- 人胰腺细胞cDNA文库中丙型肝炎病毒NS4B结合蛋白基因的筛选被引量：4
- 2011年
- 目的从人胰腺细胞cDNA文库中,采用酵母双杂交方法筛选HCV NS4B包膜蛋白的相互作用蛋白。方法人胰腺细胞cDNA文库先进行扩增,随后纯化及鉴定,然后将鉴定好的人胰腺细胞cDNA文库质粒转化入酵母菌株Y187。构建pGBKT7-NS4B作为诱饵质粒,随之转化酵母菌株AH109,用色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)筛选阳性菌落。配合两种重组酵母菌株AH109与Y187,用四缺培养基及X-α-gal筛选蓝色酵母菌落,提取相应质粒,电转化感受态菌DH5α后再提取质粒,测序仪测序,结果使用PUBMED进行序列比对。结果成功构建pGBKT7-HCV NS4B重组质粒,并从人胰腺cDNA文库中筛选出7种与HCV NS4B蛋白相结合的蛋白基因,包括CDK5RAP3、辅脂肪酶、胰石蛋白、凝乳蛋白、弹性蛋白酶2A、糜蛋白酶和胆盐刺激酯酶。结论 HCV NS4B蛋白可能通过与所筛选出前述蛋白中参与代谢过程的相关蛋白结合,影响糖、脂类代谢过程。
- 温少芳张锦前孙荣华李卓高萍王琦刘顺爱成军
- 关键词：肝炎病毒属基因文库载体蛋白质类双杂交系统技术NS4B
- HBV表面抗原大蛋白与人胰腺突触角蛋白6之间的相互作用
- 2012年
- 目的验证HBV表面抗原大蛋白(LHBs)与人胰腺突触角蛋白6(STX6)在细胞内是否存在相互作用,为进一步研究HBV影响糖、脂代谢机制奠定研究基础。方法构建真核表达质粒pACT-STX6,采用哺乳动物双杂交技术验证LHBs与STX6之间的相互作用。结果实验组和各阴性对照组相对荧光素酶活性值均存在差异,且均具有显著统计学意义(P<0.01)。结论 LHBs与人胰腺STX6在胰腺细胞内存在相互作用。
- 张海栋张锦前赵龙凤贾因棠王琦刘顺爱温少芳孙荣华李卓成军
