杨晨曦
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：青岛大学医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 宫颈癌细胞系RASSFIA基因启动子及第1外显子区甲基化状态的研究被引量：2
- 2013年
- 背景与目的:抑癌基因Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)启动子及第1外显子区CG位点高甲基化导致该基因沉默与多种恶性肿瘤的发生发展相关。本研究旨在探讨宫颈癌细胞系RASSFIA基因启动子及第1外显子区甲基化状态以及甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’deoxycytidine,5-Aza-dc)作用对RASSFIA基因表达的影响。方法:采用5μmol/L(低浓度)和10μmol/L(高浓度)的5-Aza-dc作用于HeLa、Caski、HT-3以及C-33A等4种宫颈癌细胞系,分别采用甲基化特异PCR(methylation-specific PCR,MSP)和亚硫酸盐基因组测序法(bisulfite genome sequencing,BGS)检测5-Aza-dc处理前后RASSF1A基因启动子及第1外显子区甲基化状态,RT-PCR检测干预前后RASSF1A基因mRNA的转录表达。结果:HeLa和Caski两种HPV阳性细胞系RASSF1A基因启动子及第1外显子区均呈低甲基化状态,mRNA表达阳性。低浓度和高浓度5-Aza-dc作用后,mRNA表达未见明显改变(F HeLa=3.003,P=0.125;F Caski=0.045,P=0.956)。HT-3和C-33A两种HPV阴性宫颈癌细胞系RASSF1A基因启动子及第1外显子区则表现为高度甲基化状态,mRNA表达受到抑制。低浓度和高浓度5-Aza-dc作用后,HT-3和C-33A细胞系RASSF1A基因启动子及第1外显子区CG位点甲基化程度降低,检测到其mRNA表达,高浓度5-Aza-dc作用组表达水平明显高于低浓度组和细胞对照组(F HT-3=18.002,P=0.03;F C-33A=17.179,P=0.03),LSD-t检验显示差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HPV阳性和HPV阴性宫颈癌细胞系中RASSFIA基因启动子及第1外显子区甲基化状态不同;RASSF1A基因启动子及第1外显子区的高甲基化可抑制该基因表达;5-Aza-dc处理可使RASSF1A基因启动子及第1外显子区去甲基化,重新激活基因的表达,这种作用在一定范围内有剂量依赖性。
- 汪姗姗王宁于啸杨晨曦闫丽萍王言奎
- 关键词：TA克隆
- 宫颈癌细胞系及宫颈组织PTEN基因启动子区甲基化状态的检测与分析被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨宫颈癌细胞系及宫颈组织中PTEN基因启动子甲基化状态对其表达的影响。方法:选取体外培养的4种宫颈癌细胞系HeLa、Caski、C-33A、HT-3,以及18例宫颈癌组织和8例宫颈正常组织为研究对象。应用重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite genomic sequencing PCR,BSP)联合TA克隆测序检测PTEN基因启动子甲基化状态;采用去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理体外培养的4种宫颈癌细胞系,RT-PCR法检测处理前后PTEN基因mRNA转录表达的差异,并与本课题组前期5-Aza-dC作用前后4种细胞系表达谱芯片PTEN基因的差异进行比较分析。结果:4种宫颈癌细胞系、宫颈癌组织及正常宫颈组织中PTEN基因启动子区均呈低甲基化状态;且宫颈癌组织与正常宫颈组织PTEN基因启动子甲基化水平无显著差异(T=34.5,P=0.720)。表达谱芯片中4种细胞系PTEN基因差异倍数均>0.5且<2。RT-PCR显示,5-Aza-dC处理前后4种细胞系中PTEN mRNA表达无显著差异(HeLa:t=0.384,P=0.738;Caski:t=0.073,P=0.949;C-33A:t=0.097,P=0.931;HT-3:t=0.073,P=0.542)。结论:宫颈癌组织及宫颈癌细胞系中未发现PTEN基因启动子区CpG岛的高甲基化,PTEN基因表达的差异与该基因启动子区甲基化无显著相关性。
- 杨晨曦王宁张婷汪姗姗闫丽萍王言奎
- 关键词：宫颈癌甲基化
- 5-Aza-dc对宫颈癌细胞系FAM9C基因表达及甲基化影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2’脱氧胞苷(5-Aza-dc)对宫颈癌细胞系抑癌基因FAM9C表达及甲基化状态的影响。方法常规培养高危型人乳头瘤病毒(HPV)阳性宫颈癌细胞系HeLa、Caski和HPV阴性宫颈癌细胞系HT-3、C-33A,分别用5、10、15μmol/L的5-Aza-dc作用3、5、7d,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测FAM9C基因表达,甲基化特异性PCR(MSP)方法检测基因启动子区甲基化状态。结果未经5-Aza-dc处理的HPV阳性宫颈癌细胞系FAM9C基因呈低表达,基因启动子区表现为完全甲基化状态;未经5-Aza-dc处理的HPV阴性宫颈癌细胞系FAM9C基因表达水平较高,基因启动子区呈不完全甲基化和非甲基化状态。10或15μmol/L的5-Aza-dc作用5d时,HPV阳性宫颈癌细胞系HeLa、Caski的FAM9C基因表达显著上调,基因启动子区由完全甲基化转变为不完全甲基化和非甲基化状态;HPV阴性宫颈癌细胞系HT-3、C-33A应用5-Aza-dc处理前后FAM9C基因表达及启动子区甲基化状态无明显变化。结论 HPV诱导异常甲基化可能是宫颈癌细胞系FAM9C基因表达降低甚至沉默的主要原因;甲基转移酶抑制剂5-Aza-dc能逆转FAM9C基因甲基化状态,使该基因重新表达。
- 于啸张婷杨晨曦王言奎
- 关键词：宫颈肿瘤DNA甲基化
