNA含量,初步探讨TSA对HBV复制的影响。结果:TSA在一定浓度范围内能明显抑制不同肝癌细胞株的增殖,呈剂量依赖关系。对正常肝细胞株L02的增殖无明显影响。DNA凝胶电泳结果显示:在TSA处理组的3种肝癌细胞株HepG2、QGY7701、HepG2.2.15中可观察到细胞凋亡特异的DNA梯形带,然而,在对照组及正常肝细胞株中未见DNA梯形带。经TSA处理后的HepG2.2.15细胞上清中HBsAg、HBeAg及HBV DNA的含量均高于对照组1倍以上(P<0.05)。结论:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA虽然可抑制肝癌细胞增殖并诱导凋亡,但是,TSA刺激HBV的复制。因此,对HBV阳性的肝癌患者,应尽量避免使用TSA。
- 谢静王锋梅浙川唐开福任红
- 关键词：曲古抑菌素A肝癌细胞株凋亡HBV
- HBV无症状携带者树突状细胞的分化及功能研究被引量：4
- 2009年
- 目的研究HBV无症状携带者树突状细胞的分化及功能。方法抽取健康对照者(A组)、HBV无症状携带者(B组)外周静脉血,经密度梯度离心法分离获得PBMC,用TNF-αI、L-10分别和rhIL-4r、hGM-CSF刺激培养,获得:成熟树突状细胞(mDC)、不成熟树突状细胞(imDC)。rhIL-4r、hGM-CSF刺激培养获得树突状细胞(DC)作组内对照。imDC组加入TNF-α刺激,检验imDC的稳定性。流式细胞仪检测各组反映树突状细胞成熟度的各种分子。结果A、B组内mDC细胞膜表达HLA-DR,HLA-ABC分子,分泌的IL-12p70与imDC、DC、imDC+TNF-α组相比明显增加;A、B组间mDC的HLA-DR,HLA-ABC表达无显著性差异,IL-12p70分泌差异有统计学意义(P<0.01)。imDC的HLA-ABC、HLA-DR低表达,IL-12p70分泌也较低,与本组内DC比较结果差异有统计学意义(P<0.01);A、B组间imDC的HLA-DR,HLA-ABC低表达,IL-12p70分泌差异无统计学意义。imDC加入TNF-α后HLA-ABC、HLA-DR仍低表达,IL-12p70分泌低于本组内DC,结果差异有统计学意义(P<0.01);A、B组间结果无显著性差异。结论在A、B组,TNF-α均有效促进DC成熟为mDC,IL-10均抑制DC的成熟,不受A、B组细胞来源影响。mDC分泌大量IL-12p70,并在B组低于A组,说明B组mDC存在一定的功能不足。
- 石庆凤陈敏曾维群彭明利胡鹏胡怀东陈学华孙航唐开福刘杞任红
- 关键词：乙型肝炎病毒树突状细胞肿瘤坏死因子-Α白细胞介素-10
