潘琼
- 作品数：7 被引量：14H指数：3
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- Ascl2转录调控人结肠癌上皮细胞内CDX2基因表达的研究被引量：1
- 2014年
- 目的探讨Ascl2对人结肠癌上皮细胞中CDX2基因的转录调控作用。方法预测CDX2启动子的转录因子结合位点,构建包含8个不同长度的CDX2近端启动子的荧光素酶报告基因质粒,分别命名为pGL3-CDX2-C1-8;将各质粒分别转染到shRNA-Ascl2/LS174T和shRNA-Ctr/LS174T细胞中,检测细胞中的双荧光素酶活性。采用染色质免疫共沉淀(ChIP)技术,用Ascl2抗体免疫沉淀与CDX2启动子区DNA片段相结合的Ascl2,PCR扩增CDX2启动子的特异性序列。结果转录因子数据库预测到CDX2近端启动子区含多个E-box结合位点和潜在的Nkx-2、GATA-1、CdxA、Sox-5、SRY等顺式作用元件。双酶切及测序结果证实pGL3-CDX2-C1-8重组质粒插入片段序列均正确。重组质粒在shRNAAscl2/LS174T细胞中的荧光素酶活性明显高于shRNA-Ctr/LS174T细胞(P<0.01)。随着CDX2启动子片段的缩短,荧光素酶活性呈升高趋势。ChIP实验证实在CDX2近端启动子存在与Ascl2相结合的片段,在shRNA-Ascl2/LS174T细胞中,Ascl2与CDX2启动子区域中-841^-646、-291^-134、-7^+138片段结合的DNA片段明显少于对照shRNA-Ctr/LS174T细胞。结论 Ascl2在结肠癌上皮细胞中可能通过与CDX2近端启动子的直接结合而达到转录阻遏CDX2基因表达的目的。
- 钟小莉尚杨杨潘琼李姗姗刘韵叶钧宋丽丽赵晶京彭志红汪荣泉
- 关键词：荧光素酶报告基因
- O型糖链合成阻滞对肠上皮细胞MUC2表达及细菌黏附的抑制作用被引量：2
- 2013年
- 目的探讨肠上皮细胞O型糖链的合成阻滞对该细胞肠分化标记物MUC2表达及细菌黏附的影响。方法采用O型糖链抑制剂benzyl-α-GalNAc抑制结肠上皮细胞HT-29及其分化型细胞(HT-29-Gal)O型糖链的合成,经benzyl-α-GalNAc处理的HT-29和HT-29-Gal细胞分别命名为HT-29-OBN和HT-29-Gal-OBN。采用Real-time PCR和Western blotting方法检测上述4种细胞中MUC2基因的转录和蛋白表达水平,并将上述细胞与致病性大肠埃希菌(EPEC)和肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7共培养,采用系列稀释菌落计数法观察细菌在上述细胞表面的黏附情况。结果 Realtime PCR和Western blotting结果显示,经benzyl-α-GalNAc处理后,HT-29和HT-29-Gal细胞MUC2的mRNA和蛋白表达均明显减少(P<0.05)。HT-29-OBN和HT-29-Gal-OBN细胞与致病性大肠埃希菌EPEC和EHEC O157:H7的黏附明显少于HT-29和HT-29-Gal细胞(P<0.05)。结论抑制肠上皮细胞O型糖链的合成可阻碍细菌黏附及MUC2的表达。
- 宋丽丽叶钧刘韵潘琼钟小莉李姗姗田音彭志红汪荣泉
- 关键词：肠黏膜细菌黏附大肠埃希菌
- 肠分化细胞黏蛋白O-型糖链合成抑制导致MUC2表达减低以及对细菌侵袭易感被引量：4
- 2013年
- 目的探讨O-型糖链合成的抑制对肠分化细胞内细菌侵袭数量和细胞内MUC2表达水平的影响。方法对肠分化细胞(HT-29-Gal)用O-型糖链抑制剂(benzyl-N-acetyl-α-D-galactosaminide,benzyl-α-GalNAc)处理,采用Real-time PCR和Western blot检测MUC2 mRNA和蛋白的表达情况。并将HT-29-Gal细胞及benzyl-α-GalNAc处理的HT-29-Gal细胞分别与肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic E.coli,EPEC)和肠出血性大肠杆菌(EHEC O157∶H7)37℃孵育2 h,再加入100μg/mL的庆大霉素,杀灭细胞外及粘附于细胞表面的细菌。最后采用系列稀释克隆计数法观察benzyl-α-GalNAc处理的HT-29-Gal细胞对细菌侵袭的影响。结果 Real-time PCR和Western blot检测发现经benzyl-α-GalNAc处理的HT-29-Gal细胞MUC2的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。侵袭入benzyl-α-GalNAc处理的HT-29-Gal细胞的EPEC和EHEC O157∶H7的数量较对照细胞显著增加(P<0.05)。结论抑制HT-29-Gal细胞黏蛋白O-型糖链的合成导致侵袭入细胞内细菌数量增加和MUC2的表达降低。
- 叶钧宋丽丽刘韵田音潘琼彭志红汪荣泉
- 结肠癌组织miR-200c／141定量表达的临床病理学意义被引量：2
- 2015年
- 目的探讨结肠癌组织mi R-200c/141定量表达与患者临床病理学特征之间的联系。方法实时定量PCR检测49例结肠癌患者癌组织和癌旁组织中的mi R-200c/141的表达水平。分析mi R-200c/141表达量、联合mi R-200c和mi R-141表达量与患者临床病理学特征之间的关系,以及mi R-200c/141表达量在判断患者术后1年预后中的意义。结果结肠癌组织中mi R-200c/141表达水平较癌旁组织明显降低(P=0.0002,P=0.0058)。mi R-141表达量与肿瘤大小和淋巴结转移呈负相关(P<0.05),有淋巴结转移或临床Ⅲ-Ⅳ期患者结肠癌组织中mi R-141的表达量明显低于没有淋巴结转移或临床Ⅰ-Ⅱ期患者癌组织的表达量(P=0.035,P=0.042)。mi R-200c/141表达量与肿瘤大小之间明显相关(P<0.05)。mi R-200c/141的表达量与患者术后1年的生存率无相关关系(P>0.05)。结论结肠癌组织中表达下调的mi R-200c/141与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期有关。
- 孟令宽钟小莉潘琼叶钧尚杨杨郭靖汪荣泉
- 关键词：结肠肿瘤病理学微RNAS
- Core 2和Core 4 O-型糖链参与大肠杆菌对肠上皮细胞的黏附与侵袭被引量：4
- 2014年
- 目的探讨大肠杆菌对Core 2和Core 4 O-型糖链合成障碍的肠上皮细胞的黏附和侵袭的影响。方法采用针对C2GnT-2的干扰质粒和对照质粒对结肠癌HT-29细胞进行转染,通过G418筛选建立稳定转染的细胞系,采用Realtime PCR和Western blot方法检测干扰效率,选取干扰最有效的稳定细胞系与肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)和肠出血性大肠杆菌(EHEC O157∶H7)37℃共培养。最后采用系列稀释克隆计数法观察干扰Core 2和Core 4 O-型糖链合成的C2GnT-2的HT-29细胞对细菌黏附及侵袭的影响。结果成功筛选获得shRNA-C2GnT-2及shRNA-Ctr稳定转染的HT-29细胞。Real-time PCR和Western blot检测证实干扰质粒能够有效地抑制HT-29细胞内C2GnT-2的mRNA及蛋白水平表达(P<0.01),黏附于shRNA-C2GnT-2/HT-29细胞表面的EPEC或EHEC O157∶H7的数量较对照细胞显著减少(P<0.01,P<0.05),而侵袭入shRNA-C2GnT-2/HT-29细胞内的EPEC或EHEC O157∶H7的数量较对照细胞显著增加(P<0.01,P<0.05)。结论 Core 2和Core 4 O-型糖链参与了肠上皮细胞细菌的黏附与侵袭。
- 刘韵叶钧宋丽丽田音潘琼彭志红汪荣泉
- 关键词：大肠杆菌细胞黏附
- Ascl2和microRNA-200家族在结肠癌组织和癌旁组织中的定量表达及二者的相关性分析被引量：4
- 2014年
- 目的探讨Ascl2与MicroRNA-200家族在结肠癌(colorectal cancer,CRC)组织及癌旁组织中的表达及二者的相关性。方法采用实时定量PCR检测50例结肠癌患者的结直肠癌组织及其癌旁组织中Ascl2与MicroRNA-200家族表达,用SPSS 18.0统计软件进行统计分析。结果 Ascl2在癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0.01),除了MicroRNA-429在癌组织中的表达与癌旁组织相比无统计学差异(P=0.2139),MicroRNA-200家族成员在癌组织中的表达都显著低于癌旁组织(P<0.05);且Ascl2和MicroRNA-200家族成员在癌组织中表达都呈负相关(r<-0.5,P<0.05)。结论发现与正常结直肠黏膜组织相比,Ascl2在结直肠癌组织中表达增高,MicroRNA-200家族表达降低,它们在结直肠癌组织中的表达呈现负相关。
- 李姗姗钟小莉尚阳阳潘琼叶钧汪荣泉
- 关键词：结肠癌
- MSAA3蛋白功能片段及其修饰肽对HT29细胞MUC3表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的观察MSAA3蛋白功能片段TFLK合成肽(10-TFLK)及其MAP4修饰肽对高分化状态HT29细胞表达黏蛋白3(MUC3)的影响。方法将10-TFLK和10-TFLK修饰肽以不同浓度(0、50、100、200、400、800μg/ml)和时间(0.5、1、3h)分别刺激促分化后的HT29细胞,采用实时荧光定量PCR检测各组细胞MUC3mRNA的表达变化,并用Western blotting分析不同肽刺激后MUC3蛋白的表达量。结果 HT29细胞MUC3mRNA表达量随处理浓度和时间的不同而不同,以200μg/ml刺激1h后的表达量为最高。10-TFLK刺激后,MUC3mRNA表达量是对照组的3.22±0.24倍,修饰肽10-TFLK-MAP刺激后,MUC3mRNA表达量是对照组的7.37±0.81倍(P<0.01)。10-TFLK和修饰肽10-TFLK-MAP处理后MUC3蛋白表达量分别是对照组的1.52±0.22和4.72±0.51倍(P<0.01)。结论 200μg/ml修饰肽10-TFLK-MAP作用1h对HT29细胞MUC3表达的刺激效果显著强于10-TFLK。MAP4修饰肽可优先应用于动物模型试验中。
- 潘琼彭志红陈文生汪荣泉
- 关键词：肽类
