杨健洋
- 作品数：12 被引量：37H指数：4
- 供职机构：解放军第302医院更多>>
- 发文基金：军队“十一五”科技攻关课题更多>>
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- 抗人红细胞抗体和HIV抗原融合蛋白的构建及活性鉴定被引量：4
- 2007年
- 目的 构建及表达抗红细胞（RBC）单链抗体（ScFv）和HIV抗原的融合蛋白，并做活性测试。方法 将鼠抗人红细胞单链抗体可变区重链、轻链基因与HIV抗原基因相连，重组于高效表达载体中，并在大肠埃希菌中表达。结果 经ELISA检测和红细胞凝集检测，证明表达的融合蛋白具有HIV抗原和抗人红细胞的双重活性，可使含有HIV抗体的红细胞悬液凝集。结论 融合蛋白构建成功，可用于HIV的快速检测。
- 胡燕杨健洋朱雷侯俊沈宏辉貌盼勇
- 关键词：融合蛋白HIV凝集试验
- 前S2抗原基因对乙型肝炎DNA疫苗免疫应答的影响被引量：3
- 2004年
- 目的:探讨前S2抗原基因对乙型肝炎DNA疫苗免疫应答的影响. 方法:采用常规PCR法从adr亚型全基因DNA序列中分别扩增HBV S和前S2+S基因片段,重组到VR1012载体中, 转染COS-7细胞并免疫BALB/C小鼠.采用蛋白印迹、ELISA,ELISPOT等方法检测其在COS-7细胞内的表达及小鼠的体液及细胞免疫. 结果:转染的COS-7细胞表达相应的目的蛋白,且前S2+ s转染的细胞表达明显高于S转染的细胞的表达;免疫接种小鼠后2wk产生HBsAb及HBsAg特异性CTL,前S2+ S抗原免疫产生的HBsAb及HBsAg特异性CTL均强于S 抗原免疫. 结论:前S2抗原基因可增强乙型肝炎DNA疫苗刺激的免疫应答.
- 赫兢辛绍杰毛远丽貌盼勇沈宏辉杨健洋徐军孔维
- 关键词：前S2抗原乙型肝炎免疫应答特异性CTLCOS-7细胞
- HIV核心抗原p24原核系统的高效表达、纯化及活性鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的 在原核表达系统中对HIVp2 4抗原基因进行克隆和高效表达、纯化并鉴定其活性。方法 利用PCR技术从HIV-1全基因质粒 (B2N)中扩增p2 4抗原基因 ,并克隆入T载体中。通过酶切消化后连接到表达载体pRSET上 ,用此连接产物转化大肠埃希菌BL2 1,经IPTG诱导 ,表达p2 4抗原。利用固定化金属离子 (Ni2 + )配体亲和层析技术从表达蛋白中纯化目的蛋白。并运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳、WesternBlot(WB)及ELISA法分别对插入基因片段的正确性、表达产物的活性及特异性进行检测。结果 PCR产物约为 6 90bp ,与预期p2 4抗原全基因片段大小一致。重组质粒T-p2 4和pRSET-p2 4经BamHⅠ和HindⅢ双酶切 ,其插入的外源基因片段均为 6 90bp。将纯化前与纯化后的蛋白作SDS PAGE电泳 ,均可见一条约 2 4× 10 3的外源基因表达带 ,与计算的相对分子质量相符。经WB和ELISA试验 ,证明基因工程表达的p2 4抗原具有较高的特异性及活性。结论 成功构建了HIVp2 4表达载体pRSET-p2 4 ,并在原核细胞中高效表达 。
- 侯俊貌盼勇洪世雯胡燕杨健洋沈宏辉朱雷
- 关键词：HIV核心抗原纯化原核系统外源基因表达
- 检测抗丙型肝炎病毒总抗体的双抗原夹心法的建立被引量：3
- 1997年
- 以丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）结构区和非结构区基因工程表达抗原及人工合成多肽包被酶标板，用辣根过氧化物酶标记抗原，建立了检测血清中抗－ＨＣＶ总抗体的双抗原夹心法。与普遍采用的检测抗－ＨＣＶＩｇＧ的间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）比较，其灵敏度（１∶１２８）稍高于间接法（１∶６４），特异性相同，均为１００％。该法可同时检测抗－ＨＣＶ各类抗体，使检出率提高１０％。
- 洪世雯貌盼勇何红霞付体全刘洪白燕平杨健洋
- 关键词：丙型肝炎病毒病毒抗原病毒抗体
- 丙型肝炎病毒特异性核酶细胞内切割活性的研究被引量：2
- 2000年
- 设计合成针对丙型肝炎病毒 (HCV )核心区基因 (第3 84— 3 86nt)的锤头状核酶 (Ribozyme ,Rz) ,从丙型肝炎病人的血清中提取HCV RNA ,经RT—PCR扩增HCV基因片段( 4 12bp) ,作为核酶的靶序列 ,将核酶基因和HCV靶基因片段分别克隆人反转录病毒载体 pLXN中构建重组载体 ,并用电击法分别转入包装细胞PA3 17中 ,将上述两种转细胞释放到培养液中的含Rz的假病毒颗粒和含HCV靶基因的假病毒颗粒混合后 ,共同感染空白的PA3 17细胞 ,被感染细胞维持液的RT -PCR结果表明 ,无HCV靶基因产物即无靶基因的假病毒颗粒释放至维持液中 ,证明Rz在细胞内有切割HCV靶RNA的活性。
- 杨健洋洪世雯貌盼男梁勇鞠连才胡燕
- 关键词：丙型肝炎病毒锤头状核酶
- 合成肽抗原抗人免疫缺陷病毒1/2型抗体酶联试剂盒的研制被引量：4
- 1997年
- 根据人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）的基因结构和氨基酸序列，采用固相法合成了ＨＩＶ－１ｇｐ４１（ＳＰ１）、ｇｐ１２０（ＳＰ２）、ｐ２４（ＳＰ３）和ＨＩＶ－２ｇｐ３６（ＳＰ４）的４条多肽，混合包被酶标板做为固相抗原，采用间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），建立了检测抗－ＨＩＶ－１／２ＩｇＧ抗体的酶联诊断试剂盒。检测卫生部药品和生物制品检定所提供的４１份质控参比血清，其特异性、敏感性均为１００％，变异系数小于１０％。检测１８６份其它病种病人血清均为阴性，与华怡、巴斯德、金豪等公司的ＨＩＶ诊断试剂比较检测了９０份ＨＩＶ感染者和１４０份正常人血清，除与华怡试剂的阴、阳性及总符合率分别为９９２９％（１３９／１４０）、９８９０％（９０／９１）和９９５７％（２２９／２３０）外，其余均为１００％。３７℃放置４天后试剂的检测结果不受影响。
- 貌盼勇洪世雯何红霞梁勇胡燕冯传前杨健洋朱雷
- 关键词：人免疫缺陷病毒ELISAHIV-1
- 乙型肝炎病毒复制调控元件对HBV DNA疫苗诱导的免疫应答被引量：5
- 2006年
- 目的研究乙型肝炎病毒(HBV)复制调控元件增强子I(ENH I)及前S2(Pre-S2)抗原基因对HBV DNA疫苗诱导的免疫应答的影响。方法采用常规聚合酶链反应(PCR)从HBV adr亚型全基因DNA序列中分别扩增HBsAg、PreS2-HBsAg、HBsAg-ENH I和PreS2-HBsAg-ENH I基因片段,重组到VR1012载体中,构建4种HBV DNA疫苗,转染HepG2细胞并免疫Balb/C小鼠。通过细胞免疫化学、酶联免疫分析(ELISA)、酶联免疫斑点试验(ELISPOT)等方法检测其在HepG2细胞内的表达及小鼠的体液及细胞免疫应答。结果转染的HepG2细胞表达相应的目的蛋白,ENH I及Pre-S2抗原基因均可增强HBV DNA疫苗转染HepG2细胞表达HBsAg；免疫接种小鼠后第2周产生抗-HBs及HBsAg特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL),Pre-S2抗原基因可增强HBV DNA疫苗免疫Balb/C小鼠诱导的抗-HBs及HBsAg特异性CTL的产生,ENH I基因对免疫应答无影响。结论ENH I及Pre-S2抗原基因均可增强HBV DNA疫苗转染HepG2细胞表达HBsAg,Pre-S2抗原基因可增强HBV DNA疫苗免疫Balb/C小鼠引起的免疫应答。
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- 增强子Ⅰ对乙型肝炎病毒DNA疫苗免疫应答的影响被引量：3
- 2006年
- 目的研究乙型肝炎病毒(HBV)自身增强子Ⅰ(enhancerⅠ,ENHⅠ)对HBVDNA疫苗免疫应答的影响。方法采用PCR法以HBVadr亚型全基因DNA序列为模板分别扩增表面抗原(HBsAg)和HBsAg-ENHⅠ基因片段,重组到载体VR1012中,构建两种HBVDNA疫苗,转染COS-7细胞及HepG2细胞并免疫BALB/c小鼠。采用蛋白印迹、ELISA、ELISPOT等方法检测其在COS-7和HepG2细胞内的表达及小鼠的体液及细胞免疫应答效果。结果转染的HepG2和COS-7细胞均表达HBsAg;连接ENHⅠ的HBVDNA疫苗转染HepG2细胞后HBsAg表达量明显升高,两种疫苗转染COS-7细胞表达HBsAg无明显差异;免疫小鼠后第2周产生HBsAb及HBsAg特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL),两种疫苗免疫产生的HBsAb及HBsAg特异性CTL无明显差异。结论ENHⅠ可使HBVDNA疫苗转染HepG2细胞表达HBsAg明显增加,对转染COS-7细胞表达HBsAg及接种BALB/c小鼠引起的免疫应答无明显影响。
- 赫兢辛绍杰侯俊胡燕杨健洋貌盼勇
- 关键词：增强子
- HIV多抗原位点串联基因的表达及活性鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的 在原核表达载体系统中对HIV - 1 / 2型外壳蛋白多个抗原位点串联基因进行表达、纯化并鉴定其活性。方法 人工合成含HIVgp 4 1的 2个抗原位点、gp 1 2 0的 3个群的各 3个抗原位点及 gp 36的 2个抗原位点的串联基因 ,克隆到原核表达载体pRSETB中 ,构建重组表达质粒 pRSETB env ,异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导其在大肠埃希菌BL 2 1 (DE 3)中高效表达 ,利用固化金属离子配体亲和层析技术纯化表达蛋白 ,利用逐渐降低尿素浓度透析法使目的蛋白复性。用免疫印迹和ELISA法分别对表达产物进行鉴定。结果 目的基因在BL 2 1中有较高表达率 ,纯化后表达蛋白经十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)可见一条约 32KD的蛋白带 ,与设计分子量相符。免疫印迹、ELISA试验显示该表达蛋白可与HIV患者血清较好结合 ,而与其它患者血清无交叉反应。结论 成功构建了由HIV外膜蛋白多个抗原位点串联基因片段的表达载体 pRSETB env ,并在原核细胞中高效表达 ,表达蛋白经一步纯化后纯度较高 ,并具有良好特异性和活性。
- 朱雷胡燕侯俊沈宏辉杨健洋貌盼勇
- 关键词：HIV嵌合基因活性鉴定
- 人源抗HIV-1 gp120趋化蛋白受体结合位点Fab单克隆抗体基因的获得
- 2002年
- 目的 筛选人源抗HIV 1gp12 0趋化蛋白受体结合位点噬菌体Fab单克隆抗体基因。方法 根据HIV 1gp12 0趋化蛋白受体结合位点的氨基酸序列合成 2 3肽 ,并以此为固相抗原从HIV 1噬菌体Fab抗体库筛选阳性克隆 ,并进行鉴定及序列测定。结果 获得了 1株抗HIV 1gp12 0趋化蛋白受体结合位点的人源Fab抗体克隆 ,具有较高的亲和力、特异性和抑制率 ,序列测定及分析显示该抗体属IgGⅠ亚类 ,κ型 ,重、轻链可变区分别属VhⅢ和VκⅢ基因家族。结论 成功地获得了人源抗HIV 1gp12 0趋化蛋白受体结合位点噬菌体Fab单克隆抗体基因。
- 沈宏辉貌盼勇洪世雯侯俊杨健洋
- 关键词：人类免疫缺陷病毒
