段永娟
- 作品数：10 被引量：18H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人mda-7/IL-24对慢性粒细胞白血病K562细胞的抑制作用被引量：3
- 2008年
- 目的:探索人黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7;又称IL-24)对慢性粒细胞白血病K562细胞的抑制作用。方法:用RT-PCR法检测11个造血系统恶性肿瘤细胞系mda-7受体的转录情况。用脂质体转染法将构建的重组真核表达载体pTarget-IL-24转染K562细胞。以RT-PCR和Western blotting方法检测转染的K562细胞mda-7的表达情况;通过MTT法、集落形成实验、流式细胞术、Annexin-Ⅴ/PI检测mda-7/IL-24对K562细胞增殖、集落形成、细胞周期和凋亡的影响;以裸鼠移植瘤模型观察mda-7对K562细胞移植瘤的治疗作用。结果:在11个造血系统恶性肿瘤细胞系(NB4、HL60、CEM、Namalwa、Jurkat、KG1a、U937、K562、Ramos、J6-1、HEL细胞)中没有检测到完整mda-7受体的表达。转染mda-7的K562细胞能显著表达mda-7mRNA及其蛋白;其与转染空载体和未转染的K562细胞相比,细胞增殖活力以及集落形成能力明显下降(P<0.05),细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.05),但细胞凋亡率没有明显变化。裸鼠体内实验证实了mda-7/IL-24明显抑制K562细胞移植瘤生长(P<0.01)。结论:mda-7/IL-24对白血病细胞系K562具有明显的体内外抑制作用,该作用与mda-7/IL-24引起细胞周期G0/G1期阻滞有关。
- 杨宾霞马小彤董成亚张芳林永敏段永娟
- 关键词：基因治疗慢性粒细胞白血病细胞周期
- 第三代慢病毒包装系统优化及Rev表达质粒对慢病毒包装效率作用初探被引量：5
- 2014年
- 目的:对目前最为常用的三质粒慢病毒包装系统进行优化,以期明确各质粒表达的病毒成分对提高慢病毒包装效率的重要性。方法:在限定总质粒量为10μg的情况下,将表达绿色荧光蛋白(GFP)的目的质粒、表达gag/pol、Rev、VSVG的包装质粒按不同比例混合,转染293T细胞进行病毒包装,48 h后收集上清用于感染293T及K562细胞,72 h后经流式细胞术检测GFP+阳性细胞比例,分析所获病毒的感染效率。结果:采用不同的质粒混合比例包装的病毒感染效率具有明显差异,其中携带GFP的目的质粒量影响作用最为显著,当目的质粒量从15%(1.5μg)增至35%(3.5μg)时,GFP+293T细胞比例从14.2%升至45.1%,增加了3.2倍。当固定目的质粒量为35%,同时分别将表达gag/pol或Rev的质粒量从15%提高到25%时,改变Rev组的GFP+阳性率提升最明显,为1.5倍;而改变VSVG质粒量在已测试的混合比例中作用不显著。包装病毒感染K562细胞的结果与293T细胞类似。结论:通过对比包装病毒的感染效率,优化了慢病毒包装的混合质粒条件,并成功地应用于感染白血病细胞系;首次发现提高Rev质粒量可以更有效地提高病毒的包装效率,为利用慢病毒表达体系研究多种基因在血液系统中的功能奠定了技术基础。
- 阮峥王文天杨洋段永娟胡晓
- 构建稳定过表达转录辅助因子LBH的人间充质干细胞株
- 2016年
- 目的:构建转录辅助因子LBH(limb-bud and heart)过表达的人间充质干细胞(MSC)株,研究Lbh基因对人MSC功能的调控。方法:通过分子克隆的方法构建人Lbh基因的慢病毒表达质粒p CDHP-Lbh,经限制性内切酶酶切和核酸测序鉴定,利用293T细胞包装表达Lbh基因的慢病毒及对照;将包装的病毒感染人MSC,利用表达载体携带的GFP报告基因,采用流式细胞术分选GFP阳性目的细胞;通过油红O染色鉴定阳性细胞的成脂分化能力,通过茜素红和硝酸银染色鉴定阳性细胞的成骨分化能力。结果:双酶切和测序结果表明正确克隆了人Lbh基因的全长CDS序列,定量PCR和Western印迹结果表明构建的p CDHP-Lbh重组质粒能够表达Lbh基因;流式分选获得LBH稳定表达的人MSC细胞株,该细胞株经成骨和成脂诱导分化培养后,油红O染色、茜素红染色和硝酸银染色结果均呈阳性。结论:构建了人Lbh基因的慢病毒表达质粒p CDHP-Lbh,并获得稳定表达Lbh基因的人MSC细胞株,该细胞株保留了向脂肪细胞和成骨细胞定向分化的能力。本研究为进一步探讨Lbh基因对人MSC功能的调控提供了重要的实验基础。
- 牛琳段永娟王文天杨洋赵慧娟胡晓
- 关键词：HEART人间充质干细胞慢病毒载体
- 人mda-7/IL-24对淋巴瘤细胞Namalwa的抑制作用被引量：5
- 2007年
- 目的:研究黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7,又称IL-24)对淋巴瘤细胞系Namalwa细胞的抑制作用。方法:用半定量RT-PCR方法检测10个造血系统恶性肿瘤细胞系(Namalwa、Raji、K562、NB4、U937、Ramous、CEM、KG1a、HL60、J6-1)中mda-7/IL-24的表达情况。用RT-PCR方法从活化的人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆mda-7/IL-24编码区,构建真核表达载体pTarget-IL-24。经测序鉴定后,用脂质体法转染Namalwa细胞,筛选稳定表达细胞株。转染细胞经RT-PCR和Western blotting证实mda-7/IL-24的表达。通过MTF法、集落形成试验、流式细胞术、裸鼠体内成瘤实验来评价mda-7/IL-24对肿瘤细胞增殖、生长特性、集落形成、凋亡情况、体内致瘤能力的作用。结果:10个造血系统恶性肿瘤细胞系中未检测到mda-7/IL-24的表达;转染重组质粒pTarget-IL-24的Namalwa细胞在mRNA与蛋白水平都有mda-7/IL-24的表达;稳定表达mda-7/IL-24的Namalwa细胞增殖活力以及集落形成能力与转染空载体的对照组相比明显下降(P<0.05);但是两者的凋亡率比较无统计学意义。裸鼠体内移植瘤实验结果显示稳定表达mda-7/IL-24的Namalwa细胞株的致瘤性明显低于转染空载体的对照组(P<0.05)。结论:mda-7/IL-24对来源于Burkitt淋巴瘤的Namalwa细胞系具有明显的增殖抑制作用,为Burkitt淋巴瘤的基因治疗提供了新的思路。
- 段永娟马小彤董成亚张芳林永敏杨宾霞
- 关键词：IL-24淋巴瘤基因治疗
- 真性红细胞增多症患者骨髓间充质干细胞体外造血支持功能研究
- 2015年
- 目的研究真性红细胞增多症(PV)患者骨髓间充质干细胞(BMSC)的造血支持功能。方法从PV初诊患者和健康志愿者骨髓单个核细胞中分离培养BMSC;光学显微镜观察细胞形态;流式细胞术鉴定细胞免疫表型;诱导成骨及成脂分化鉴定细胞多向分化能力;与人脐带血CD34+造血干祖细胞(HSPC)共培养检测真性红细胞增多症患者来源的骨髓间充质干细胞(PV-BMSC)的体外造血支持功能。结果 PV-BMSC的细胞形态、免疫表型与正常人来源的骨髓间充质干细胞(NM-BMSC)相比无明显差异;油红O及Von Kossa染色表明PV-BMSC具有成脂和成骨分化能力;实验共分离得9株PV-BMSC,其中55%的PV-BMSC既能支持总细胞增殖,又能支持CD34+HSPC扩增(≥1.5倍,n=5),22%的仅支持总细胞增殖(≥1.5倍,n=2),其余的既不支持总细胞增殖也不支持CD34+HSPC扩增(≤1.0倍,n=2)。结论 PV-BMSC支持CD34+HSPC增殖存在明显的个体差异。
- 孙仪段永娟李芳吕军强白洁刘汉芝胡晓
- 关键词：真性红细胞增多症骨髓间充质干细胞造血干祖细胞
- mda7-/IL2-4和IL2-4delE5诱导急性髓系白血病细胞向单核细胞分化被引量：3
- 2011年
- 目的:研究人黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7;又称IL-24)及其剪接体IL-24 delE5与急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞分化的关系。方法:十四烷酰佛波醇-乙酯(12-O-tetrade-canoylphorbol-13-acetate,TPA)处理人急性髓系白血病细胞系U937、HL-60,real-time PCR及Western blotting检测细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达,FACS检测细胞表面CD11b、CD14和CD115的表达。siRNA干扰U937、HL-60细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达后,再以TPA诱导细胞分化,FACS检测CD11b、CD14和CD115的表达。用前期构建的mda-7/IL-24和IL-24 delE5载体转染U937、HL-60及AML-M5患者的原代白血病细胞,观察异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5能否诱导白血病细胞向单核细胞分化。结果:TPA在诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化过程中显著促进mda-7/IL-24及其剪接体IL-24 delE5的表达,用siRNA干扰mda-7/IL-24及IL-24 delE5的表达后,TPA诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化的作用也被阻断。异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5可诱导U937、HL-60以及原代AML细胞向单核细胞分化:U937、HL-60细胞表面CD11b和CD14表达均显著升高,CD115表达仅在U937细胞有显著升高;3例AML-M5患者的原代AML细胞中CD11b、CD14及CD115表达均有不同程度升高,细胞呈现单核细胞的形态特征。结论:TPA可通过上调mda-7/IL-24及其剪接体IL-24 delE5的表达诱导白血病细胞向单核细胞分化。
- 姚兴荣马小彤杨宾霞段永娟林永敏
- 关键词：急性髓系白血病单核细胞分化
- 小鼠β-防御素2与白介素18肿瘤疫苗的协同抗白血病作用研究被引量：3
- 2009年
- 肿瘤免疫方面的最新进展表明,有效的抗肿瘤免疫需要天然免疫和获得性免疫的协同作用。我们在前期工作中成功制备了小鼠β-防御素2(MBD2)和IL-18基因修饰的白血病疫苗,并证实了两种瘤苗的抗白血病作用。为了进一步增强抗肿瘤效果,本实验将MBD2和IL-18瘤苗联合应用于小鼠体内,观察是否具有协同抗白血病作用并探索机制。致瘤性实验证实,MBD2与IL-18联合瘤苗对致瘤性的抑制作用明显高于MBD2或IL-18单独瘤苗(P<0.05);免疫保护作用结果显示,联合瘤苗接种组100%小鼠仍可长期存活;治疗实验显示,与MBD2或IL-18单独瘤苗相比,联合瘤苗具有更显著的治疗效果(P<0.05)。上述结果表明,MBD2和IL-18联合瘤苗可协同诱导更有效的抗肿瘤免疫反应和免疫保护作用。机制探讨发现,联合瘤苗能诱导脾脏淋巴细胞的CTL杀伤活性以及IFN-γ产生明显增强。提示,MBD2和IL-18可能协同诱导T细胞增殖,产生IFN-γ,使免疫系统能更有效地杀伤清除白血病细胞。
- 王淑为马小彤徐玢杨宾霞段永娟林永敏
- 关键词：白细胞介素18肿瘤疫苗
- 白细胞介素-24 delE5对人类白血病细胞系K562的抑制作用被引量：2
- 2010年
- 目的 探索白细胞介素（IL）-24 delE5对人类白血病细胞系K562的抑制作用.方法 用TPA诱导白血病细胞系U937和HL-60向单核-巨噬细胞分化后,检测mda-7/IL-24及其选择性剪接体IL-24delE5的表达.构建IL-24 delE5真核表达载体,稳定转染K562细胞.通过MTT法、集落形成实验、流式细胞术、Annexin-V/PI检测及动物实验,观察IL-24 delE5对K562细胞增殖、集落形成、细胞周期、凋亡及体内致瘤性的影响;同时与mda-7/IL-24进行比较.结果 在TPA诱导分化的U937和HL-60细胞中发现IL-24 delE5的表达.稳定转染IL-24 delE5的K562增殖及集落形成明显下降,与空载体相比,G0/G1期细胞比例由（24.46±3.99）%增至（42.69±3.04）%,细胞周期阻滞于G0/G1期,体内实验证实K562细胞移植瘤生长明显被抑制.与mda-7/IL-24相比,上述各实验结果差异均无统计学意义.结论 IL-24 delE5与mda-7/IL-24一样对人类白血病细胞系K562具有明显的体内外抑制作用,该作用可能与IL-24 delE5所引起细胞周期G0/G1期阻滞有关.
- 王琳马小彤董成亚张芳段永娟杨宾霞林永敏
- 关键词：剪接体K562细胞细胞周期
- 白细胞介素-24抑制K562细胞生长的机制被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨自细胞介素-24（又称黑色素瘤分化相关基因-7,IL-24/mda-7）对白血病细胞系K562的周期阻滞作用机制.方法 利用基因芯片技术初步分析转染IL-24/mda-7与转染空载体的K562细胞之间基因表达差异,并以实时定量PCR验证;以Western blotting方法检测pRb的磷酸化水平.结果 转染IL-24/mda-7可使K562细胞的细胞周期相关基因p21^WAF-1、BCCIP上调,cdk6、Smurf2下调,定量PCR证实了上述表达变化;IL-24/mda-7转染还可明显降低K562细胞pRb磷酸化水平.结论 IL-24/mda-7可能通过调节细胞周期相关蛋白,即上调p21^WAF-1、BCCIP,下调cdk6、Smurf2,使K562阻滞于G0/G1期,从而抑制细胞生长.
- 郜伟峰马小彤张芳董成亚段永娟杨宾霞林永敏
- 关键词：白血病细胞周期基因芯片基因治疗
- 干细胞拉曼光谱收集条件选择及间充质干细胞与胚胎干细胞拉曼光谱的比较
- 2017年
- 背景:拉曼光谱在检测细胞状态方面相比于传统技术具有快速、非介入、非标记等特点,因此在生物医学领域中的应用正日益受到关注,但是该技术应用于干细胞检测的条件还有待进一步优化。目的:探索激光波长与光栅刻度密度对于干细胞拉曼光谱分辨率与收集时间等参数的影响,明确可以用于干细胞分析的拉曼光谱收集条件。方法:首先比较532,638,785 nm 3个波长激光及600,1 200,1 800 gr/mm 3种光栅刻度密度条件对人间充质干细胞与人胚胎干细胞拉曼光谱的影响;之后比较这2个条件不同组合得到的拉曼光谱的光谱分辨率与收集时间,选择出最佳的组合条件;最后使用选出的最佳条件结合主成分分析方法比较胚胎干细胞与间充质干细胞拉曼光谱的差异以验证优化条件的适用性。结果与结论:(1)激光波长与光栅刻度密度均会不同程度影响干细胞拉曼光谱的峰强,进而影响特征性拉曼峰之间的比值;(2)785 nm波长激光与1 200 gr/mm光栅刻度密度条件组合是最适合收集条件;(3)对比分析胚胎干细胞与间充质干细胞的拉曼光谱图,提示胚胎干细胞具有更高的核酸含量,而间充质干细胞在一些蛋白和脂类含量上更为丰富。
- 陈明程雪莲段永娟胡晓
- 关键词：干细胞胚胎干细胞拉曼光谱光栅间充质干细胞胚胎干细胞主成分分析
