朱帮福
- 作品数：33 被引量：88H指数：5
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- 重组人骨形成蛋白-2对细胞成骨分化的作用被引量：11
- 2002年
- 目的进一步探讨ｒｈＢＭＰ－２的促细胞成骨分化作用，以期找到合适的成骨分化标志作为ｒｈＢＭＰ－２的定量活性测定指标。方法 首先表达制备ｒｈＢＭＰ－２，用小鼠股部肌袋包埋法进行诱骨活性实验，然后检测ｒｈＢＭＰ－２作用后的骨髓基质细胞（ＭＳＣ）、ＮＩＨ３Ｔ３和Ｃ２Ｃ１２等３种细胞的碱性磷酸酶（ＡＬＰ）和骨钙素（ＯＣ）、细胞总蛋白合成量以及细胞增殖的变化。结果 ｒｈＢＭＰ－２具有良好的诱导骨形成的活性，可增加３种细胞的ＯＣ含量和蛋白合成量，对ＭＳＣ的ＡＬＰ活性变化影响明显，且可促进ＭＳＣ的增殖，抑制ＮＩＨ３Ｔ３细胞的生长。结论 ｒｈＢＭＰ－２具有促进上述细胞向成骨细胞分化的作用；在一定剂量范围内，ｒｈＢＭＰ－２的作用与细胞骨钙素合成量的增加呈线性正相关，故定量测定ＯＣ的含量基本可反映ｒｈＢＭＰ－２的活性。
- 朱帮福张斌李毅纪宗玲蒲勤柴玉波陈南春陈苏民
- 关键词：重组人骨形成蛋白-2成骨分化细胞分化
- 带绿色荧光蛋白标签的人era真核表达载体的构建及人Era对细胞形态和细胞周期的影响被引量：5
- 2003年
- 目的 :构建人era真核表达载体并初步研究这一人类新基因对体外培养细胞形态和细胞周期的作用。方法 :构建带绿色荧光蛋白 (EGFP)标签的人era真核表达载体 ,转染体外培养细胞NIH3T3,用荧光显微镜观测和流式细胞仪进行分析。结果 :无论EGFP融合于人Era的C端或N端 ,融合蛋白均表达于细胞浆接近核膜处 ,细胞形态无明显变化 ,细胞周期检测S期细胞所占百分数降低。结论 :人era可能参与细胞周期调控 ,为阐明人era的功能提供了资料。
- 纪宗玲陈苏民刘断中吴元明张俊杰路凡朱帮福李毅
- 关键词：基因表达细胞形态细胞周期绿色荧光蛋白ERA基因
- 重组人骨形成蛋白-2成熟肽体外活性的测定
- 骨形成蛋白(Bone Morphogenetic Protein,BMP)最初是作为异位诱骨分子被发现的,单独植入动物皮下和肌肉中均可通过诱导未分化的间充质细胞而形成软骨和骨组织,在治疗骨缺损方面显示出广阔的应用前景.研...
- 朱帮福蒲勤李毅纪宗玲张斌卢兹凡陈南春陈苏民
- 文献传递
- 人骨保护素(OPG)重组腺病毒的制备及其生物活性研究被引量：2
- 2003年
- 采用RT PCR法得到人OPG的编码区cDNA ,克隆至穿梭质粒pShuttle,构建重组有OPG编码区cDNA的腺病毒DNA ,经PacI酶切线性化 ,在脂质体介导下转染HEK2 93细胞 ,制备重组腺病毒并测定病毒滴度约为 5× 10 6 ～1 5× 10 7pfu mL。体外感染小鼠成肌细胞C2C12 ,Westernblot及ELISA检测证实有OPG蛋白的表达 ,并可在细胞培养上清中持续表达 6周。感染OPG重组腺病毒的C2C12细胞生长状态良好、细胞周期无明显变化。将重组腺病毒加入体外培养的小鼠骨髓细胞的培养基中 ,诱导形成的破骨细胞数量及在象牙片上形成的吸收陷窝的数量显著减少 (P <0 0 1)。
- 刘继中纪宗玲胡蕴玉陈苏民朱帮福杨彤涛
- 关键词：人骨保护素OPG重组腺病毒生物活性破骨细胞
- 重组hBMP-3成熟肽在大肠杆菌中的表达及活性测定
- 朱帮福蒲勤
- 关键词：水稻基因表达
- 人骨形成蛋白3在昆虫杆状病毒表达系统中的表达、纯化及其诱骨活性检测被引量：6
- 2002年
- 为了在昆虫杆状病毒系统中表达人骨形成蛋白 3(humanbonemorphogeneticproteoin3,hBMP3) ,检测表达产物的诱骨活性 .将hBMP3全长cDNA 1416bp克隆入转移载体K8中 ,再与病毒DNA经脂质体包裹后转染昆虫细胞Sf9.重组病毒经蓝白筛选后 ,用PCR方法扩增目的基因片段进行初步鉴定 .收集重组病毒的转染上清 ,肝素亲和层析纯化目的蛋白 .SDS PAGE和Western印迹进一步鉴定此蛋白 .体外培养MC3T3 E1细胞 ,经目的蛋白刺激后 ,检测细胞内碱性磷酸酶 (ALP)活性 .并将目的蛋白进行小鼠体内肌肉包埋实验 ,检测其异位诱骨活性 .结果显示 ,肝素亲和层析可以收集 1个高的洗脱峰 .SDS PAGE显示 ,非还原型样本为 32kD的二聚体蛋白带和少量 16kD单体蛋白带 ;还原型样本仅有相应大小的单体蛋白带 ,纯度达 80 % .Western印迹在相应位置呈阳性染色 .此蛋白刺激小鼠成纤维细胞 4 8h后 ,胞内ALP的活性增高 ,经rhBMP3作用后的细胞MTT染色减弱 .在小鼠股部肌肉内包埋蛋白样品 2～ 3周 ,组织学检测有成骨组织生成 .说明hBMP3在此套系统中获得了表达 .表达产物在体外可以刺激成骨细胞的分化 ,却抑制细胞的增殖 .
- 朱帮福卢兹凡陈苏民蒲勤路凡陈南春
- 关键词：杆状病毒纯化
- hBMP-3m基因在烟草中的表达
- 2003年
- PCR扩增人骨形成蛋白-3成熟肽 hBMP-3m cDNA,纯化后连接入pUC19质粒,构建克隆载体pUC19B3m;用EcoR 和Hind 酶解pUC19B3m和pJIT163,将目的片段插入pJIT163,构建中间载体pJIT163-B3m;再构建植物表达载体pCAMBIA1300-B3m.利用冻融法将质粒pCAMBIA-hBMP3m转入根癌农杆菌 A-grobacteriumtumefaciens LBA4404.以烟草 NicotianatabacumL. 无菌苗叶盘为外植体,通过根癌农杆菌介导法进行遗传转化,获得了在含25mg/L潮霉素 Hygromycin,Hyg 的筛选培养基上再生的抗性植株,经PCR证实其中部分植株已将人骨形成蛋白-3成熟肽基因整合到烟草基因组中,WesternBlot结果表明已有微量BMP表达.
- 高书颖范三红郭蔼光朱帮福陈苏民
- 关键词：基因表达烟草根癌农杆菌介导法
- 成骨分化特异性转录因子Cbfa1被引量：5
- 2001年
- 近年来随着 Cbfa1基因的克隆及其功能的阐明 ,人们对成骨分化的分子机制有了初步了解。基因敲除、基因突变等方法证实 Cbfa1作为成骨分化的特异性转录因子 ,对成骨细胞分化。
- 朱帮福卢兹凡
- 关键词：CBFA1转录因子成骨细胞分化骨发育基因结构蛋白结构
- 人骨形成蛋白-2和骨保护素在小鼠成肌细胞中的共表达被引量：3
- 2003年
- 目的 构建人骨形成蛋白 - 2 (BMP- 2 )和骨保护素 (OPG)的共表达真核载体 ,研究其在小鼠成肌细胞C2 C12中的表达。 方法 以人骨肉瘤细胞系 MG6 3的总 RNA为模板 ,RT- PCR法获得人 OPG的编码区 c DNA,克隆入真核表达载体 p IRES2 - EGFP的多克隆位点 ,再将人 BMP- 2的编码区 c DNA克隆入 p IRES2 - EGFP中的 Bst X 位点 ,构建 BMP- 2和 OPG的双顺反子真核表达载体 p IRES2 - BMP- 2 - OPG,在阳离子脂质体介导下转染 C2 C12细胞 ,Western blot法检测 BMP- 2和 OPG的表达。 结果 1获得人 OPG编码区全长 c DNA。 2构建人 BMP- 2和 OPG的双顺反子真核表达载体 p IRES2 - BMP- 2 - OPG。 3经 Western blot检测 ,p IRES2 - BMP- 2 - OPG转染 C2 C12细胞后 ,细胞可稳定表达 BMP- 2和 OPG。 结论 构建了人 BMP- 2和 OPG的共表达真核载体 ,并可在 C2 C12细胞中稳定表达 ,为应用 BMP- 2和 OPG进行骨质疏松等疾病的治疗研究奠定了基础。
- 刘继中胡蕴玉纪宗玲陈苏民朱帮福陶惠人
- 关键词：骨形成蛋白-2骨保护素成肌细胞骨形成真核载体骨转移癌
- 转4-1BBL基因的小鼠肝癌细胞瘤苗体内抗癌作用的研究被引量：2
- 2004年
- 目的研究转 4 1BBL基因的小鼠肝癌细胞疫苗在小鼠体内诱导的抗癌作用。方法采用脂质体介导法将真核表达质粒 pcDNA3.1 (+) m4 1BBL导入小鼠肝癌细胞Hepa1 6 ,经G4 1 8筛选后获得稳定高表达克隆 ,以丝裂霉素C(mitomycin ,MMC)处理后 ,制成癌细胞瘤苗 (tumorcellvac cine ,TCV) ,观察其对不同动物模型的体内免疫保护作用和免疫治疗作用。结果TCV 4 1BBL能刺激小鼠产生针对其野生型肝癌细胞的免疫保护作用 ,可以使免疫后的小鼠长期保持无癌状态 ;对早期癌模型有较强的治疗作用 ,但对晚期癌模型未见疗效。结论转 4
- 刘承利窦科峰朱帮福臧晓霞陈苏民
- 关键词：小鼠肝癌抗癌作用疫苗免疫治疗
