戚扬
- 作品数：28 被引量：69H指数：4
- 供职机构：解放军第302医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HCV HVR1相关基因诱导小鼠免疫反应的比较被引量：3
- 2008年
- 目的对小鼠进行两种基因免疫方法的比较:分别以真核质粒pcDN3.1(+)为载体和以伤寒减毒活菌苗为载体,携带丙肝病毒高变区1(HVR1)相关模拟表位的DNA序列,诱导细胞免疫应答,以寻找较好的疫苗免疫途径。方法根据HCV HVR1模拟表位的肽序列合成DNA序列,并将其连接到pcDN3.1(+)(pcDN3.1-SP)真核质粒上,然后用重组质粒转化伤寒减毒活菌苗Ty21a(Ty21a-SP)。Ty21a-SP和pcDN3.1-SP分别经口服和肌注免疫小鼠后,杀鼠、分离脾细胞,脾细胞经混合肽刺激后,用流式细胞仪检测CD8+IFN-γ+细胞;用非放射性MTS法检测细胞增殖反应;以非放射性LDH法检测CTL反应。结果对小鼠用pcDN3.1-SP和Ty21a-SP免疫后,取脾淋巴细胞经混合肽刺激后,明显增殖,CD8+IFNγ-+淋巴细胞比例增高,并诱导较强的CTL反应,但pcDN3.1-SP免疫后的上述反应较Ty21a-SP免疫弱。结论使用伤寒减毒活菌苗作为载体进行基因免疫有利于产生细胞免疫反应。
- 迟淑萍舒翠莉戚扬赵军李伯安程云
- 关键词：模拟表位伤寒疫苗细胞免疫反应基因免疫
- 一株变异SARS冠状病毒N蛋白的原核表达及活性测定被引量：1
- 2004年
- 目的 :克隆编码严重急性呼吸综合征冠状病毒 (SARS CoV)N蛋白的DNA ,构建原核表达质粒pGEX 2T/N ,并诱导表达。方法 :采用RT PCR方法从病毒培养液中获得N基因片段 ,并克隆入T EASY载体中。经PCR、双酶切鉴定后 ,测序。将N蛋白基因序列定向插入原核表达载体pGEX 2T中 ,表达融合蛋白。用表达产物与抗SARS CoV抗体阳性血清做Westernblot。结果 :N蛋白DNA测序的结果与GenBank比对缺失 2 0个bp。GST N融合蛋白以可溶形式表达。Westernblot检测表明 ,其与抗SARS CoV抗体阳性血清的反应呈阳性。结论 :成功地构建原核表达质粒pGEX 2T/N ,并表达GST N融合蛋白 ,为下一步的研究奠定了基础。
- 戚扬郑宇舒翠莉姜丽胡燕貌盼勇程云
- 关键词：严重急性呼吸综合征N蛋白
- 丙型肝炎病毒高变区1模拟表位7肽刺激小鼠脾淋巴细胞增殖
- 2010年
- 目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)高变区1(HVR1)模拟表位7肽在体外刺激小鼠经脾内直接免疫后脾淋巴细胞增殖的变化。方法:选用经7肽脾内直接注射免疫的小鼠,分离脾细胞后,脾细胞再经7肽刺激,应用单溶液细胞增殖检测方法,体外检测7肽在不同浓度和不同培养时间点,对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。结果:7肽刺激免疫小鼠脾淋巴细胞后,实验组的脾淋巴细胞增殖反应与对照组相比有明显促进作用。结论:HCV高变区1模拟表位7肽在体外对脾内直接免疫小鼠脾淋巴细胞具有一定的促增殖作用。
- 迟淑萍汪辰戚扬由莉越孙杰尹笛李瑞生程云
- 关键词：模拟表位脾淋巴细胞小鼠增殖
- 丙型肝炎高变区1合成肽对免疫小鼠脾淋巴细胞增殖作用的研究被引量：1
- 2010年
- 目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)高变区1(HVR1)模拟表位7肽(7P)在体外免疫小鼠后,小鼠脾淋巴细胞的增殖情况。方法20只小鼠随机分为实验组和对照组(n=10)。实验组小鼠皮下多点注射7P(500μl/只,含量5μg),对照组皮下多点注射等量生理盐水,单溶液细胞增殖法(MTS)检测前一天脾内直接注射7P(200μl/只,含量2.5μg)加强。收集脾淋巴细胞,分别加入不同浓度(6.25、12.50、25.0、50.0、100.0μg/ml)的7P,培养24、48、72h后光镜下观察细胞生长情况,应用MTS法检测小鼠脾淋巴细胞增殖活力,并计算增殖率。结果实验组小鼠脾淋巴细胞加入7P后第2天,镜下观察见细胞生长良好,可见散在的细胞增殖集落,对照组未见明显集落出现。与对照组比较,实验组经不同浓度7P诱导后,脾淋巴细胞的增殖活性均明显增强(P<0.01)。培养72h,7P诱导浓度为12.5μg/ml时,对脾淋巴细胞的增殖具有最佳促进效果,增殖率达到184.92%。在相同诱导浓度下,7P的最佳诱导效应随培养时间的延长而增加。结论合成的HVR1模拟表位7P在体外对免疫小鼠脾淋巴细胞具有一定的增殖作用。
- 迟淑萍汪辰汪力亚孙杰戚扬由莉越李瑞生程云
- 关键词：表位
- 慢性HCV感染患者PBMC体外Th1类细胞因子分泌及其相关因素分析被引量：4
- 2007年
- 目的:研究慢性HCV(丙型肝炎病毒)感染患者外周血单个核细胞(PBMC)体外Th1类细胞因子的分泌,进一步了解HCV感染慢性化和肝损伤机制.方法:体外培养慢性HCV感染患者PBMC72h后,ELISA检测培养上清Th1类细胞因子(IL-2,IFN-γ,TNF-α),荧光定量PCR检测患者血清HCV RNA含量,RT-PCR检测HCV RNA亚型.结果:与正常人相比,IFN-γ在HCV RNA阴性患者中明显增高,而在RNA阳性患者中无明显升高.TNF-α则不论RNA滴度的高低均较正常人显著增高.RNA阳性患者ALT(丙氨酸氨基转移酶),AST(门冬氨酸氨基转移酶)水平明显高于阴性患者.不同HCV基因型感染的患者IFN-γ,TNF-α的分泌无显著差异.结论:IFN-γ在清除病毒中起重要作用,TNF-α是引起肝脏损伤的重要因素之一.
- 李跃旗许鹏辉苏海滨迟淑萍朱雷戚扬李金波程云
- 关键词：C型肝炎样病毒属外周血单个核细胞TH1类细胞因子
- 抗SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备和初步应用被引量：6
- 2005年
- 目的:研制抗SARSCoVN蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法:以纯化的GSTN免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗SARSCoVN蛋白mAb;用免疫双扩散鉴定Ig亚类;Westernblot和免疫组化鉴定mAb的特异性;间接ELISA检测mAb的腹水效价、相对亲和常数。结果:获得1株可分泌特异性mAb的抗SARSCoVN蛋白的杂交瘤细胞系3E10H,Ig亚类为IgG2b;其腹水效价为8×10-5;其相对亲和力1.725×10-10mol/L,Westernblot和免疫组化阳性。结论:获得特异性抗SARSCoVN蛋白的mAb,为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件。
- 孙杰文翠容戚扬李靖汪莉亚周继文程云
- 关键词：N蛋白单克隆抗体
- SARS患者肝脾心肺组织中病毒的分离和鉴定被引量：2
- 2004年
- 目的;从SARS患者尸检肝、脾、心、肺组织中分离病毒并鉴定及评定中和抗体与SARS病程的关系. 方法:取各组织100g/L匀浆后的上清,接种非洲绿猴肾单层细胞,观察细胞病变;采用RT-RCR及序列分析等技术鉴定病毒并研究其生物学特性;将收集的SARS患者早期和恢复期血清做中和实验. 结果:分别从SARS患者尸检肝、脾、心、肺等组织中分离到致细胞病变的病毒,用各组织的病变细胞提取的RNA为模板分别扩增出部分S区和N区的DNA片段,经DNA序列分析表明所有S区和N区的核苷酸序列均与GenBank上的SARS冠状病毒该区域的序列完全一致,中和实验显示所做10份SARS患者双份血清均有中和抗体效价的4倍升高,轻症患者中和抗体产生时间明显早于重症患者. 结论:从SARS患者尸检肝、脾、心、肺组织中分离到的均为SARS冠状病毒,证实SARS冠状病毒可直接侵害患者的肝、脾、心、肺脏器.所有SARS患者均可产生中和抗体,中和抗体产生时间与疾病进程有一定关系.
- 朱雷胡燕沈宏辉戚扬赵景民辛绍杰赵敏程云赵根田貌盼勇
- 关键词：SARS患者中和抗体肺组织肝脾SARS冠状病毒DNA片段
- 抗线粒体抗体(M2)型ELISA检测试剂盒(IgG)的研制和应用
- 赵军程云舒翠莉何卫平李伯安苏海滨游绍莉李跃旗戚扬王国志
- 原发性胆汁性肝硬化（PBC）是一种原因不明的，以肝内小胆管不可逆破坏为特征的自身免疫性胆汁淤积性肝脏疾病，其本身的肝脏组织病理，生化指标和临床表现均缺少特异性。抗线粒体抗体（AMA）或抗线粒体M2型抗体是目前唯一的PBC...
- 关键词：
- 关键词：试剂盒原发性胆汁性肝硬化
- 抗HCV HVR1模拟合成肽单克隆抗体的制备及特性鉴定被引量：3
- 2011年
- 目的:制备抗-HCV高变区1(HVR1)合成肽单克隆抗体(mAb),并对其特性进行鉴定。方法:以固相合成的HCV HVR1合成肽与牛血清白蛋白(BSA)偶联后,免疫8周龄的BALB/c小鼠。采用杂交瘤技术,取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,制备抗-HCV HVR1 mAb。经HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化后,用相关的试剂盒鉴定小鼠mAb的Ig亚类;经中和抑制后用ELISA法检测mAb的特异性;用间接ELISA法检测mAb腹水的效价及相对亲和常数。结果:获得1株可分泌抗-HCV HVR1合成肽特异性mAb的杂交瘤细胞1A9G9F11。该株mAb的Ig亚类为IgG3;腹水效价为3.125×10-5;相对亲和常数为1.0×106L/mol。该株mAb与HBsAg、HBeAg、HBcAg、HAAg、牛血清白蛋白、酪蛋白和胸腺5肽均无交叉反应,与HCV HVR1合成肽-牛血清白蛋白出现特异性反应。结论:成功地建立了1株可分泌抗-HCV HVR1 mAb的杂交瘤细胞1A9G9F11,为进一步的实验研究提供了重要的制剂。
- 孙杰戚扬迟淑萍由莉越李瑞生刘佳朱雷程云
- 关键词：合成肽单克隆抗体
- 乙型肝炎病毒e抗原在肝细胞内作用蛋白AK026018亚细胞定位的研究
- 2005年
- 目的:确定肝细胞内乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)作用蛋白AK026018的亚细胞定位,初步研究该蛋白的生物学功能。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术,从HepG2细胞中扩增编码AK026018蛋白的全基因,构建真核表达载体pEGFPAK,转染HepG2、293T细胞系,在激光共聚焦荧光显微镜下与转染空载体pEGFPN1的细胞比较观察。结果:经限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定构建的重组表达载体正确。通过激光共聚焦荧光显微镜观察,转染了重组载体pEGFPAK的细胞绿色荧光信号较集中分布于胞浆中,而空载体pEGFPN1转染的细胞绿色荧光信号在整个细胞中均匀分布。结论:成功分离了AK026018全基因序列并构建了真核表达载体,该基因表达产物亚细胞定位于细胞浆中。
- 李伯安刘岩李靖舒翠莉何卫平戚扬侯俊毛远丽程云
- 关键词：基因表达真核表达
